用于从间-α抑制剂蛋白耗乏的血液制品材料中分离血液制品的方法
【专利说明】用于从间-α抑制剂蛋白耗乏的血液制品材料中分离血液 制品的方法
[0001] 发明背景
[0002] 血液中天然地存在着多种关键性生物化合物。商业上有意义的血液制品包括 间-α抑制剂蛋白（IaIp)、白蛋白、免疫球蛋白（IVIg)、因子VII、因子VIII、因子IX、 a -1抗胰蛋白酶、抗凝血酶III、Cl-抑制剂、蛋白C、冯维勒布兰德因子（von Willebrand factor)、因子H、凝血酶原（因子II)以及凝血酶。血液制品在凝血、免疫、炎症以及其他生 物学功能中发挥关键作用。缺乏这些化合物中的一种或多种的受试者可能患有多种医学病 症；用特定血液化合物进行治疗可以缓解这些病症或其症状。另外，用特定血液制品进行治 疗可以产生医学益处，如预防脓毒症或神经元损伤。为此目的，鉴于有限的血液供应，有效 纯化血液化合物是特别重要的。
[0003] 先前方法已经聚焦于从血液分级废弃物中分离I a Ip，但是没有方法聚焦于从原 始血浆中（即在分级过程之前）进行分离。
[0004] 发明概述
[0005] 从单个起始材料中分离多种血液制品使血液制品分离的效率最大化。本发明提供 了这样一种方法。在本发明中，一种或多种血液制品分离自先前耗乏一种或多种间-α抑 制剂蛋白（Ια Ip)的血液制品材料。此方法为提高分离血液组分的效率和提供那些组分的 药学上可接受的形式提供了新途径，如可以被有需要的受试者所使用。
[0006] 本发明提供了一种用于从间-α抑制剂蛋白（Ια Ip)耗乏的血液制品材料中分离 一种或多种血液制品的方法。在第一方面中，该方法包括提供一种I a Ip耗乏的血液制品 材料，该材料将一种或多种I a Ip家族成员耗乏存在于源血液制品材料中的总量的至少约 20%并包括存在于源血液制品材料中的至少约20%的IgG。该方法进一步包括从该I a Ip 耗乏的血液制品材料中分离一种或多种血液制品，该一种或多种血液制品中的至少一种是 选自白蛋白、]^、]^、]^、]^0、]^、1￥]^、抗〇]^、乙型肝炎]^、麻疹]^、狂犬病]^、破 伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原（因子I)、凝血酶原（因子II)、凝血酶、抗凝血酶 III、因子III、因子V、VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋 白、α-l抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、Cl-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相 关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原 激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅 因子II。在一些实施例中，该I a Ip耗乏的血液制品材料基本上包括3种或更多种非I a Ip 血液制品，基本上包括10种或更多种非I a Ip血液制品，或基本上包括20种或更多种非 I a Ip血液制品，这些非I a Ip血液制品是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗D IgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原（因子 I)、凝血酶原（因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子 IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-l抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激 酶、Cl-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Ζ、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶 原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子 H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。在一些实施例中，分离步骤包括以下 步骤：使该I a Ip耗乏的血液制品材料与一种支持体接触，这样使得这些血液制品中的一 种或多种被基本上保留在该支持体上，并且随后从该支持体上洗脱富含这些被基本上保留 的血液制品中的至少一种的级分。在一些实施例中，该支持体是层析柱。在以上实施例的 任一实施例中，该I a Ip耗乏的血液制品材料可以是耗乏一种或多种（例如，两种、三种、四 种或更多种）I a Ip家族成员（如I α I、P α I和/或二库宁肽（bikunin)，或I α I和P α I 两者）的材料；该一种或多种I a Ip家族成员的耗乏是至少约20 %或至少约90 %或更多。
[0007] 在本发明的另一个方面中，用于从I a Ip耗乏的血液制品材料中分离一种或多种 血液制品的该方法包括使一种血液制品材料与一种第一支持体接触，该血液制品材料至少 包括Ια Ip，Ia Ip家族：IgG重量比等于约1 : 30、等于约1 : 5或介于约1 : 30与约 1 : 5之间的IgG，以及因子VIII : Ia Ip家族重量比等于或小于约I : IO6的因子VIII 和冯维勒布兰德因子：Ia Ip家族重量比等于或小于约1 : 40的冯维勒布兰德因子中的 一者，借此I a Ip被基本上保留在该第一支持体上并且未被该支持体保留的材料被包括在 第一流过物中。此方面进一步包括从该第一流过物中分离该一种或多种血液制品中的至少 一种，该一种或多种血液制品中的至少一种是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIgJjt D IgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原（因 子I)、凝血酶原（因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、VII、因子VIII、因子 IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、a-1抗胰蛋白酶、a-2抗纤溶酶、尿激 酶、Cl-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶 原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子 H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。在一些实施例中，该血液制品材料是 全血衆、冷凝蛋白贫乏的血衆（cryo-poor plasma)、液态血衆、新鲜冰冻血衆（FFP)、FFP24、 冰冻血浆（FP)、FP24、解冻的FFP、解冻的FFP24、解冻的FP、解冻的FP24、源血浆、回收的血 浆、经溶剂/洗涤剂处理的血浆（SDP)、富血小板血浆（PRP)、贫血小板血浆（PPP)、血清、血 液或其稀释或浓缩制剂。在一些实施例中，在接触该第一支持体之前，可以将该血液制品材 料与上样缓冲液混合。在某些实施例中，该上样缓冲液包括10至300mM盐，如10、20、30、 40、50、100、150、200、250或300mM盐。在某些实施例中，该上样缓冲液包括50至250mM盐， 如 50、60、70、80、90、100、150、200 或 250mM 盐。
