一种从辣木子中提取的辣木子小分子肽及其提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及多肽制备技术领域，尤其涉及一种从辣木子中提取的辣木子小分子肽及其提取方法。
【背景技术】
[0002]氨基酸的分子小，蛋白质大，两个或以上的氨基酸脱水缩合形成若干个肽键从而组成一个肽，多个肽进行多级折叠就组成一个蛋白质分子。二胜肽，简称二肽，就是由二个氨基酸组成的蛋白质片断。生物体内已发现几百种肽，是机体完成各种复杂的生理活性必不可少的参与者。所有细胞都能合成多肽物质，其功能活动也受多肽的调节。它涉及激素、神经、细胞生长和生殖各领域，其重要性在于调节体内各个系统器官和细胞。酶法多肽的生理和药理作用主要是激活体内有关酶系，促进中间代谢膜的通透性，或通过控制DNA转录或翻译而影响特异的蛋白合成，最终产生特定的生理效应或发挥其药理作用。肽优于氨基酸，一是较氨基酸吸收快速；二是以完整的形式被机体吸收；三是主动吸收(氨基酸属被动吸收)；四是低耗，与氨基酸比较，肽吸收具有低耗或不需消耗能量的特点，肽通过十二指肠吸收后，直接进入血液循环，将自身能量营养输送到人体各个部位；五是肽吸收较氨基酸，具有不饱和的特点；六是氨基酸只有20种，功能可数，而肽以氨基酸为底物，可合成上百上千种。
[0003]在诸多的多肽中，由于小分子活性肽具有易吸收，不增加人体消化负担，营养价值极其高而广泛被当代人们所意识和接受，逐渐成为当下人们养生品而受到热捧。那么在现有技术中制备小分子肽的方法有多种，例如CN101194733A，CN101532044A，CN102090680A,以及CN12808 34A均公开了关于多肽的制备方法，但是方法单一，提取性能不高，再例如，CN101120724A公开了一种微生物发酵制作饲料用多肽制剂，由以下重量百分比原料组成:枯草芽孢杆菌40-55、植物乳杆菌25-35、干酪乳杆菌10-35。但制备的多肽制剂在用于骨骼提取多肽时，提取效率不高，生物发酵剂单一，使用场合也受到限制。CN102488073A公开一种海参肽的提取方法，采用酶解方法，加入海参专用酶，酶解6小时，酶解过程中每隔1小时搅拌2分钟；加入活性炭进行去味，然后加氢氧化钠调节pH，浓缩过程中测定控制波美度在10，该方法不能提取较多成分的多肽，且波美度较低，造成一定程度的资源浪费。CN1931020A公开了一种低含盐量的多肽生产方法，其工艺流程包括:牛羊鲜骨的清洗破碎，高压蒸煮，加蛋白酶酶解，加酸、碱调节pH值，过滤浓缩，喷粉干燥，成品包装，原料来源广泛，成品的多肽成分可达90%，提高了水解度，可用于配制多种保健食品，适用于酶法提取牛、羊动物骨骼中多肽的方法，但是对于贵重的骨骼原料不能尽可能的提高多肽成分，造成不必要的浪费。
[0004]综上，现有技术的的多肽提取方法单一，提取效率不高，造成浪费，适用场合受到限制，制备的多肽尤其是小分子活性肽难以用于肽类药物和肽类保健品，对满足日益增长的保健品和药品市场不具有重要意义。
【发明内容】
[0005]本发明为有效解决上述问题，本发明提供一种小分子活性多肽尤其是从辣木子中提取小分子多肽的方法，该方法能够综合优势，极大的提高小分子活性多肽的提取效率，且该方法能够适用于多种骨骼多肽的提取。
[0006]本发明的技术方案是一种从辣木子中提取辣木子小分子肽的方法，依次包括如下步骤:(1)制备发酵剂；(2)辣木子前处理；(3)初级微生物发酵；(4)电解初级辣木子蛋白；
(5)酒精激活胰浆制备；(6)酶解过程；(7)后处理过程。
[0007]步骤(1)制备发酵剂过程中，木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶三种蛋白酶混合，其中三者的质量之比为2: 2: 1，还加入营养素，所述的营养素为麦芽汁；
