真菌单孢挑取器及用其进行植物病原真菌分离纯化的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种真菌单抱挑取器及用其进行植物病原真菌分离纯化的方法。
【背景技术】
[0002] 在研究园林植物病害时，必须进行病原分离、鉴定、致病性测定及接种等一系列试 验，拥有菌株纯种十分必要。对于病原真菌来说，进行单抱分离是获得纯株的重要手段之 一。单抱的获取有多种方法，如组织捣碎法、沉淀法、稀释平板法、挑取法等。其中，挑取法 相对其他几种方法来说简单方便，适于在显微镜的10倍、25倍物镜下操作。
[0003] 通用的挑取法，是直接用手持细针从培养基上挑取单个抱子，再转移至PDA培养 基上，在25°C下进行培养。由于操作是在显微镜下进行的，左手需要调节推进器，W便将需 要挑取的抱子置于物镜下，同时，右手持针对准要挑取的抱子，手的轻微颤动，便不能挑取 到单个抱子，常常造成操作费时费力，操作失败。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种操作省力、方便、挑取准确、效果好的真菌单抱挑取器， 同时提供一种成功率高且便捷高效的病原真菌分离纯化的方法。 阳〇化]本发明采用如下技术方案： 一种真菌单抱挑取器，其包括主螺杆、位于主螺杆下部的轴向移动装置、位于主螺杆上 部的横向移动装置、与轴向移动装置固定连接的夹持装置W及与横向移动装置固定连接的 挑取装置；所述轴向移动装置沿主螺杆轴向移动；所述横向移动装置垂直于主螺杆轴向移 动。
[0006] 进一步的，所述主螺杆为金属材质，优选304不诱钢。
[0007] 进一步的，所述挑取装置包括水平贯穿横向移动装置的挑针调节螺钉、设置在挑 针调节螺钉端部的挑针固定槽W及与挑针固定槽固定连接的挑针；所述挑针设置有直角针 W、 大。
[0008] 进一步的，所述挑针的直角针尖在竖直方向上背向轴向移动装置。
[0009] 进一步的，所述夹持装置包括与轴向移动装置上端固定连接的卡板和与轴向移动 装置下端固定连接的紧固板；所述卡板端部设置有卡槽；所述紧固板上设置有紧固螺钉。
[0010] 进一步的，所述卡槽的槽深为0. 5畑1，槽长1.5~2畑1，卡舌厚0. 1~0. 2畑1，卡口宽1~1. Schid
[0011] 进一步的，所述轴向移动装置包括套置在主螺杆外的第一移动块、设置在第一移 动块内的第一螺杆W及位于第一螺杆端部的轴向调节旋钮；所述第一螺杆与主螺杆晒合实 现第一移动块沿主螺杆轴向移动；所述卡板和紧固板分别与第一移动块的上端和下端固定 连接。
[0012] 进一步的，所述横向移动装置包括与主螺杆固定连接的第一固定块、穿置于第一 固定块上且与主螺杆轴向垂直的第二螺杆、与第二螺杆固定连接的第二固定块、设置在第 一固定块内的第Ξ螺杆W及位于第Ξ螺杆端部的横向调节旋钮；所述第Ξ螺杆与第二螺杆 晒合实现第二螺杆的轴向移动。
[0013] 进一步的，所述挑针调节螺钉水平贯穿第二固定块。
[0014] 本发明还设及了一种利用上述真菌单抱挑取器进行植物病原真菌分离纯化的方 法，其包括如下步骤： a)安装真菌单抱挑取器：将单抱挑取器固定在显微镜载物台的右侧。
[0015] b)固定挑针：将挑针的针柄置于挑针固定槽中，并在挑针固定槽中滴入烙蜡W固 定挑针，挑针的直角针尖在竖直方向上背向载物台。
[0016] C)保湿室制作：将粗5~6mm的玻璃棒在酒精灯上加热弯成内径1. 3cm的"U"形棒， 粘于载玻片上。
[0017] d)琼脂平板制作：取灭菌后的0. 5-lmm琼脂薄板，切成1cm见方的琼脂小块；取一 片灭菌后的洁净载玻片，将两块琼脂板贴于其上，左为A块，右为B块，将B块切成若干条 带；另取一块琼脂在初步纯化了的菌落上薩一下，然后在A块上轻涂；将载玻片贴有A块和 B块的一面朝下，扣于灭菌后的保湿室上； 同样的，还可W取琼脂块直接在植物发病组织上薩取抱子。
[0018] e)挑取操作：利用单抱挑取器，在显微镜下在A块上挑取单个抱子，然后转移到B 块的条带上，如此反复，直到B块的每个条带上均有一个抱子；取下各条带，分别接种在装 有PDA斜面的试管中； 优选的，所述PDA培养基中可加入乳酸或链霉素，W抑制细菌感染。
