红豆杉中10-dab iii和/或紫杉醇的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种红豆杉中10-DABIII和/或紫杉醇的提取方法。
【背景技术】
[0002] 10-DABIII(全称是10-去己醜基己卡了Η)是半合成紫杉醇（Paclitaxel)、多 西他赛值ocetaxel)和卡己他赛（C油azitaxel)的前体原料。国内外有很多专利公开了 从各种红豆杉中提取10-DABIII和紫杉醇的方法，例如CN200710178672. 1，CN1903849， EP629701,EP1053345,US4876399,US5019504,US5628906,US5850032,US5969165, US2002155177,W00078741，W00512507,W001051476 等。即用 5 ~10 倍的甲醇或己醇水溶 液提取红豆杉，然后萃取，减压浓缩制备成浸膏，然后再经正相或反相层析分离，结晶和重 结晶等得到高含量的10-DABIII和紫杉醇精品，各专利保护的红豆杉品种主要为欧洲浆果 红豆杉、蔓地亚红豆杉、加拿大红豆杉、东北红豆杉、中国红豆杉、喜马拉雅红豆杉、云南红 豆杉和中国南方红豆杉。特别指出，CN200710178672. 1专利中公开的方法，即用0. 1%~ 0.5%巧樣酸水溶液超声逆流提取欧洲浆果红豆杉，用大孔树脂富集后再洗脱，然后减压浓 缩，结晶和重结晶获得高含量10-DABIII。US5736366介绍用软化水提取红豆杉枝叶，用聚 苯己帰树脂吸附，再用甲醇洗脱，并进一步处理，收率得到75. 4%。CN1660827报道用70~ 80%己醇提取红豆杉枝叶，得到水溶性浓缩液，静置后，不溶于水的紫杉醇及低极性杂质沉 淀析出，溶液再上S8、AB6等大孔树脂进行富集提取10-DABIII的方法。
[0003] 上述专利中涉及到的红豆杉品种中的10-DABIII含量都属于常规范畴，其中 10-DABIII含量最高的红豆杉品种为欧洲浆果红豆杉，新鲜的红豆杉枝叶中10-DABIII含 量大约在500~80化pm,干燥的红豆杉枝叶的含量大约在1200~2000ppm之间。而根据专 利CN201110190376.X公开的种植方法生产的红豆杉新品种，其10-DABIII的含量特别高， 具体地，红豆杉枝叶中10-DABIII含量> 1500ppm，干燥的红豆杉枝叶中10-DABIII含量 > 5000ppm。针对各红豆杉品种中的10-DABIII含量，作如下比较，具体如表1所示：
[0004] 表1各红豆杉品种中10-DABIII的含量比较
[0005]
[0006] 但是，上述各专利公开的提取方法仅适用于提取10-DAB III含量不高的红豆杉原 料；如果说，红豆杉原料中10-DAB III的含量被大大提升，例如专利CN201110190376. X公 开的种植方法生产的红豆杉，若仍然采用上述各专利公开的提取方法提取10-DAB III，由 于10-DAB III的含量太高，反而会发生严重降解的现象，如此一来，提取过程得到的10-DAB III的收率就会大大降低。郝么，针对10-DAB III含量高的红豆杉，亟待提出一种10-DAB III的收率高、产品稳定的提取方法。
【发明内容】
[0007] 本发明所要解决的技术问题在于现有技术提供的10-DAB III提取方法应用于提 取10-DAB III含量高的红豆杉品种时，得到的10-DAB III不稳定而且收率低的缺陷，而提 供了一种红豆杉中10-DAB III和/或紫杉醇的提取方法。所提供的提取方法特别适用于 10-DAB III和紫杉醇含量高的红豆杉的提取，该提取方法不仅提高了产品得率、减少了产 品内的降解杂质、还大大节省了有机溶剂用量和水电汽费用，对环境影响小；该提取方法可 W连续大规模地进行10-DAB III和/或紫杉醇的提取、纯化等操作。
[000引本发明提供了一种红豆杉中10-DAB III和/或紫杉醇的提取方法；所述的提取方 法包括如下步骤：
[0009] (1)用水溶液提取新鲜的或干燥的红豆杉枝叶原料，得提取液；所述水溶液中 包括浓度为10~5(K)ppm的5-ALA(全称是5-氨基丽戊酸）；新鲜的红豆杉枝叶原料中10-DAB III含量>1500ppm，紫杉醇含量>2(Κ)卵m ;干燥的红豆杉枝叶中10-DAB III含量 > 5000ppm，紫杉醇含量 >SOOppm;
[0010] (2)采用陶瓷膜过滤所述提取液，W滤除分子量大于50万道尔顿的杂质，再用纳 滤膜过滤，W滤除分子量小于200道尔顿的小分子；
[0011] (3)采用反相大孔吸附树脂吸附，并梯度洗脱，得到10-DABIII层析液段和/或紫 杉醇层析液段，再经后处理，得到10-DABIII粗品和/或紫杉醇粗品。
