特异性结合her2的抗体的利记博彩app
【技术领域】
[OOOd本发明是由AbClon,Inc于2011年11月1日至2014年10月1日在基金 1415118385下在韩国技术进步研究所的支持下进行的，并且由KIAT名为International CooperationTechnologyDevelopmentWorksandInnovativeEpitopeDiscovery PlatformTechnology-BasedGlobalAntibodyNewDrugDevelopment的国际合作支持团 队管理。
[0002] 本申请要求于2013年5月16日在韩国知识产权局提交的韩国专利申请 No. 10-2013-0055912的优先权，其公开内容通过引用并入本文。
[0003] 本发明设及肥R2 (人表皮生长因子受体2，HumanEpidermalGrowthFactor Receptor2)抗体来预防或治疗肥R2相关疾病，特别是癌症。
【背景技术】
[0004] 肥R2/neu巧rbB2)基因编码185kDa的跨膜糖蛋白，其为一种EGFR(表皮生长因子 受体）家族成员。HER2蛋白由具有620个氨基酸残基的胞外结构域、具有23个氨基酸残基 的跨膜结构域和具有490个氨基酸残基的有酪氨酸激酶活性的胞内结构域组成（Akiyama T等，Science, 232 (4758) : 1644-1646 (1986))。
[0005] 此外，许多论文中报道了具有多种特征的肥R2抗体：Tagli油Ue等，比t.J.Cancer 47 :933-937(1991);McKenzie等，Oncogene4 :543-548(1989) ;Maie;r等，CancerRes. 51 : 5361-5369(1991);Bacus等，Mole州IarCarcinogenesis3:350-362(1990);Stancovski 等，PNAS(USA)88 :8691-8695(1991)巧acus等，CancerResearch52:2580-2589(1992); Xu等，Int.J.Cancer53:401-408(1993) ;W094/00136;Kasprz;yk等，CancerResearch 52:2771-2776 (1992);Hancock等，CancerResearch. 51 :4575-4580(1991);化awver 等，CancerRes. 54:1367-1373(1994);Arteaga等，CancerRes. 54:3758-3765(1994); Harwerth等，J.Biol.Chem. 267 :15160-15167(1992);美国专利No. 5,783, 186;Kao等，美 国公开No. 2009/0285837(2009) ;Ross等，TheOncologist8:307-325(2003)W及Klapper 等，Oncogene14:2099-2109(1997)。
[0006] 在肥R2抗体中，曲妥珠单抗（trastuzumab)作为商业上最成功的抗体（商 业化为Herceptin?，美国专利No. 5, 821, 337)已经被进行了大量的研究：Sapino,A.， 等，AnnalsofOncology(2007) 18 :1963-1968 ;Bussolati，G，等，BritishJournal ofCancer(2005)92,1261-1267 ;和GlazyrinA,等，JHistology&Cytochemist ry(2007)55(l) :25-33。
[0007] 尽管曲妥珠单抗在商业上是成功的，但是运种抗体可能仅在15%的过表达肥R2 的乳腺癌患者中表现出治疗功效。因此，在增强曲妥珠单抗功效的程度或范围的情况下，已 经尝试通过组合疗法改善对曲妥珠单抗无响应或不良响应的癌症患者的预后。
[000引例如，美国专利申请公开No. 2011-0086004公开了与曲妥珠单抗和IL-21的组合 癌症疗法。美国专利申请公开No. 2012-0107270描述了与和IL-2缀合的祀向生腫蛋白之 抗体组合的曲妥珠单抗。
[0009] 美国专利申请公开No. 2005-0101618公开了用曲妥珠单抗和erbB2配体的癌症疗 法。欧洲专利申请公开No. 2134364公开了通过与端粒酶抑制剂组合的曲妥珠单抗抑制癌 细胞增殖。WO2008/031531描述了与帕妥珠单抗（pertuzumab)组合的曲妥珠单抗可阻抑 癌症转移。
[0010] 贯穿本申请，引用了多个专利和出版物，并且将引用提供在括号中。运些专利和出 版物的公开内容W其整体在此通过引用并入本申请中，W更完整地描述本发明W及本发明 所属领域的状态。
[0011] 待解决的技术问题
