一株热反硝化地芽孢杆菌cf-1及其用图
【专利说明】-株热反硝化地芽抱杆菌CF-1及其用途 -、技术领域
[0001] 本发明属于微生物生物技术和环境生物技术领域，具体地说，它设及一株热反硝 化地芽抱杆菌Geobacillusthermodenitrificans.CF-I菌株及其在微生物采油中的应用。 二、【背景技术】
[0002] 当前，微生物采油技术在全球范围蓬勃发展，不断取得重大突破，成为石油开发领 域的研究热点。其中，高效的微生物采油菌种是各项微生物技术的基础和关键，菌种性能 的好坏直接影响到各项技术的应用效果。因此，获取高性能的采油菌种是微生物采油的重 要研究内容之一。微生物采油技术要求所用菌种最好能够在油藏条件下利用原油为碳源生 存，并产生对驱油有利的代谢产物，例如生物表面活性剂、生物乳化剂、有机酸、醇W及溶剂 和气体。
[0003] 油藏是个高溫、高压的极端环境，对采油菌种的要求很高。目前筛选得到的采油菌 种性能各异，很难同时具有优良的驱油性能和很好的油藏环境适应性，矿场应用范围因此 受到很大限制。 H、
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种热反硝化地芽抱杆菌 (Geobacillusthermodenitrificans)CF-I菌株和该菌在微生物义油中的应用。
[0005] 本发明提供的热反硝化地芽抱杆菌（Geobacillusthermodenitrificans)CF-I菌 株，W下简称CF-I，于2015年4月8日保藏于"中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中屯、"（北京市朝阳区北辰西路1号中国科学院微生物研究所），其保藏编号为"CGMCC No. 10697 "，分类命名中文名称为"热反硝化地芽抱杆菌"，拉下文名称为"Geobaci1Ius thermodenitrificans"。
[0006] 本发明提供的热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697菌株，是从胜利油田油水 井样品中通过65°C、IOMPa条件下W原油为碳源的富集培养和原油平板产扩油圈法筛选得 至IJ，并通过耐溫耐盐性能考察反复筛选传代获得。
[0007] 热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697的形态学特性：在好氧固体培养 基下培养3~5d出现大小一般为0. 5~1.Omm纯白色菌落，细胞形态为长杆状，大小 5-10JimXO. 2-0. 5Jim。 阳00引热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697的生理生化特性：好氧，生长溫度50~ 80°C，生长抑值范围4~9,最佳生长抑范围7~7. 5,化Cl的耐受性0~5%。
[0009] 热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697的营养培养基：薦糖0. 3%，蛋白腺 0.3%,KzHPOa0.2%，抑值为 7.0 ~7. 5。
[0010] 热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697发酵条件：接种量1 %，接种龄12h，初 始抑7. 5,溫度65°C，揽拌速度150巧m，pH= 7,通气量：lL/min。
[0011] 热反硝化地芽抱杆菌CF-ICGMCCNo. 10697的性能评价参数：W原油为唯一碳源 的生长能力、发酵液乳化能力、改变岩石润湿性能力、物理模拟实验提高采收率值。
[0012] 热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697的性能评价方法：
[0013] (1)W原油为唯一碳源的生长能力评价
[0014] 将热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697接种于W原油为唯一碳源的控类培 养基中，65°C、ieOrpm下振荡培养3d，进行细菌密度测试。
[0015] (2)发酵液乳化能力测试
[0016] 取一试管，加等体积的热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697发酵液和柴油后 利用微型旋满混合仪高速满旋震荡2min后混匀，65°C下静置2地，分别测定乳化层和总烧 控层的体积，相比即为乳化系数，用乳化系数表示其乳化能力的大小。
[0017] (3)改变岩石润湿性能力评价
[0018] 取亲油石英矿片分别放入热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697发酵液中，置 摇床65°C培养7天，取出试片，采用SY/T5153-2007 "油藏岩石润湿性测定方法"中方法测 试接触角0。。
[0019] (4)物理模拟实验提高采收率值评价
[0020] ①岩屯、准备：包括岩屯、的洗刷和灭菌，测定空气渗透率；
