异喹啉-3-甲酰-RI-OBzl,其制备,纳米结构,活性和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及异哇晰-3-甲醜-Arg肿-N02)-IIe-OBz及其制备方法， Arg肿-N02)-Ile简称RI。涉及他们的体外肿瘤细胞增殖抑制活性，进一步涉及它们对荷 S180小鼠肿瘤生长的抑制作用。因而本发明涉及它们在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明 属于生物医药领域。
【背景技术】
[0002] 癌症是一组可影响身体任何部位的多种疾病的通称。使用的其它术语为恶性肿瘤 和赏生物。据世界卫生组织统计，癌症是世界上的头号死因之一，尤其是在发展中国家。而 全世界癌症死亡人数预计将继续上升，到2030年将超过1310万。因此，开发新的高效、低 毒、毒副作用小的抗肿瘤药物一直是新药研究的重要课题之一。
[0003] 随着对肿瘤特性和发病本质的认识，最近几年抗肿瘤药物不断从传统的细胞毒 药物向发展非细胞毒药物过渡。目-巧晰是天然来源的细胞毒性抗肿瘤化合物。发明人 认识到，目-巧晰抗肿瘤的细胞毒性本质是与肿瘤细胞DNA之间的嵌插。送种形式的杆 插可造成细胞毒性。发明人曾经发现，目-巧晰可W插入肿瘤细胞DNA之间的双螺旋碱 基之间。在进一步的研究中，发明人认识到，目-巧晰的抗肿瘤活性来自嵌插。发明人还 认识到，在目-巧晰的1位引入二肤生成目-巧晰-3-駿酸予醋及衍生物可增强目-巧 晰与肿瘤细胞的作用，增强抗肿瘤活性。根据送些认识，发明人提出下式的异哇晰-3-甲 醜-Arg肿-N02)-Ile-OBzl。与发明人前期的发明的异哇晰-3-甲醜氨基酸予醋相比，本 发明的突出创造性在于在3-甲醜基与11e-OBz1基之间插入Arg(N6-N02)，保留了异哇 晰-3-甲醜氨基酸予醋与肿瘤细胞DNA之间的嵌插作用，又可W通过插入Arg(N6-NOz)延缓 代谢，使得它们的有效剂量大幅度降低。此外，还可W引起肿瘤细胞自瞻。自瞻是肿瘤细胞 在营养缺乏的环境中增殖的重要途径，诱导肿瘤细胞自瞻可W损伤肿瘤细胞而不损伤非肿 瘤细胞，因而可W降低毒性。于是，异哇晰-3-甲醜-Arg(妒-N〇2)-Ile-〇Bzl可W显示更好 的抗肿瘤活性。
[0004] 发明的内容
[0005] 本发明的第一个内容是提供下式的异哇晰-3-甲醜-Arg(N6-NOz)-Ile-OBzl。
[0006]
[0007] 本发明的第二个内容是提供异哇晰-3-甲醜-Arg(N6-NOz)-Ile-OBzl的制备方法， 该方法包括W下步骤：
[0008] (I)将心苯丙氨酸在35 %盐酸的催化下与甲醒进行Pictet-Spengler缩合，得到 四氨异哇晰-3-駿酸；
[0009] (2)将四氨异哇晰-3-駿酸在甲醇溶液中，冰浴下用氯化亚讽催化得到四氨异哇 晰-3-駿酸甲醋；
[0010] (3)将四氨异哇晰-3-駿酸甲醋在无水的N，N-二甲基甲醜胺值M巧溶液中，用高 儘酸钟为氧化剂得到异哇晰-3-駿酸甲醋；
[0011] (4)在化OH存在下，在甲醇中将异哇晰-3-駿酸甲醋皂化为异哇晰-3-駿酸；
[001引 （5)在二环己基碳二亚胺值CC)和N-居基苯并H哇（HOBt)存在下，Boc-Arg(N02) 在无水DMF中与Ile-OBzl缩合为Boc-Arg(N02)-IIe-OBzl;
[001引 （6)在氯化氨-己酸己醋溶液中Boc-Arg(NOz)-IIe-OBzl脱去Boc生成 Arg(N02)-IIe-OBzl；
[0014] (7)在DCC和HOBt存在下，异哇晰-3-駿酸在无水DMF中与Arg(N〇2)-Ile-〇Bzl 缩合得到异哇晰-3-甲醜-Arg(N6-N02) -Ile-OBzl。
[0015] 本发明的第H个内容是评价异哇晰-3-甲醜-Arg(N6-NOz)-Ile-OBzl对肿瘤细胞 增殖的抑制作用。
[0016] 本发明的第四个内容是评价异哇晰-3-甲醜-Arg(N6-NOz) -Ile-OBzl抑制S180肿 瘤小鼠肿瘤生长的作用。
[0017] 本发明的第五个内容是测定异哇晰-3-甲醜-Arg(N6-NOz)-Ile-OBzl的纳米结构。
[0018] 本发明的第六个内容是阐述异哇晰-3-甲醜-Arg(N6-NOz)-Ile-OBzl对细胞周期 的影响。
[0019] 本发明的第走个内容是阐述异哇晰-3-甲醜-Arg(N6-NOz)-Ile-OBzl诱导细胞自 瞻的作用。
【附图说明】
[0020] 图 1 化合异哇晰-3-甲醜-Arg(NG-N〇2)-Ile-〇Bzl的合成路线.i)HCH0,35% 肥1 ; U)SOClz,CH3OHiii)DMF,KMn〇2;iv)NaOH，CH3OH;v)DCC，HOBt,DMF;vU2NHCl/化OAc。图 2化合物异哇晰-3-甲醜-Arg(N6-N〇2)-Ile-〇Bzl在纯水环境中105M浓度下的透射电镜照 片。
【具体实施方式】
[0021] 为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。送些实施例完全是例证性的，它 们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0022] 实施例1制备四氨异哇晰-3-駿酸
