LPNISKP修饰的β-咔啉，其制备，纳米结构，活性和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及1-(4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-甲 醜-Leu-Pro-Asn-IIe-Ser-Lys-Pro。涉及它的制备方法，涉及它的纳米结构，涉及它的体内 外抗肿瘤作用，涉及它抗肿瘤细胞粘附侵袭和迁移的作用，进一步涉及它的抗炎作用。本发 明属于生物医药领域。 技术背景
[0002] 恶性肿瘤严重威胁人类的健康。除了自身对肿瘤患者的预后恶劣之外，恶性肿瘤 并发的炎症和转移进一步恶化患者的预后。例如，超过90%W上的恶性肿瘤患者都是死于 肿瘤转移。肿瘤转移依赖于4个因素；1)肿瘤细胞表面形成微血栓，逃避巨瞻细胞吞瞻，通 过血液循环迁移到远端；2)迁移到远端的肿瘤细胞粘附到血管壁；3)细胞粘附到血管壁的 肿瘤细胞通过侵袭出血管而进入正常组织；4)炎症使进入正常组织的肿瘤细胞成长为转 移的新生肿瘤。
[0003] 由于现有抗肿瘤药物不具备抗炎症和抗转移作用，所W疗效不理想。发明同时具 有抗肿瘤、抗炎症和抗肿瘤转移作用的药物是临床的迫切需求。
[0004] RGD四化即RGDS，RGDF和RGDV是整合素aV目3的阻断剂，具有抗细胞粘附活性。 Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro(LPNISKP)在1UM浓度下则能抑制肥CLM6的运动和侵袭。 申请人曾经把它们与雌激素偶联，制备没有凝血副作用的抗骨质疏松剂。申请人曾经把它 们与四氨-目-巧晰-3-駿酸偶联制备高效的抗血栓剂。申请人也曾经用氨基酸修饰四 氨-目-巧晰-3-駿酸、目-巧晰-3-駿酸及1-位取代的目-巧晰-3-駿酸，包括1-位取 代的四氨-目-巧晰-3-駿酸或1-位取代的目-巧晰-3-駿酸制备高效的抗血栓剂或抗肿 瘤剂。下面是发明人创造的结构类型的代表。尽管发明人付出了大量研究精力，筛选了数 百种化合物，一直没有得到同时具有抗肿瘤、抗炎症和抗肿瘤细胞迁移粘附和侵袭转移作 用的化合物。
[0005] 发明人在分析数百种化合物的结构及活性变化的基础上，认识到将LPNISKP与 1-(4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-駿酸偶联，形成的1-(4-居基-3-甲氧撰基苯 基）-目-巧晰-3-甲醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro会同时具有抗肿瘤、抗炎症和抗肿 瘤细胞迁移粘附和侵袭作用。基于送个认识，发明人提出了本发明。
【发明内容】
[0006] 本发明的第一个内容是提供下面结构的1-(4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧 晰-3-甲酉先-Leu-Pro-Asn-IIe-Ser-Lys-ProO
[0007]
[000引本发明的第二个内容是提供1-(4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-甲 醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro的制备方法，该方法包括：
[0009] (1)在浓硫酸存在下，5-甲醜水杨酸在甲醇中微波9(TC反应化，生成5-甲醜水杨 酸甲醋；
[0010] (2)在多聚磯酸的存在下色氨酸和苯甲醇反应，生成k色氨酸予醋；
[0011] 做在H氣醋酸存在下，在二氯甲焼中5-甲醜水杨酸和k色氨酸予醋缩合为 1- (4-居基-3-甲氧撰基苯基）-1，2, 3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋；
[0012] (4)在2, 3-二氯-5,6-二腊基-1，4-苯酿抑佩的存在下，1-(4-居基-3-甲氧 撰基苯基）-1，2, 3,4-四氨-目-[]卡晰-3-駿酸予醋在四氨巧喃（THF)中氧化为1-(4-居 基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-駿酸予醋；
[001引 （5)在Pd/C和&存在下，在甲醇中1- (4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-駿 酸予醋反应生成1- (4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-駿酸；
[0014] (6)采用逐步缩合法，在DCC和册Bt存在下，在干燥THF中反应，得到全保护多肤 序列Boc-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Z)-Pro-OBzl;
[0015] (7)在冰浴下氯化氨的己酸己醋溶液（4M)中，全保护多肤序列Boc-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Z)-Pro-OBzl脱除Boc得到Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Z)-Pro-OBzl;
[0016] 做在DCC和HOBt存在下，1-(4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-駿酸在 无水THF中与Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(幻-Pro-OBzl缩合为1- (4-居基-3-甲氧撰基苯 基）-目-卡晰-3-甲醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys狂）-Pro-OBzl;