[0019] f)培养：将试管置于23~27°C培养7~10天，12小时光照与12小时近紫外线灯交 替照射，得单抱菌落。
[0020] g)菌种保存：将培养好的单抱菌落做好标签，保存于5°C的冰箱冷藏室内，备用。
[0021] 作为方法的进一步优选，所述挑针为毛细玻璃管经热加工而成，直角针尖长1mm， 针尖为5~10μm。
[0022] 本发明的有益效果在于： (1)通过紧固装置将本挑取装置固定在显微镜的载物台上，通过横向移动装置和轴向 移动装置将挑取装置进行上下及前后的四向调节，挑针装置设置有挑针调节螺钉，可是挑 针在左右两方向进行移动，同时挑针的尖端为直角，可方便在镜下对载玻片上的抱子进行 挑取，其挑取过程通过各方向的调节螺钉进行，避免了手工挑取时手的抖动，可W快速、方 便、省时省力的完成挑取真菌单抱子的操作。
[0023] (2)该挑取法可在超净工作台上进行，一旦做好前期准备工作，可连续对多种真菌 进行操作，所需重复的只有一项工作，就是更换贴有琼脂平板的载玻片，大大提高了工作效 率。
[0024] (3)本发明方法也可W用琼脂平板直接在植物发病组织上薩取抱子，再涂于载玻 片的A板上，省去初步纯化过程，更利于获取所需抱子。
[00巧](4)本发明的方法得到单抱子菌落的准确率高达95%W上。为抑制细菌污染，PDA培养基中可加入适量乳酸或链霉素。
[00%] (5)本发明的方法不仅用于植物病原真菌的分离纯化，还可用于食用菌、括抗菌及 ±传真菌的研究，为相关学科提供便捷、高效、准确的真菌分离纯化方法。
【附图说明】
[0027] 图1本发明的真菌单抱挑取器的结构示意图。
[0028] 图2为图1的A部的局部放大示意图。
[0029] 图3为图1的B部的局部放大示意图。
[0030] 图4为保溫室的结构示意图。
[0031] 图5为本发明挑取操作时的保溫室和载玻片的组合结构示意图。
[0032] 图中，1主螺杆、2挑针调节螺钉、3挑针固定槽、4挑针、5针尖、6卡板、7紧固板、8 卡槽、9紧固螺钉、10第一移动块、11第一螺杆、12轴向调节旋钮、13第一固定块、14第二螺 杆、15第二固定块、16第Ξ螺杆、17横向调节旋钮、18载玻片、19 U型棒、20 A块、21 B块。
【具体实施方式】
[0033] 结合图1~图5对本发明做具体说明。
[0034] 实施例1 一种真菌单抱挑取器，其包括主螺杆1、位于主螺杆1下部的轴向移动装置、位于主螺 杆1上部的横向移动装置、与轴向移动装置固定连接的夹持装置W及与横向移动装置固定 连接的挑取装置；所述轴向移动装置沿主螺杆轴向移动；所述横向移动装置垂直于主螺杆 轴向移动。
[0035] 所述挑取装置包括水平贯穿横向移动装置的挑针调节螺钉2、设置在挑针调节螺 钉2端部的挑针固定槽3W及与挑针固定槽3固定连接的挑针4 ;所述挑针4设置有直角 针尖5。
[0036] 所述夹持装置包括与轴向移动装置上端固定连接的卡板6和与轴向移动装置下 端固定连接的紧固板7 ;所述卡板6端部设置有卡槽8 ;所述紧固板7上设置有紧固螺钉9。
[0037] 所述轴向移动装置包括套置在主螺杆1外的第一移动块10、设置在第一移动块10 内的第一螺杆11W及位于第一螺杆11端部的轴向调节旋钮12;所述第一螺杆11与主螺 杆1晒合实现第一移动块10沿主螺杆1轴向移动。
[0038] 所述横向移动装置包括与主螺杆1固定连接的第一固定块13、穿置于第一固定块 13上且与主螺杆1轴向垂直的第二螺杆14、与第二螺杆14固定连接的第二固定块15、设置 在第一固定块13内的第Ξ螺杆16 W及位于第Ξ螺杆16端部的横向调节旋钮17 ;所述第 Ξ螺杆16与第二螺杆14晒合实现第二螺杆14的轴向移动。
[0039] 所述挑针调节螺钉2水平贯穿第二固定块15。所述卡板6和紧固板7分别与第一 移动块10的上端和下端固定连接。
[0040] 使用时，第一移动块10上设置有夹持装置，卡板6上的卡槽8与显微镜载物台卡 接，紧固板7托于载物台的下方，通过紧固螺钉9顶紧载物台，从而实现单抱挑取器与载物 台的固定。第一移动块10可沿主螺杆1的轴向移动，通过轴向调节旋钮12转动第一螺杆 11，第一螺杆11与主螺杆1晒合转动实现第一移动块10的上下移动，由于第一移动块10 被固定在载物台上，因此转动轴向调节旋钮12时，可使