[002引称取k苯丙氨酸Ig,加入2. 4血的甲醒，再加入8血35 %的盐酸，溶液先澄清后析 出白色物质，油浴8(TC，反应8小时。反应结束后，除去溶剂，置于茄瓶中。加入己離超声 揽拌1小时，反复磨洗，过滤，得到0.91g(85%)四氨异哇晰-3-駿酸，为无色固体。烙点 246-247 °C。ESI-MS(m/e) : 176 [M-田。
[0024] 实施例2制备四氨异哇晰-3-駿酸甲醋
[00巧]向50ml的茄型瓶中加入6ml的甲醇，0. 4ml的二氯亚讽，揽拌，活化30min，冰 浴。加入四氨异哇晰-3-駿酸239mg，冰浴下反应12小时。抽干溶剂，再加甲醇，反复抽 干3次；加入己離3次，抽干，得到213mg(82. 5% )四氨异哇晰-3-駿酸甲醋，为无色粉末。 ESI-MS(m/e) : 192[M+H]+。
[0026] 实施例3制备异哇晰-3-駿酸甲醋
[0027] 用无水DMF将四氨异哇晰-3-駿酸甲醋213mg溶解，加入蒸傭水溶解的高儘酸钟 溶液，在冰浴下缓慢加入，室温下反应24小时。反应结束后，将DMF吹干，用甲醇将黑色粉 末溶解后过滤，滤液旋干。柱层析分离纯化。得到77mg(37%)异哇晰-3-駿酸甲醋，为微 黄色固体。3' = 0.25(二氯甲焼：甲醇，20:1)出51-]\15(111/6):188[]\1+田+;电醒1?〇^5〇-(16， 500MHz) 5/ppm= 9.421 (s，lH)，8.666 (s，lH)，8.258 (d，J= 4Hz，lH)，8.22 (d，J= 4Hz, 1H)，7. 897 (m，2H)，3.944 (s，3H)。
[0028] 实施例4制备异哇晰-3-駿酸
[0029] 将Ig异哇晰-3-駿酸甲醋用甲醇溶解，调PH值为12,室温下反应。反应4小时 结束后，调PH值为7,旋除甲醇，调PH值为4,有固体析出，过滤，得到370mg(40% )异哇 晰-3-駿酸，为无色固体。Mp231-232°C;ESI-MS(m/e) :172[M-田。
[0030] 实施例 5 制备Boc-Arg(N02)-Ile-OBzl
[0031] 将Boc-Arg(N02) 3g溶于无水DMF中，冰浴下加入HCffit和DCC的无水DMF溶液，冰浴 揽拌20min，得到活泼醋溶液A待用。将Ile-OBz12.Ig溶于无水DMF中，NMM调节PH为8-9， 得到溶液B。将B倒入A中，室温反应12小时。反应结束后，将反应液减压浓缩至干，用己酸 己醋溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氨钢、饱和氯化钢水溶液各洗3遍。分出醋层， 无水硫酸钢干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化，得到2. 8g(57% )Boc-Arg(N〇2)-Ile-〇Bzl, 为无色固体。Rf=O. 25(二氯甲焼：甲醇，20 :I) ;ESI-MS(m/e) :509[M+田+。
[0032] 实施例 6 制备Arg(N02)-Ile-OBzl
[0033] 称取Boc-Arg(N〇2)-Ile-〇Bzllg于茄瓶中，加入3N肥1化OAc约10血。TLC监测 反应进度，反应4小时反应结束。水泉抽干液体，加入己酸己醋溶解，反复3次；再用无水己 離磨洗3次，得到0. 9mg(99 % )Arg(N02)-IIe-OBzl,为无色粉末。
[0034] 实施例7制备异哇晰-3-甲醜-Arg肿-N02) -Ile-OBzl(1)
[0035] 将异哇晰-3-駿酸0. 37g溶于无水DMF中，冰浴下加入HCffit和DCC的无水DMF溶 液，冰浴揽拌20min，得到活泼醋溶液A待用。将Arg(N02) -11e-OBz11g溶于无水DMF中，NMM 调节PH为8-9,得到溶液B。将B倒入A中，室温反应14小时。反应结束后，将反应液减压 浓缩至干，用己酸己醋溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氨钢、饱和氯化钢水溶液各 洗3遍。分出醋层，无水硫酸钢干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化，得到0. 36g(27 % )异哇 晰-3-甲醜-Arg(NG-N〇2)-Ile-〇Bzl，为无色固体。ESI-MS(m/e) ;578[M+田+;mp;78-8rC;
[a]己0=-0.973(c= 0.48,CH30H);IR(邸r) :3305.99,3294. 42,2962.66,2935.66， 2877. 79,1735. 93,1654. 92,1624. 06,1600. 92,1516. 05,1458. 18,1438.90,1388.75， 1261. 45,1192. 01,1145. 72,906. 54,767. 67,748. 38,694. 37 ;iHNMR(DMS〇-de，300MHz) 5 / ppm= 9. 4(s，lH)，8. 845(d,J= 9Hz，lH)，8. 58(s，lH)，8. 485(d,J= 9Hz，lH)，8. 26(d，J =6Hz，lH)，8. 205(d,J= 9Hz，lH)，7. 86(m，3H)，7. 32(m，5H)，5. 135(m，2H)，4. 765(m，lH), 4. 33 (t，J= 9Hz，IH)，3. 16 (d，J= 9Hz，2H)，I. 78 (m，3H)，I. 57 (d，J= 6Hz，2