一种烟草内生生防菌的接种方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于烟草病害防治技术领域，具体设及一种烟草内生生防菌的接种方法。
【背景技术】
[0002] 植物内生菌是指在其生活史的一定阶段或全部阶段，生活于健康植物的各种组织 和器官的细胞间隙或细胞内的微生物，包括植物内生真菌、内生细菌和内生放线菌。植物内 生菌几乎存在于所有已研究过的植物中，分布广，种类多。内生菌产生丰富多样的次生代谢 产物，具有多种生物活性，在农业和医药业具有重要的应用潜力。内生菌与其寄主植物共同 进化，生活在植物体内，植物为内生菌提供了一个稳定且有保护性的环境和充足的营养来 源，运些特性使其有可能作为潜在的生防因子而加W研究和利用。
[0003] 具有生物防治作用的内生菌称为内生生防菌。用内生细菌进行生物防治的原理， 主要是利用内生细菌在植物体内产生的一些抗生素对病原菌的括抗作用，有些内生细菌能 产生杀菌蛋白，也能起到杀灭病原菌的作用；有些内生细菌能产生几下质酶，可W裂解真菌 性病原菌的细胞壁从而起到生防作用。另外，内生细菌定殖在植物体内实际上是占据了植 物体内的生态位点，由于位点和生存空间的限制，阻止了病原菌的入侵和定殖。内生细菌还 可W与病原菌形成营养竞争的对抗关系，使病原菌因得不到正常的营养供给而消亡。
[0004] 烟草是叶用经济作物，对烟草的外观和内在质量有特殊的要求，农药残留、病原菌 抗药性W及对卷烟卫生的影响限制了农药的大规模使用，因此有必要探讨烟草病害的最佳 控制途径，寻找新的防治措施W克服烟叶农药残留和病原菌抗药性问题。烟草内生菌种类 较多，是宝贵的微生物资源库，在烟草病害生物防治、烟草促生菌剂开发及降低烟草有害物 质等方面有着巨大的应用潜力。可W人工筛选对病原菌有抑制作用的内生菌，得到具有防 病活性的内生生防菌。通过人工接种方法将具有防病活性的内生菌接种到烟草植株内，发 挥内生菌的防病作用。 阳〇化]目前，常用的人工接种内生菌的方法主要有W下Ξ种：一是灌根接种法，用内生菌 悬浮液诱灌植株根际，可W使内生菌进入植物根茎内；二是浸种接种法，在播种前将植物的 种子在含有内生菌悬浮液中浸泡一定时间，在生长出得植物体内可W检测到被标记的内生 菌；Ξ是涂抹或喷洒叶片接种法，将内生菌液涂抹或喷洒至植物叶片，也可将内生菌菌株接 种至多种植物体内。上述方法都是在不损伤植物的前提下进行外部接种的方法，接种成功 率低，内生生防菌在植株体内的定殖成活率低，防病效果差，不适合大规模使用。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种烟草内生生防菌的接种方法，接种成功率高，内生生防 菌在植株体内的定殖成活率高，防病效果好，适合大规模应用。
[0007] 为了实现W上目的，本发明所采用的技术方案是：
[0008] 一种烟草内生生防菌的接种方法，包括在烟草剪叶后，将烟草内生生防菌菌液喷 洒或涂抹至烟草剪叶伤口，使烟草内生生防菌通过剪叶伤口定殖到烟草植株内。
[0009] 烟草剪叶是烟草幼苗在移栽定植前对叶片进行适当剪除，是现代烟草种植中必要 的环节。剪叶的作用主要是：培育更发达的根系；获得更粗壮的茎；使幼苗个体间均衡生 长；控制早花；使幼苗更适应定植等。利用烟苗地上部和地下部的相关性原理，通过剪叶调 控烟苗生产，避免形成高脚苗，增加茎粗、促进根系发育，提高抗逆性。
[0010] 烟草剪叶的操作可采用本领域常规剪叶技术根据烟苗长势长相进行；当当烟苗生 长到五叶一屯、，茎高至少5cm，完全封盘之时开始第一次剪叶；之后5~7天剪第二次，依此 类推，最后一次剪叶宜在移栽前5天左右；天气而言，晴天上午，而且必须在露水干后进行。
[0011] 本发明的烟草内生生防菌的接种方法，在原有烟草种植必须剪叶的基础上，在烟 草剪叶后，将烟草内生生防菌菌液喷洒或涂抹至烟草剪叶伤口，烟草内生生防菌很容易通 过剪叶伤口定殖到烟草植株内，接种成功率高，内生生防菌在植株体内的定殖成活率高，从 而达到显著的防治病害的效果；不需要对烟草植株造成额外的机械伤口，操作简单，省时省 力，适合大规模应用；可W在剪叶的同时进行剪叶伤口接种，避免了其他病原菌通过剪叶伤 口进入烟草植株内，从而避免了剪叶伤口受病毒、细菌等杂菌的浸染，防止病害的传染，在 实际生产中具有广泛的应用价值。
[0012] 所述的烟草内生生防菌的接种方法中，在烟草剪叶后化内，将烟草内生生防菌菌 液喷洒或涂抹至烟草剪叶伤口。上述接种方法中，优选在烟草剪叶之后立即将烟草内生生 防菌菌液喷洒或涂抹至烟草剪叶伤口，避免剪叶伤口受病毒、细菌等杂菌的浸染；如间隔时 间过长，其他病原菌通过剪叶伤口进入烟草植株内，接种时还要对伤口进行人工消毒，不仅 费时费力，而且农药消毒会对烟草、环境及人类造成安全隐患，农药残留会给卷烟卫生带来 不良影响。
[0013] 所述烟草内生生防菌为烟草内生细菌。优选的，所述烟草内生生防菌菌液中所 含的烟草内生生防菌为解淀粉芽抱杆菌或烟草赖氨酸芽抱杆菌。所述的解淀粉芽抱杆菌 优选为专利文件CN102925393B记载的兼抗根结线虫和烟草疫霉的烟草内生菌-解淀粉芽 抱杆菌BacillusamyloliquefaciensZY-9-13菌株；所述的烟草赖氨酸芽抱杆菌优选为 专利文件CN102851245B记载的抗烟草青枯病的烟草内生菌菌株-烟草赖氨酸芽抱杆菌 化ysinibacillustobaccocum化pa菌株。相对应的烟草内生生防菌菌液的制备方法可参照 专利文件CN102925393B、CN102851245B的记载。
[0014] 所述烟草内生生防菌菌液中，烟草内生生防菌的活菌数不低于IXl〇Sc化/ml。
[0015] 所述烟草内生生防菌菌液的喷洒或涂抹量为1~1. 5ml/株。
[0016] 本发明的烟草内生生防菌的接种方法中，适用的烟草内生生防菌并不局限于上述 所列，现有技术中用于烟草生物防治的烟草内生生防菌都是可用的；优选的，所述烟草内生 生防菌优选芽抱杆菌类生防菌。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合【具体实施方式】对