[0008]进一步的步骤(2)辣木子前处理中，采用高压蒸煮的方法得到汤；步骤(3)初级微生物发酵中，加入促产剂，所述的促产剂为植酸质，发酵得到初级微生物发酵的辣木子蛋白，即初级辣木子蛋白；
[0009]进一步的步骤(4)电解初级辣木子蛋白中，将所述的初级辣木子蛋白进行电解，得到辣木子寡肽汤；步骤(5)酒精激活胰浆制备中:胰脏做蛋白酶来源，采用食用酒精一步激活形成胰酶，形成酒精激活胰浆；
[0010]进一步的步骤(6)酶解过程中:辣木子寡肽汤、酒精激活胰浆按照一定质量比进行酶解，分三次加入所述酒精激活胰浆，得到初级辣木子小分子肽；步骤(7)后处理过程中:经过后处理得到辣木子小分子肽。
[0011]本发明提供的一种小分子活性多肽尤其是从辣木子中提取小分子多肽的方法，更具体的步骤如下:(1)制备发酵剂:使用有益菌株的液体培养制备发酵剂，称取木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶三种蛋白酶，具体为木瓜蛋白酶10重量份，碱性蛋白酶10重量份，胰蛋白酶5重量份，麦芽汁15重量份，混合在一起，并置入到盛装有培养基的三角瓶中，进行复合培养，所述的培养基为营养琼脂培养基，在所述三角瓶中进行培养的温度为37°C，在200-250rpm/min下培养18_20h，使菌体或者孢子浓度达到1 X 1012个/升(CFU/L)，制得发酵剂；(2)辣木子前处理:将新鲜的辣木子破碎，清洗，在蒸煮罐中，采用温度为130°C以上温度，压力0.17-0.18MPa高压蒸煮300_400min，骨渣排出，汤油导入汤油储罐中分层分离，得到汤；(3)初级微生物发酵:将步骤(2)得到的汤转入至初级发酵生产罐中，并加入所述汤重量的0.5-0.8%的促产剂，所述的促产剂为植酸质，在35-38°C的低温下发酵8_10h，然后升温至160-200°C继续发酵5-8h，得到初级微生物发酵的辣木子蛋白，即初级辣木子蛋白；(4)电解初级辣木子蛋白，将所述的初级辣木子蛋白进行电解，使用常规的蛋白质电解法，电解过程中，槽电压为20-50mV，电解时间为3-5h，取三个试样测试，每个试样中的辣木子肽的分子量范围均不超过800道尔顿时，则停止电解，得到辣木子寡肽汤；(5)酒精激活胰浆制备:酒精激活胰浆制备过程如下:在胰酶激活器中，放入洗净的胰脏做蛋白酶来源，采用食用酒精一步激活形成胰酶，所述食用酒精的加入量是所述胰酶质量的2倍，所述食用酒精的体积浓度是45%，所述激活时间为60-80h，激活温度为6-8°C，成为酒精激活胰浆；(6)酶解过程:将所述辣木子寡肽汤导入水解罐中，然后分三次加入所述酒精激活胰浆，三次加入的所述酒精激活胰浆的质量之比为1: 1: 4，第一次是在所述酶解开始时加入，第二次是在所述酶解进行lh时加入，第三次加入是所述酶解进行2h时加入，所述酶解总时间为7h，所述酒精激活胰浆的加入质量是辣木子寡肽汤质量的1/9-1/5，在所述酶解过程中保持水解罐中pH为6.7-7.0 ;在所述酶解过程中第一次加入酒精激活胰浆后至第二次加入酒精激活胰浆前的酶解温度为60°C，第二次加入酒精激活胰浆后的酶解温度为45°C，得到初级辣木子小分子肽；(7)后处理过程:经过所述酶解过程，即经过所述酒精激活胰浆在水解罐中的水解，成为水解最终的混合液体，经过过滤后导入浓缩罐进行浓缩，浓缩温度为50°C，浓缩至少2h，之后降温，在降温至30°C时，测定波美度不小于30时，停止浓缩，将浓缩液煮沸灭菌，喷粉干燥，水分含量降至2.5%以下，送入储罐，密封包装，得到辣木子小分子肽。
[0012]优选，步骤⑴制备发酵剂过程中，在所述三角瓶中进行培养的温度为37°C，在200rpm/min下培养20h ;步骤(2)辣木子前处理:在蒸煮罐中，采用温度为150°C，压力
0.17MPa 高压蒸煮 400min。
[0013]优选，步骤