[0012] 步骤（1)中，所述的水溶液中较佳地包括浓度为50~50化pm的5-ALA，更佳地包 括浓度为100~200ppm的5-ALA。
[001引步骤（1)中，所述的水溶液中较佳地还含有甲醇和/或己醇，更佳地，进一步还含 有巧樣酸和/或冰醋酸。其中，所述的甲醇和/或己醇的含量较佳地为占所述水溶液的 0. 1%~95%，更佳地为占所述水溶液的20%~70%，所述百分比为质量百分比。所述的 巧樣酸和/或冰醋酸的含量较佳地为占所述水溶液的0. 1 %~2 %，所述百分比为质量百分 比。
[0014] 步骤（1)中，所述的提取为本领域常规操作，较佳地为超声逆流提取或抽提。所述 的超声逆流提取较佳地在超声提取机中进行。所述的提取时，所述的新鲜的或干燥的红豆 杉枝叶原料与所述水溶液的质量比较佳地为（1 :5)~（1 ;10)。所述的提取的次数较佳地一 般为2次，每次提取的时间较佳地为2~3小时。一般来说，经过一次提取后，10-DABIII 的得率较佳地为85%~90% ;经过两次提取后，10-DABIII的总得率较佳地为98%W上； 所述的百分比为质量百分比。
[0015] 步骤（1)中，所述的新鲜的或干燥的红豆杉枝叶原料较佳地由新鲜的或干燥的红 豆杉枝叶经过预处理得到。其中，所述的预处理较佳地为：将新鲜的或干燥的红豆杉枝叶粉 碎为长度《1cm的小段，更佳地为粉碎为长度《0. 1cm的粉末。所述的粉碎的设备较佳地 为豆浆机或粉碎机。
[0016] 步骤（1)中，10-DABIII含量和紫杉醇含量满足步骤（1)的要求的红豆杉品种较 佳地由下述种植方法获得；将红豆杉按本领域常规人工种植方法种植和施肥，其中，所述的 施肥的肥料中含有0. 1~10%的5-ALA，所述百分比为5-ALA占肥料总量的质量百分比。
[0017] 其中，所述的红豆杉的本领域常规人工种植方法包括如下步骤；先将农田整理，然 后将红豆杉种植，进行施肥即可。
[0018] 其中，农田整理；将农田在秋季深翻20~40cm，翌春浅翻细祀，在整理同时施入腐 熟的基肥30t/hm2~45t/hm2,同时将防治病虫害药剂均匀翻耕入± ;农田平整后作苗床， 床面宽1. 0~1. 2m，高20~25畑1，要求中沟深度10~20畑1，边沟深度20~40cm;
[001引种植；取红豆杉的化在1~4月份期间，按照每亩800~1000株的密度种植，在 栽植当年的4~9月，每月働草抚育1~2次，1年抚育5~7次；其中，当红豆杉种植> 2 年，第2年抚育4~5次，第3年抚育3~4次；働草中不働伤幼树的树根，働草时结合清沟 和培±，雨季田间排水，使雨水通畅排出；
[0020] 施肥管理；当红豆杉种植> 2年，在栽植的第2年开始，每年的3月和/或8月施 1~2次肥，每株沟施30~50g的肥料。
[0021] 其中，所述的红豆杉的种类为本领域常规，一般有中国南方红豆杉（Taxus Qiinensisvar.Mairei),中国红豆杉（TaxusQiinensis),东北红豆杉（Taxus Qispidata),云南红豆杉（Taxus化nnanensis),西藏红豆杉（TaxusWallichiana),欧洲 浆果红豆杉（TaxusBaccata),短叶红豆杉（Taxus化evifolia),加拿大红豆杉（Taxus Canadensis)，佛罗里达红豆杉（TaxusFloridana)，曼地亚红豆杉（TaxusMedia,T. speciosa,Τ.fastigiata),矮紫杉（TaxusQispidatavar.nana),或者欧洲黄叶红豆杉 (TaxusBaccatacvstrictaH或又名Taxusbaccatavar.fruci：!!)，较佳地为中国南方红 豆杉灯axusQiinensisvar.Mairei)、中国红豆杉（TaxusQiinensis)、东北红豆杉（Taxus Qispidata)、云南红豆杉（Taxus化nnanensis)和西藏红豆杉（Taxuswallichiana),更佳 地为中国南方红豆杉（TaxusQiinensisvar.Mairei)。
[002引步骤似中，所述的陶瓷膜的膜芯平均孔径较佳地为小于lOOnm，更佳地为50nm。
[0023] 步骤（2)中，所述的陶瓷膜的浓缩倍率较佳地为5~20倍，更佳地为10倍。
[0024] 步骤似中，所述的纳滤膜的平均孔径较佳地为不大于2皿。
[00巧]步骤（2)中，所述的纳滤膜的浓缩倍率较佳地为1~10倍，更佳地为5倍。
[0026] 上述步骤（2)中涉及的陶瓷膜和纳滤膜的具体工作条件如工作管道压力、温度等 均随具体厂家的设备型号设置决定，只要满足前述条件即能滤除分子量大于50万道尔顿 的杂质，W及滤除分子量小于200道尔顿的小分子的设备均可使用。
[0027] 步骤（3)中，所述的反相大孔吸附树脂较佳地为D101大孔吸附树脂、D101-1大孔 吸附树脂、YPR-II大孔吸附树脂、CAD-40大孔吸附树脂、CAD-45大孔吸附树脂、D1300