[0008] 在具体实施例中，该支持体是QA支持体并且该上样缓冲液包括约10至IOOmM盐， 如 10、20、30、40、50、60、75、80、85、90、95 或 IOOmM 盐。在一些情况下，pH 是从 5. 5 至 6. 5， 如5. 5、5. 7、5. 9、6. 0、6. 1、6. 3或6. 5。在某些实施例中，该支持体是QA支持体，该上样缓冲 液包括约50mM盐，并且pH是约6. 0。
[0009] 在具体实施例中，该支持体是DEAE支持体并且该上样缓冲液包括约150至250mM 盐，如 150、175、200、225 或 250mM 盐。在一些情况下，pH 是从 L 0 至 8. 0,如 L 0、7· 2、7· 4、 7. 6、7. 8或8. 0。在某些实施例中，该支持体是DEAE支持体，该上样缓冲液包括约200mM盐， 并且pH是约7. 6。
[0010] 在一些实施例中，该第一流过物包括处于以下量的三种或更多种非I a Ip血液制 品、10种或更多种非I a Ip血液制品或20种或更多种非I a Ip血液制品，该量等于或大于 存在于该血液制品材料中的量的约20 %，并且其中，所述非I a Ip血液制品中的每种是选 自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗D IgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破 伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原（因子I)、凝血酶原（因子II)、凝血酶、抗凝血酶 III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、 纤连蛋白、α -1抗胰蛋白酶、α -2抗纤溶酶、尿激酶、Cl-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋 白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤 溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及 肝素辅因子II。
[0011] 在一些实施例中，分离步骤包括使该第一流过物与一种第二支持体接触，这样使 得这些血液制品中的一种或多种被基本上保留在该第二支持体上，并且随后从该第二支持 体上洗脱富含这些被基本上保留的血液制品中的至少一种的级分。在一些实施例中，该第 一支持体或第二支持体之一或两者是层析柱。在一些实施例中，该第一支持体可以是阴离 子交换柱。在某些实施例中，该第一支持体可以是DEAE或QA柱。
[0012] 另外的实施例包括从该第一支持体上洗脱被基本上保留的I α Ip，从而产生富含 I a Ip的第一洗脱物。该第一洗脱物可以由分离的I a Ip组成。在一些另外的实施例中，该 方法进一步包括从该第一洗脱物中分离被基本上保留的I α Ip。
[0013] 在以上实施例的一些中，分离的I a Ip的产量可以是至少5 μ g/ml血液制品材料、 至少50 μ g/ml血液制品材料、至少100 μ g/ml血液制品材料、至少300 μ g/ml血液制品材 料、至少600 μ g/ml血液制品材料或至少900 μ g/ml血液制品材料。在以上实施例的一些实 施例中，分离的I a Ip的纯度可以是至少5%、至少25%、至少50%、是至少75%或100%。 在一些实施例中，分离的Ia Ip可以是Ia I、Pa I或二库宁肽，或可以包括两种或更多种 Ia Ip家族成员，或可以包括Ia I和Pa I。在一些实施例中，该被基本上保留的Ia Ip可 以是Ia I、Pa I或二库宁肽，或可以包括两种或更多种Ia Ip家族成员，或可以包括Ia I 和 P a 10
[0014] 在一些实施例中，一种或多种分离的非I a Ip血液制品的产量可以是存在于该第 一流过物中的总量的至少20%、存在于该第一流过物中的总量的至少50 %或存在于该第 一流过物中的总量的至少80%。在一些实施例中，该I a Ip耗乏的血液制品材料是一种将 Ia Ip(例如，一种或多种（例如，两种、三种、四种或更多种）I a Ip家族成员，如Ia I、P a I 和/或二库宁肽，或I a I和P a I两者）耗乏存在于源血液制品材料中的总I a Ip的至少 约 20% (例如，至少约 30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或 99%或更多，或耗乏 在20 % -90 %的范围内）的血液制品材料。在一些实施例中，该I a Ip耗乏的血液制品材 料基本上包括3种或更多种非I a Ip血液制品，基本上包括10种或更多种非I a Ip血液制 品，或基本上包括20种或更多种非I a Ip血液制品，这些非I a Ip血液制品是选自白蛋白、 IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗 D IgG、乙型肝炎 IgG、麻疹 IgG、狂犬病 IgG、破伤风 IgG、 水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原（因子I)、凝血酶原（因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子 III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、 a -1抗胰蛋白酶、a -2抗纤溶酶、尿激酶、Cl-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的 蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活 剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子 IIo
[0015] 如在此使用，术语"约"意指引用值的+/-10%。
[0016] "血液制品"意指具有商业价值的物质，它可以天然地存在于血液中，例如存在于 人类的血液中，并且对它而言，从血液中进行分离在商业上可实践。血液制品包括I α Ip、白 蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗D IgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风 IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原（因子I)、凝血酶原（因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、 因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋 白、α-l抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、Cl-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相 关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原 激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅 因子Π 。
[0017] "I α Ip"意指由间- α抑制剂蛋白（