[0021] ②抽真空、饱和地层水，测定岩屯、孔隙度；
[0022] ③饱和原油，岩屯、老化7天，计算束缚水饱和度；
[0023] ④一次水驱，水驱至采出水含水98%W上，计算一次水驱采收率；
[0024] ⑥注入热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697发酵液0. 2PV~0. 3PV;
[00巧]⑧二次水驱，水驱至含水100%W上，产出液破乳后，计算热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697发酵液提高采收率值。
[0026] 热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697的性能：W原油为唯一碳源生长，细菌 浓度可达3X108个/mL;发酵液乳化系数大于95%;发酵液可将石英矿片接触角0。由90~ 150°降低至25~50°，由亲油转变为亲水；物理模拟实验提高采收率值大于15%。
[0027] 热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697的现场应用工艺：一种是微生物驱油， 即直接利用发酵液与油田注入水混合注入油藏中进行驱油；一种是微生物单井吞吐，即 通过油井向地层注入发酵液，利用热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697繁殖代谢提 高单井产能；另外一种是微生物防蜡，将发酵液注入油井井筒，利用热反硝化地芽抱杆菌 CF-1CGMCCNo. 10697在井筒中与原油及井筒表面作用，减缓井筒结蜡。
[0028] 所述的利用发酵液与油田注入水混合注入油藏中进行驱油，是将发酵液与注入水 按照体积比为1 : 500~1000比例混合后注入油藏，混合液注入总量为油藏孔隙体积的 20%~30%，注入速度为 500 ~10001113/(1。 W29] 所述的通过油井向地层注入发酵液，利用热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCC No. 10697繁殖代谢提高单井产能，是根据油井的油层有效厚度、孔隙度和处理半径，计算得 出发酵液注入量；用累车将配制好的发酵液经油井油套环空注入地层；油井关井培养10~ 20d后开井生广。
[0030] 所述的将发酵液注入油井井筒，利用热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697在 井筒中与原油及井筒表面作用，减缓井筒结蜡，是用加药累将200~400Kg热反硝化地芽 抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697发酵液由油井的套管加入油套环空，加入速度为300~60化/ min,每20~30d投加一次发酵液。
[0031] 本发明的优点和有益效果在于：
[0032] 本发明提供的热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697生长溫度50~80°C，生 长抑值范围4~9,耐盐0~5%，能够W原油为唯一碳源生长，发酵液乳化系数大于95%; 发酵液可将石英矿片接触角目。由90~150°降低至25~50°，物理模拟实验提高采收 率大于15 %，该菌株发酵液应用于现场微生物驱油，提高采收率大于5. 0 %，应用于现场微 生物单井吞吐，平均单井增油量大于200吨，应用于现场微生物防蜡，平均延长油井免热洗 周期60天W上。 四、
【附图说明】
[0033] 附图1为CF-I菌株的形态图；
[0034] 附图2为CF-I在不同溫度下培养的生长曲线； 阳03引附图3为CF-I在不同抑培养的细菌浓度；
[0036] 附图4为CF-I在不同盐度条件下培养的细菌浓度；
[0037] 附图5为CF-IW原油为碳源的生长曲线；
[0038] 附图6为CF-I发酵液对柴油的乳化性能测试结果；
[0039] 附图7为CF-I改变岩石润湿性的测试结果。 五、
【具体实施方式】
[0040] 下面结合具体实施例对本发明进行详细的说明。 阳OW 实施例1:
[0042] 本发明提供的热反硝化地芽抱杆菌CF-1CGMCCNo. 10697的形态特征和生理生化 特征。
[0043] 参照《Bergey'SMannualofSystematicBacteriology》的实验方法进行，检测 其革兰氏染色，菌体大小和形态，有无鞭毛和芽抱，生长溫度，W及触酶、淀粉水解、明胶液 化、半乳糖、木糖、乳糖等生化特征。
[0044] 研究结果表明，如图1所示，该菌株为革兰氏染色阳性、菌体呈长杆状、周生鞭毛、 能运动、好氧、有芽抱生成，细胞大小5-10ymXO. 5ym。生长溫度50~80°C，最适生长溫 度65°C，生长抑范围4~9,化Cl耐受性0~5% (图2~图4)。接触酶、淀粉水解酶、明 胶液化、麦芽糖、D-半乳糖、a-D-葡萄糖、巧樣酸、D-松S糖、薦糖、D-海藻糖均表现为阳 性，D-阿拉伯醇、山梨醇、班巧酸