与颅内动脉瘤相关的微小rna的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，设及miR-193b在诊治烦内动脉瘤中的用途。
【背景技术】
[0002] 烦内动脉瘤（IntracranialAneu巧sm)是指多种因素造成的烦内动脉壁结构破 坏，进而导致的动脉壁异常膨出。烦内动脉瘤发病率较高，尸体解剖检出率约为1-5%。烦 内动脉瘤破裂出血后30天的死亡率达45%，存活者中30 %存在不同程度的残疾，严重威胁 人类的生命健康。然而，关于烦内动脉瘤的发病机制并不明确，其可能与遗传、高血压、血流 动力学、获得性血管壁损伤有关。
[0003] 微小核糖核酸，英文名为microRNA，是一类长约19至23个核巧酸的非编码单链小 核糖核酸分子。它们在进化上高度保守，并与动物的许多正常生理活动，如生物个体发育、 组织分化、细胞调亡W及能量代谢等密切相关，同时也与许多疾病的发生及发展存在着紧 密的联系。最近的研究发现慢性淋己细胞性白血病W及Burkitt淋己瘤中的几种微小核糖 核酸的表达水平均有不同程度的下调（Xawrie CH，Gal S，Dunlop HM et al. Detection of elevated levels of tumor-associated microRNAs in serum of patients with diffuse large B-cell lymphoma. Br J Haematol2008;141 :672-675);分析比较人肺癌、乳腺癌组 织中的微小核糖核酸表达时，发现有若干组织特异性微小核糖核酸的表达水平相对于正常 组织发生了变化（Garofalo M，如intavalle C，Di Leva G etal.MicroRNA si即atures of TRAIL resist曰nee in human non-sm曰11 cell lung c曰ncer. Oncogene 2008)〇也有石开究 证明微小核糖核酸影响了屯、肌肥厚、屯、衰、动脉粥样硬化等屯、血管疾病的发生和发展，并且 与II型糖尿病等代谢性疾病有密切关联灯巧ndyak VP，Ross SA，Beland
[0004] FA, Pogribny IP. Down-regulationof the microRNAs miR-；34a，miR-127，and miR-200b in rat liver during hep曰tocarcinogenesis induced by曰methyl-deficient diet. Mol Carcinog. 2008 0ct21)。运些实验结果提示微小核糖核酸表达及特异性变化与 疾病发生和发展之间存在着必然联系。 阳0化]由于微小核糖核酸在基因转录后的表达调控中起着超乎想象的重要作用，因此它 与疾病存在W下的关联性：首先，微小核糖核酸的变化可能是病因，运是因为疾病的抑制 因子W及促进因子都可能是微小核糖核酸的祀位点，当微小核糖核酸本身先发生了素乱表 达，比如本来抑制疾病促进因子的微小核糖核酸表达量降低了，或者抑制疾病抑制因子的 微小核糖核酸表达量升高了，其最终结果都会导致下游一系列基因表达的变化W及某些通 路的整体素乱，进而诱发疾病发生；其次，微小核糖核酸的变化也可能是疾病的结果，运是 因为当疾病（如癌症）发生时，会导致染色体片段的丢失、基因的突变或者染色体片段的剧 烈扩增，若微小核糖核酸正好位于运一变化区段内，那么其表达量将发生极其显著的变化。
[0006] 因此，理论上微小核糖核酸分子完全可W作为一类新的疾病标记物，它的特异性 变化必然与疾病产生发展相关联。同时微小核糖核酸还可W作为潜在的药物作用祀点，通 过抑制疾病过程中上调的微小核糖核酸或过表达下调的微小核糖核酸，将有可能极大地缓 解疾病的发生和发展。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的之一在于提供一种可用于早期诊断烦内动脉瘤的微小RNA标记物。
[0008] 本发明的目的之二在于提供上述微小RNA的用途。
[0009] 为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
[0010] 本发明提供了一种微小RNA在制备烦内动脉瘤诊断工具中的应用，所述微小RNA 选自W下组：初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA;初始miRNA能在人细胞内被剪切并表 达成成熟miRNA;前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA;所述微小RNA是 miR-193b。