[0012] 本发明人进行了大量的研究来开发能够预防或治疗肥R2相关疾病（特别是癌症 (更特别地，乳腺癌和胃癌））的抗体。特别地，本发明人进行了大量的研究来开发与曲妥 珠单抗组合的抗体，其能够克服与作为单一药剂的曲妥珠单抗治疗相关的抗癌功效的局限 性。结果，本发明人开发了本身具有显著抗癌功效并且与曲妥珠单抗组合具有高得多的功 效的新抗体，其用于预防或治疗癌症（特别是乳腺癌和胃癌，更特别地是表达肥R2的乳腺 癌和胃癌）。
[0013]因此，本发明的一个目的是提供人表皮生长因子受体2 (肥R2)的抗体或其抗原结 合片段。
[0014] 本发明的另一个目的是提供编码本发明的肥R2抗体或其抗原结合片段的核酸分 子。
[0015] 本发明的另一个目的是提供携带所述核酸分子的重组载体。
[0016] 本发明的另一个目的是提供感染有所述重组载体的宿主细胞。
[0017] 本发明的另一个目的是提供用于预防或治疗癌症的药物组合物。
[0018] 本发明的另一个目的是提供用于诱导调亡的药物组合物。通过W下发明详述并结 合所附权利要求和附图，本发明的其他目的和优点将变得明显。
[001引发明详述
[0020] 在本发明的第一个方面，提供了人表皮生长因子受体2(肥R2)的抗体或其抗原结 合片段，其包含：
[0021] (a)重链可变区，其包含沈QIDNO:1的互补决定区（CDR)HU沈QIDNO:2的 CDR肥和下式1所示的CDR册：
[0022] Xl-X2-X3-X4-X5-X6-X7-Phe-Asp-Tyr(1)
[0023]其中Xl表不His、Asn、Ser或Ala ;X2表不Leu、F*he、Tyr、His、Met、T巧、Asn、Ile 或Ala ;X3表示Gly或切S;X4表示Gly或Ser ;X5表示I"虹、Met或Ala ;X6表示Ala、Ser、 Gly或I'虹；并且X7表示Ser、Ala、切S或I'虹；W及
[0024] 化）轻链可变区。
[00巧]本发明人进行了大量的研究来开发能够预防或治疗肥R2相关疾病（特别是癌症 (更特别地，乳腺癌和胃癌））的抗体。特别地，本发明人进行了大量的研究来开发与曲妥 珠单抗组合的抗体，其能够克服与作为单一药剂的曲妥珠单抗治疗相关的抗癌功效的局限 性。结果，本发明人开发了本身具有显著抗癌功效并且与曲妥珠单抗组合具有高得多的功 效的新抗体，其用于预防或治疗癌症（特别是乳腺癌和胃癌，更特别地是表达肥R2的乳腺 癌和胃癌）。
[0026] 本发明抗体对肥R2具有特异性结合能力。特别地，本发明抗体与肥R2上不同于 曲妥珠单抗所结合表位的表位结合。
[0027] 本文使用的术语"曲妥珠单抗"是指美国专利No. 5, 821，337中公开的抗体。
[002引本发明抗体对多种表达肥R2的癌细胞表现出细胞毒性作用或增殖抑制作用。与 癌细胞结合时，术语"细胞毒性"和"增殖抑制"之间没有预期的差异，并且运些术语在本文 中可互换使用。
[0029] 本文使用的术语"抗体"是指肥R2特异性抗体，包括全抗体W及抗体的任意抗原 结合片段。
[0030] 全抗体包括两个全长轻链和两个全长重链，并且每个轻链通过二硫键与重链 连接。重链恒定区包括5种不同的同种型（y、y、a、5和〇,其被归类为丫1、丫 2、 丫3、丫4、a1和a2亚组。轻链恒定区包括两个不同的同种型（K和A)(Cellularand MolecularImmunology,Wonsiewicz，M.J.，编辑，第 45 章，第 41-50 页，W.B.Saunders Co.Philadelphia，PA(1991) ;Nisonoff，A.，IntroductiontoMolecularImmunology，第 2 版，第 4 章，第 45-65 页，sinauerAssociates,Inc.，Sunderland,MA(1984))。
[0031] 抗原结合片段是指任何能够与抗原结合的抗体片段，包括Fab、F(ab'）、F(ab'）2、 Fv等。Fab具有一个抗原结合位点，其由抗体的重链可变结构域和轻链可变结构域、轻链恒 定结构域和重链第一恒定结构域（CHi)构成。F油'不同于F油在于在重链CHi结构域的C 末端具有包含一个或更多个半脫氨酸残基的较链区。通过在F油'较链区的半脫氨酸残基 之间形成二硫键来产生F(ab' )2抗体。Fv是由重链可变区和轻链可变区构成的最小抗体 片段，并且制备Fv片段的重组技术公开于PCTWO88/10649、W0 88/106630、W0 88/07085、 WO88/07086和WO88/09344中。在双链中，重链和轻链的可变区通过非共价键连接，而在 单链Fv中，重链和轻链的可变区通常经由肤接头通过共价键连接，或者在C末端彼此直接 连接形成二聚体（例如双链Fv)。可使用蛋白水解酶获得运样的抗体片段（例如，用木瓜蛋 白酶消化全抗体W产生F油片段，而胃蛋白酶处理导致产生F(油'）2片段），并且可W通过 遗传重组技术来制备运样的抗体片段。