[0017] (9)在Pd/C和&存在下，在甲醇中化合物1- (4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧 晰-3-甲醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys狂)-Pro-OBzl反应得到化合物 1-(4-居基-3-甲 氧撰基苯基）-目-巧晰-3-甲醜-Leu-Pro-Asn-IIe-Ser-Lys-Pro。
[0018] 本发明的第H个内容是测定1-(4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-甲 醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro的纳米结构。
[0019] 本发明的第四个内容是评价1-(4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-甲 醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro体外抑制肿瘤细胞增殖的作用。
[0020] 本发明的第五个内容是评价1-(4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-甲 醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro对荷sl80小鼠肿瘤生长的抑制作用。
[0021] 本发明的第六个内容是评价1-(4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-甲 醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro体外抑制肿瘤细胞粘附侵袭和迁移的作用。
[0022] 本发明的第走个内容是评价1-(4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-甲 醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro的体内抗炎作用。
【附图说明】
[0023] 图I.发明人创造的抗血栓或抗肿瘤活性化合物的结构类型代表，式中AA为k氨 基酸或甘氨酸。
[0024] 图2. ^邸3地，浓HzSO"微波9(TC山）多聚磯酸，苯甲醇，油浴75°C;111)邸2化， TFA;iv)THF,DDQ八）邸3〇扎Pd/C，& ^i)DCC，HOBt,NMM,THF^ii)CH3〇H，2順aOH;viii)氯 化氨/己酸己醋溶液（4M)。
[00巧]图3.化合物5在纯水溶液中1X107M浓度下的透射电镜照片。
[0026] 图4.化合物5作用于肿瘤细胞的细胞活力图（n= 3)。
【具体实施方式】
[0027] 为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。送些实施例完全是例证性的，它 们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[002引实施例1制备5-甲醜水杨酸甲醋
[0029] 称取1. 660g(10.Ommol) 5-甲醜水杨酸于微波反应罐中，加入25血甲醇及1血浓 H2SO4,于微波反应器中9(TC反应化，利用TLC监测至原料斑点消失，停止反应降至室温后， 将反应液转移至IOOmL茄形瓶中，用浓氨水调pH值至7-8,将反应液减压浓缩至干后，加大 量己酸己醋溶解，己酸己醋层依次用饱和化肥〇3、饱和化Cl各洗H遍，然后用无水Na2S〇4干 燥化，过滤、减压浓缩至干，于室温放置过夜即有晶体析出，得1.635g巧0.8% )目标化合 物，为淡黄色针状晶体。ESI-MS(m/e) : 181 [M+田+。
[0030] 实施例2制备k色氨酸予醋
[0031] 称取15.Og(44. 4mmol)多聚磯酸于SOOmL茄形瓶中，加入SOmL苯甲醇，使其在油 浴50°C中溶解，待溶液温度上升至75°C后，称取IOg(49.Ommol)k色氨酸加入其中，75°C下 反应4她，利用TLC监测至原料斑点消失，停止反应降温后，在冰浴揽拌下往反应瓶中倒入 400mL无水己離，此时有白色固体析出，揽拌过夜后将之过滤，白色固体用200mL己酸己醋 和IOmL水悬浮，用H己胺调溶液抑值至8左右，溶液变为澄清状，静置分液，将分离的醋层 依次用饱和化肥〇3、饱和化Cl各洗H遍，己酸己醋层用无水Na2S〇4干燥化，过滤、减压浓缩 至干，得12. 85g(89. 2%)目标化合物，为白色固体。ESI-MS(m/e) :295[M+田+。
[003引实施例3制备1-(4-居基-3-甲氧撰基苯基）-1，2, 3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸 予醋（1)
[003引往250血茄形瓶中加入100血邸2化及10血TFA，揽拌均匀后称取 11. 76g(40.OmrnoDk色氨酸予醋和7. 92g(44.Ommol) 5-甲醜水杨酸甲醋加入其中，数分 钟后反应液变为微红色，2天后反应液变为黑色，在冰浴揽拌下缓慢滴加浓氨水将反应液 调抑值至8,将反应液静置分液，将分离CH2CI2层依次用饱和Na肥03、饱和化Cl各洗H遍， CH2CI2层用无水Na2S04干燥化，过滤、减压浓缩至干，得14. 59g(80% )目标化合物，为黄色 固体。ESI-MS(m/e) :457[M+田+。
[0034]实施例4制备1- (4-居基-3-甲氧撰基苯基）-目-巧晰-3-駿酸予醋似[003引称取1-(4-居基-3-甲氧撰基苯基）-1，2,3,4-四氨-目-巧晰-3-駿酸予 醋4. 56g(10.Ommol)于250血茄形瓶中，用干燥THF溶解，加入孤Q4. 54g(20.Ommol)， 数分钟后反应液变浑浊，地后反应完全，过滤，滤出固体依次用饱和NaHC03、甲醇、己離 洗，过滤，得3. 75g(82. 7%)目标化合物，为灰白色固体。ESI-MS(m/e) ;453[M+田+;Mp: 190.4-191.0°C.'HNMR(300MHz,DMSO) ： 5/ppm=8. 87 (s,IH),8. 42 (m, 2H