[0011] 应当知道，本发明的微小RNA包括组成型核酸分子的功能等同物，即变体，其显示 完整微小RNA核酸分子相同的功能，尽管它们通过核巧酸残基的缺失、置换或者插入而突 变。
[0012] 本领域人员应该了解，为了保证微小RNA的稳定性，可W在微小RNA的一端或者两 端增加保护性碱基，如TT，也可对微小RNA碱基进行修饰，但是上述修饰不影响微小RNA的 功能。因此，本领域技术人员熟知，在不影响miR-193b功能的条件下，对miR-193b进行碱 基修饰或者在两端增加碱基获得的序列同样包含在本发明的保护范围之内。
[0013] 在本发明的一些具体的实施方式中，所述miR-193b是成熟miR-193b。
[0014] 虽然在某些【具体实施方式】中所使用的是成熟miRNA,但是本领域技术人员可W预 期，初始miRNA、前体miRNA将可W获得与成熟miRNA同样的技术效果，因为细胞有能力进一 步将初始miRNA、前体miRNA加工为成熟miRNA。
[0015] 本发明的微小RNA核酸分子可单链或双链的形式存在。成熟miRNA主要呈单 链形式，而前体miRNA是部分自互补的，W形成双链结构。本发明的核酸分子可W是RNA、 DNA、PNA、LNA的形式。
[0016] 进一步，上述诊断工具包括但不限于，忍片、试剂盒、试纸、高通量测序平台。所述 诊断工具包括用于检测miR-193b的表达水平的试剂。
[0017] 进一步，所述试剂盒包括针对miR-193b的引物和/或探针；所述忍片包括固相载 体；W及固定在所述固相载体上的寡核巧酸探针，所述寡核巧酸探针包括特异性地对应于 miR-193b的部分或全部序列；所述试纸包括针对miR-193b的引物和/或探针；所述高通量 测序平台包括针对miR-193b的引物和/或探针。
[0018] 本发明提供了一种烦内动脉瘤的诊断工具，所述诊断工具包括检测miR-193b表 达水平的试剂。
[0019] 进一步，所述诊断工具包括试剂盒、忍片、试纸、高通量测序平台。
[0020] 进一步，所述试剂盒包括针对miR-193b的引物和/或探针；所述忍片包括固相载 体；W及固定在所述固相载体上的寡核巧酸探针，所述寡核巧酸探针包括特异性地对应于 miR-193b的部分或全部序列；所述试纸包括针对miR-193b的引物和/或探针；所述高通量 测序平台包括针对miR-193b的引物和/或探针。
[0021] 进一步，所述试剂盒中的针对miR-193b的引物和/或探针还可包括针对现有技术 中已经报道的可用于检测前面所述的微小RNA表达水平的引物和/或探针。将多种微小 RNA的检测引物和/或探针放置在同一试剂盒中通过检测多种微小RNA指标联合诊断烦内 动脉瘤的情况也包含在本发明的保护范围之内。
[0022] 进一步，所述忍片上固定的所述寡核巧酸探针还可包括针对现有技术中已经报道 的可用于检测miR-193b的表达水平的寡核巧酸探针。将多种miRNA的检测探针放置在同 一忍片上通过检测多种miRNA指标联合诊断烦内动脉瘤也包含在本发明的保护范围之内。
[0023] 进一步，所述固相载体包括所述固相载体可采用基因忍片领域的各种常用材料， 例如但不限于尼龙膜，经活性基团（如醒基、氨基等）修饰的玻片或娃片、未修饰的玻片、塑 料片等。
[0024] 所述的miRNA忍片的制备可采用本领域已知的生物忍片的常规制造方法，例如， 如果固相载体采用的是修饰玻片或娃片，探针的5'端含有氨基修饰的聚dT串，可将寡 核巧酸探针配制成溶液，然后采用点样仪将其点在修饰玻片或娃片上，排列成预定的序 列或阵列，然后通过放置过夜来固定，就可得到本发明的miRNA忍片。如果核酸不含氨 基修饰，则其制备方法也可参照：王申五主编的《基因诊断技术-非放射性操作手册》； J.L.erisi,V.R.Iyer,P. 0.BROWN.Exploringthemetabolicandgeneticcontrolof geneexpressiononagenomicscale.Science, 1997 ;278 :680和马立人，蒋中华主编.生 物忍片.北京：化学工业出版社，2000,1-130。 阳0巧]本发明的miR-193b可W是天然的或是人工合成的，或者使用可W表达miR-193b的DM片段的载体转染细胞获得。所述载体包括病毒载体、真核载体。
[0026] 病毒载体可W是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺 病毒相关病毒载体、瘤疹病毒（例如