[0032] 根据一个实施方案，本发明抗体包括F油抗体和全抗体。此外，重链恒定区选自由 丫、y、曰、5或e组成的同种型。优选地，重锥直定区包括丫1、丫3和丫4同种型，最优 选Tl同种型。轻链恒定区可W是K和A同种型，优选K同种型。因此，本发明抗体的 一个优选实施方案是包含K轻链和丫 1重链的F油或IgGl抗体。
[0033] 本文使用的术语"重链"是指全长重链及其一部分二者，其包含含有用于特异性结 合抗原之可变区序列的氨基酸序列的可变结构域（Vh)和=个恒定结构域（句1、Ch2和CJ。 本文使用的术语"轻链"是指全长轻链及其一部分二者，其包含含有用于特异性结合抗原之 可变区序列的氨基酸序列的可变结构域（\)和恒定结构域（CJ。
[0034]本文使用的术语"CDR(互补决定区，complementaritydeterminingregion)" 是指免疫球蛋白的重链超变区和轻链超变区的氨基酸序列化油at等，Sequencesof ProteinsofImmunologicalInterest，第 4 片反，U.S.DepartmentofHealthandHuman Services,化tionalInstitutesofHealth(1987))。每个重链和轻链包含S个CDR(重链 (CDRHUCDR肥和CDR册）W及轻链（CD化1、CD化2和CD化3))。CDR提供了在抗体与抗原或 表位结合中具有重要作用的接触残基。
[003引在本发明抗体中，CDR册如式1所示。
[0036] 在式1中，Xl表示His、Asn、Ser或Ala;特别地为His、Asn或Ser;更特别地为 His或Asn;更特别地为His。
[0037]在式 1 中，X2 表示Leu、化6、Tyr、His、Met、T巧、Asn、Ile或Ala;特别地为Leu、 Phe、Tyr、His、Met、T;rp、Asn或Ile;更特别地为Leu、Phe或Tyr;更特别地为Leu。
[0038] 在式I中，X3表示Gly或切S ;特别地为Gly。
[003引在式1中，X4表示Gly或Ser;特别地为Gly。
[0040] 在式1中，X5表示1'虹、Met或Ala;特别地为1'虹。
[0041]在式1中，X6表示Ala、Ser、Gly或1'虹；特别地为Ala。
[0042] 在式1中，X7表示Ser、Ala、切S或1'虹；特别地为Ser。
[0043] 根据一个实施方案，Xl表示His、Asn或Ser;X2表示Leu、Phe或Tyr;X3表示Gly; X4 表示Gly;X5 表示 1'虹、Met或Ala;X6 表示Ala、Ser、Gly或 1'虹；并且X7 表示Ser、Ala、 切S或ThrO
[0044] 更特别地，Xl表示His、Asn或Ser;X2表示Leu、Phe或Tyr;X3表示Gly;X4表示 Gly;X5表示1"虹；X6表示Ala;并且X7表示Ser。
[0045] 更特别地，CDR册包含选自沈QIDNO:3、27-28、32和39-86的氨基酸序列；更特 别地，CDR册包含沈QIDNO:3、43、64、67、71、76、83、84或85的氨基酸序列；最特别地，SEQ IDNO:3。
[0046] 根据一个实施方案，轻链可变区包含SEQIDNO:4的CD化1、沈QIDNO:5的CD化2 和下式2所示的CD化3 :
[0047] Yl-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Pr〇-T巧-T虹 （2)
[0048]其中，Yl表不GlruAsp或Ala;Y2 表不GlruAsn、Glu或Ala;Y3 表不Leu、Met、 Asn、lie、Ser、Thr、Ala或Lys;Y4 表示Tyr、Ala、Ser、Arg、Val、Gly、Met或Phe;Y5 表示 Ser、Phe、Tyr、Arg、lie、Gly、Lys、Asn、Val或Ala;并且Y6 表不Thr、Ser、Val、lie、Ala、 Gly、Asn、Glu、Phe或Leu。
[0049] 在式2中，Yl表示Gin、Asp或Ala;特别地为Gln或Asp;更特别地为Gin。
[0050] 在式2中，Y2表示Gin、Asn、Glu或Ala;特别地为Gin、Asn或Glu;更特别地为 Gin。
[0051]在式 2 中，Y3 表示Leu、Met、Asn、lie、Ser、1"虹、Ala或Lys;特别地为Leu、Met、 Asn、lie、Ser或！'虹；更特别地为Leu、Met、Asn或lie;更特别地为Leu或Met;更特别地 为Leu。
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