一种愈创木烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，特别涉及从现有中成药制剂中提取的愈创木烷型倍半 萜类化合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 热毒宁注射液（国药准字Z20050217)为江苏康缘药业股份有限公司自主研发的 原中药二类新药，其处方为青蒿、金银花、栀子，辅料为聚山梨酯80。热毒宁注射液在外感风 热所致感冒、流感、咳嗽、上呼吸道感染等疾病的临床治疗中应用广泛，其作用迅速、效果显 著。
[0003] 研究人员在热毒宁注射液中发现了新的化学成分，并且发现此化合物在各个批次 的热毒宁注射液中均稳定存在。经查阅文献可知，这是首次在热毒宁注射液中发现并鉴定 出的新的化学成分，并经过Scifinder scholar检索发现该化合物为新化合物。
【发明内容】
[0004] 本发明从热毒宁注射液中制备提取出一种具有生物活性的愈创木烷型倍半萜类 化合物，并提供了其在制备治疗手足口病药物中的应用。
[0005] 具体地说，本发明提供了一种愈创木烷型倍半萜类化合物，其结构如1所示：
[0006]
[0007] 本发明还提供了上述化合物的制备方法，包括如下步骤：
[0008] (1)取热毒宁注射液成品，经HP-20大孔吸附树脂柱色谱分离，依次以水、30%乙 醇、90~100 %乙醇梯度洗脱，分别收集各洗脱液，减压浓缩至无醇味，得到水洗脱部位、 30%乙醇洗脱部位、90~100%乙醇洗脱部位；
[0009] (2)取步骤（1)的90~100%乙醇洗脱部位，经硅胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇梯 度洗脱，以氯仿-甲醇体积比为95 : 5的洗脱液洗脱3~5BV，洗脱液合并，标记为馏分A， 馏分A经SephadexLH-20柱色谱分离，氯仿-甲醇等体积、等度洗脱，去除色素带后，收集馏 分，标记为A-2,馏分A-2经0DS柱色谱分离，用甲醇-水梯度洗脱，其中甲醇浓度为50%~ 70%，收集甲醇-水体积比为3 : 2的馏分A-2-2,馏分A-2-2经半制备液相分离，得到本发 明化合物。
[0010] 上述制备方法中，步骤（2)所述半制备液相色谱，以比例为25 : 75的乙腈-水为 流动相，检测波长为208与220nm，流速4mL/min，柱温为常温。在半制备液相上，本发明化 合物的保留时间分别为28. 4min。
[0011] 发明人通过理化性质和现代波谱学手段（UV、IR、MS、⑶、1H-NMR、13C-NMR和 2D-NMR)对分离得到的化合物进行了结构鉴定，证实其为结构如式1所示的愈创木烷型倍 半萜类化合物。
[0012] 本发明的另一个目的在于提供一种图1所示化合物在制备治疗手足口病药物中 的应用。发明人发现本发明化合物对手足口病EV71病毒有一定的抑制作用。
[0013] 本发明的再一个目的在于提供一种药物组合物，包含上述图1所示化合物。
[0014] 本发明还提供了一种治疗手足口病的药物组合物，含有治疗有效量的上述图1化 合物以及一种或多种药学上可接受的载体。
【附图说明】
[0015] 图 1 为化合物1 的HR-ESI-Q-T0F-MS
[0016] 图2为化合物1的1H-NMR谱
[0017] 图3为化合物1的13C_NMR谱和DEPT-135谱
[0018] 图4为化合物1的结构片段a，b和c
[0019] 图5为化合物1的HMBC谱
[0020] 图6为化合物1的1Η」ΗCOSY谱
[0021] 图7为化合物1的N0ESY谱
[0022] 图8为化合物1的⑶谱
[0023] 图9为化合物1的HSQC谱
[0024] 图10为化合物1的结构式
【具体实施方式】
[0025] 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对 本发明作进一步的详细说明。
[0026] 实施例1本发明化合物的制备
[0027] (1)取热毒宁注射液成品，经HP-20大孔吸附树脂柱色谱分离，依次以水、30%乙 醇、90~100 %乙醇梯度洗脱，分别收集各洗脱液，减压浓缩至无醇味，得到水洗脱部位、 30%乙醇洗脱部位、90~100%乙醇洗脱部位；
[0028](2)取步骤（1)的90~100 %乙醇洗脱部位，经硅胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇 梯度洗脱，以氯仿-甲醇体积比为95 : 5的洗脱液洗脱3~5BV，洗脱液合并，标记为馏分 A7.8g，馏分A经SephadexLH-20柱色谱分离，氯仿-甲醇等体积、等度洗脱，去除色素带后， 收集馏分，标记为A-25. 4g，馏分A-2经0DS柱色谱分离，用甲醇-水梯度洗脱，其中甲醇浓 度为50%~70%，收集甲醇-水体积比为3 : 2的馏分A-2-285mg，馏分A-2-2经半制备液 相分离，得到本发明化合物。
[0029] 半制备液相HPLC分离，以25 : 75的乙腈-水为流动相，检测波长为208与220nm， 流速4mL/min，在半制备液相上本发明化合物的保留时间分别为28. 4min。分离所得溶液干 燥，得到本发明化合物14. 5mg。
[0030] 实施例2本发明化合物的结构鉴定
[0031] 化合物1为黄色无定性固体。ESI-MS(positive)给出m/z323[M+Na]+; ESI-MS(negative)给出m/z299[M-H] ，345[M+HC00]，提示化合物分子量为 300。 HR-ESI-Q-T0F-MS给出m/z301. 1646[M+H] + (计算值为301. 1651)(见图1)确定化合物分子 式为C15H2406，计算不饱和度为5。
[0032] 化合物1的1H-NMR(600MHz，in⑶观）（见图2)的高场区可以观察到4个明显的 甲基信号，其中3个甲基呈单峰[δ1.36 (3H，s)，1.38 (3H，s)，1.76 (3H，s)]，表明其与季碳 直接相连；另外1个甲基信号为d峰[δ1. 06 (3Η，d，J= 7. 1Hz)]，表明其与叔碳直接相连。 13C-NMR(100MHz，inCD30D)结合DEPT-135谱（见图3)共显示15个碳信号，包括4个甲基 (δ26. 4, 25. 4,18. 5,8. 9)，3 个亚甲基（δ40. 7, 37. 5, 29. 8)，2 个次甲基（δ77. 4, 34. 1)，以 及6个季碳信号[1个羰基（δ209. 7)，3个连氧SP3杂化季碳（δ94. 0, 79. 1，79. 0)，1对四 取代双键[(S166. 3,144. 6)]。综合以上NMR数据和不饱和度信息，可以推测本发明化合物 可能为1个倍半萜类化合物，结构中含有4个甲氧基、2个环、1个酮羰基和1个双键。根据 化合物的HSQC谱（见图9)，对化合物的碳氢信号进行了归属。
[0033]如所示：根据HMBC(图 5)相关峰H-15/C_3,4,5 和H-2/C_l，3,5,推出α，β-不 饱和环戊酮的结构片段a(图4)。4-?COSY实验中（见图6)，可见Η-8/Η-9/Η-10,Η-10/ CH3-14 的相关峰，结合H-6/C-l，4,5,7 的HMBC远程相关；CH3-14/C-1，10,9 和H-8/C-7,9， 10的HMBC远程相关，构建环庚烷的结构片段b(图4)。两个单峰甲基CH3-12和CH3-13与 C-7和C-11均具有HMBC远程相关，推测结构中含有片段c(图4)。在已经推定的3个结构 片段中，我们