一种从假叶树中提取分离假叶树皂苷元的方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明属于中药活性成分的分离纯化技术领域，涉及一种植物化合物单体的制备方法，具体涉及一种提取分离假叶树皂苷元的方法，尤其涉及一种从假叶树中提取假叶树皂苷元的方法。
【背景技术】
[0002]假叶树(Ruscus aculeatus)，一种灌木，属于天门冬科假叶树属植物，喜温暖湿润和阳光充足的环境，耐半阴，怕烈日暴晒，不耐寒。原产于欧亚，西欧和地中海沿岸地区。假叶树枝叶浓绿，常作为观叶植物栽培，布置居室、厅堂等处，素雅大方，枝叶干燥后还可染色，作为装饰品使用。另有医学研究证明，假叶树提取物可刺激血管内皮生长因子的产生，用于治疗毛发病症，特别是簇状脱发和男性脱发。此外，假叶树提取物也可与其它外用药物合用诱导VEGF的产生来防止皮肤衰老。多项对照研究证实，假叶树提取物的血管舒缩作用和静脉张力增强作用，比金缕梅和欧洲七叶树强烈得多。
[0003]假叶树皂苷元(ruscogenin)，亦称鲁斯可皂苷元，别名螺可吉宁，主要来源于百合科沿阶草属植物麦冬Oph1pogon Japonicus (Thunb.) Ker-Gawl.的干燥块根，含多种甾体皂甙:麦冬皂甙A、B、C、D均具有抗心肌梗塞，增强心肌收缩力，增加冠脉流量等作用，甙元均为鲁斯考皂苷元，具有明显的抗血栓活性，能降低血清及组织的NO、MDA水平，保护各组织免受自由基攻击，对心、肺作用更明显并下调肺组织TF基因表达，具有很好的药用前景，但由于在原植物中鲁斯考皂苷元极少以原型存在均是以皂苷形式存在，影响了其药效发挥。
[0004]现有文献针对于假叶树皂苷元提取分离的很少，并且主要采用溶剂提取及结晶等常规手段进行假叶树皂苷元单体的分离纯化，效率低，产量少，工艺不稳定，成本较高。
【发明内容】
[0005]本发明旨在克服现有技术的缺陷，提供一种从假叶树中提取分离假叶树皂苷元的方法。该方法操作简便，生产周期短，分离效率高，工艺稳定，成本低廉，可实现工业化假叶树阜苷元单体的高纯度分离制备，得到的假叶树阜苷元单体的纯度达98 %以上，有效成分回收率大于85%。
[0006]为了实现上述发明，本发明采用的技术方案如下:从假叶树中提取分离假叶树皂苷元的方法包括以下步骤:
[0007]I)将假叶树原料粉碎后置于容器中，加入体积分数为65-95%的甲醇或乙醇，加热回流提取3_4次，每次提取时间为1-3小时，合并提取液；
[0008]2)将步骤I)得到的提取液按0.06-0.13BV/分钟的速度通过装有10g处理好的大孔吸附树脂柱，吸附完毕，用60% -90%甲醇或乙醇洗脱，收集洗脱液，采用薄膜减压浓缩，至无溶剂，再过滤，干燥得干燥物；
[0009]3)将上述步骤2)中得到的干燥物加入5% -10%硫酸15mL-30mL，回流3_4h，得到水解混合物，放冷至室温后过滤，收集固体；
[0010]4)将步骤3)得到的固体放置容器中，加入1% -5%氢氧化钠或氢氧化钾溶液，调至中性，用氯仿萃取，室温萃取3-5次，合并萃取液，减压回收溶剂至干燥得粉末；
[0011]5)将步骤4)得到的粉末加入使其刚好溶解的甲醇，并加入与粉末等质量的100-200目硅胶，混匀后烘干，再以一定比例装柱，进行硅胶色谱柱层析，以体积分数65-85%的甲醇或乙醇水溶液为流动相洗脱，薄层层析跟踪监测，收集假叶树皂苷元洗脱液，并浓缩；
[0012]6)将步骤5)所得浓缩物加入5-10倍质量的甲醇或乙醇溶解，并加入活性炭加热回流脱色，过滤，冰浴放置结晶，抽滤，真空干燥至恒重，收集干品，即得假叶树皂苷元单体
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[0013]上述步骤I)中提取溶剂的用量为药材质量:溶液体积为IKg: 4-12L ;
[0014]步骤2)中减压浓缩条件为真空度10.7kPa，温度为70_90°C ；
[0015]步骤3)中最佳水解条件为5%硫酸25mL回流4h ；
[0016]步骤4)中氯仿加入量为固体质量:氯仿体积为IKg: (6-10) L ；
[0017]步骤5)中所述一定比例为粉末:200-300目硅胶的质量比为1: 30_50 ;
[0018]步骤6)中活性炭的加入量为浓缩物的3%-8%质量。
[0019]与现有技术相比，本发明的优点是:
[0020]本发明提高了一种从假叶树中提取分离假叶树皂苷元的方法，该方法采用假叶树作为提取假叶树皂苷元的原料，假叶树原料含量高于传统的麦冬原料，便于后续提取纯化。该发明通过对假叶树药材的粉碎、加热回流提取、大孔树脂吸附联合薄膜减压浓缩，确保了所得的总皂苷浸膏中主要含有皂苷成分，在酸水解之前预先去掉了部分杂质，使得酸水解具有进一步的针对性，采用硅胶柱层析，成本低廉，操作简便，所得洗脱液浓缩后直接进行重结晶即可的纯度较高的产品。本发明所提供的从假叶树原料中提取假叶树皂苷元的方法，优化提取步骤，降低生产成本，依据该方法所得的假叶树皂苷元含量大于98 %，有效成分回收率大于85%。
【具体实施方式】
[0021]下面结合【具体实施方式】对本发明作进一步的详细描述，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述实施例。
[0022]下述各实施例中，终产品假叶树皂苷元单体的纯度检测均采用反相分析型液相色谱(RP-HPLC)法，色谱条件如下:
[0023]流动相:甲醇-水(85: 15);流速 1.0mL/min ；
[0024]色谱柱填料为C1S，粒度为5um，色谱柱内径为4.6mm,长度为150mm ；
[0025]检测波长为205nm。
[0026]实施例1:
[0027]方法包括以下步骤:
[0028]取假叶树原料10kg，粉碎后置于容器中，加入60L体积分数为70%的甲醇，加热回流提取4次，每次提取时间为2小时，合并提取液；将提取液按0.08BV/分钟的速度通过装有10g处理好的大孔吸附树脂柱，吸附完毕，用80%甲醇洗脱，收集洗脱液，于真空度10.7kPa，温度为70-90°C条件下采用薄膜减压浓缩，至无溶剂，再过滤，干燥得干燥物；将干燥物加入5%硫酸25mL，回流3h，得到水解混合物，放冷至室温后过滤，收集固体；固体放置容器中，加入5%氢氧化钠溶液，调至中性，以固体质量:氯仿体积为IKg: 8L的用量加入氯仿萃取，室温萃取3次，合并萃取液，减压回收溶剂至干燥得粉末；将粉末加入使其刚好溶解的甲醇，