一种细黄链霉菌及其在温室大棚土壤修复中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及农业微生物应用技术领域，具体地说，本发明设及一种自行选育筛选 的细黄链霉菌及在溫室大棚±壤修复中应用的技术领域。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着我国现代农业的迅猛发展，溫室大棚蔬菜、水果、花弁等栽培面积不 断得到扩大，然而，带来了许多的问题，农作物重巷的面积不断增加，造成±壤恶化，随着 ±壤次生盐的不断积累，盐溃化日趋严重，导致生产的蔬菜、水果等农副产品产量低下，质 量较差。同时，溫室大棚的种植户为了快速的回收成本，多创效益，连巷种植各种作物，使得 大棚的±地得不到任何休闲，±壤肥力严重下降，单靠使用无机化肥是不能从根本上解决 问题的，而且会使得±壤板结，离子括抗，生产的蔬菜等作物达不到规定的标准。所W增肥 地力，促进营养平衡，提高大棚±壤生产潜力，是作物高产、优质的基础措施。
[0003] 西北有些地区的气候特点是干旱少雨，蒸腾量大于降雨量，多数地方呈现出盐碱 地。故此，大棚±壤盐溃化也是如此。盐溃化的特点具体表现为，±壤湿度大时为黑灰色， 上壤干旱时呈白色，有时有结晶块，运时，上壤盐离子的含量一般在0.5%左右，瓜果、蔬菜 对±壤中盐离子浓度适用范围一般在0.2-0. 3%，超过此范围就会严重影响作物的生长， 作物根系就向泡在咸菜缸内，因反渗透而衰亡。
[0004] 有关从溫室大棚±壤中分离筛选能够改良溫室大棚±壤的菌种，W及利用自行选 育筛选驯化获得的细黄链霉菌与其他多菌种根据菌种的相融性、适用性和安全性基本要求 和菌种特性制备±壤修复剂用于改良溫室大棚±壤的研究还未见报道。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术中未见有关从溫室大棚±壤中筛选细黄链霉菌作为优良菌种并与 多菌种相配伍相融合制备溫室大棚±壤修复剂的技术现状，本发明旨在提供一种细黄链霉 菌及其用于溫室大棚±壤修复中的应用。本发明通过在溫室大棚±壤中分离出一批微生物 菌株，从中分离筛选出一株编号为X服0032化的菌株，并通过利用编号为X服0032化的细黄 链霉菌，与藤黄微球菌、己斯德芽抱杆菌和热带假丝酵母菌相配伍相融合制备±壤修复组 剂，有效地改良和活化±壤，降解±壤中的有害物质，解决±壤的盐溃化问题，解决实际设 施大棚中±壤养分失衡、盐溃化、沙化或者板结严重的现状，综合将对于蔬菜生产的不利影 响降低到最低限度，有利于提高蔬菜的产量和品质，获得良好的技术效果，在溫室大棚± 壤修复中具有广泛而现实的价值。
[0006] 本发明采用主要的技术方案：
[0007] 通过微生物菌种的分离筛选，在溫室大棚±壤中分离出一批微生物菌株，经过进 一步分离、筛选、选育、驯化，获得一株编号为X服0032化的细黄链霉菌株。通过对所获菌 株进行形态特征、生理生化特性及16srDNA区段序列测定及系统发育分析，初步确定了其 分类地位。同时，将编号为X服0032化的细黄链霉菌株与藤黄微球菌、己斯德芽抱杆菌和 热带假丝酵母菌相配伍相融合制备溫室大棚±壤修复组剂，按照重量份比核计，W编号为X服0032化的细黄链霉菌株70份-85份、藤黄微球菌20份-35份、己斯德芽抱杆菌25份-40 份和热带假丝酵母菌15份-30份进行混合，菌种混合液充分吸附于载体中，并与辅料相混 合，通过利用发酵技术制备溫室大棚±壤修复组剂。利用溫室±壤修复剂可W改良溫室大 棚±壤的品质，有效地防治蔬菜生育期的各类病害，将溫室大棚±壤对蔬菜生产的不利影 响降低到最低限度，有效地改良和活化±壤、降解±壤中的有害物质、解决±壤的盐溃化问 题，将±壤对果蔬生产中的不利影响降低到最低限度，有利于提高蔬菜的产量和品质，获得 良好的技术效果，在溫室大棚上壤修复中具有现实的意义和作用。
[0008] 本发明具体提供一种细黄链霉菌（Str巧tomycesmicroflavus)，通过在溫室 大棚±壤中分离、筛选、驯化和培养，获得一批放线菌类微生物菌株，从中筛选出一株 编号为X服0032化的菌株，经微生物学分类与鉴定，属于细黄链霉菌（Str^tomyces microfl曰VUS)O
[0009] 具体的，本发明提供菌株编号为X服0032化的细黄链霉菌（Str^tomyces microflavus)。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3 号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。保藏日期是2014年7月10日，保藏号是CGMCC No. 9432。经微生物学鉴定为Streptomycesmicroflavus。该菌株最适生长条件为：溫度 30°C，培养基采用ISP2培养基，抑7. 2,时间4d;该菌株基内菌丝多分枝，不断裂，气生菌 丝丰富，抱子链直且长，偶有波曲，抱子呈柱状；菌株在多数培养基上生长良好，气高氏淀 粉琼脂上气生菌丝体白至杏仁黄色，成熟时粉红发紫；基内菌丝体黄色，可溶性色素微染； 气丝粉红色或粉红賴草色，毛状和粉状；基丝好，无色或略微黄色、賴草色、浅栋色或微黄褐 色，无可溶色素；经微生物学鉴定为Streptomycesmicroflavus菌。参照《真菌鉴定手册》 对编号X服0032化菌株进行系统生理生化鉴定，经生理生化检测确定编号X服0032化菌株 为链霉属（Str巧tomyces)中的成员。通过BLAST同源比对，菌株X服0032化的16srDNA 序列序列在NCBI数据库中进行BLAST分析后，构建系统进化树，该编号为菌株X服0032化 与Str巧tomycessilaceusCB5G6处于最小分支，是其近似种，其同源性为95%;进而将 该菌株X服0032化确定为Streptomycesmicroflavus,经过上述系统分类学鉴定分类，证 明了本发明提供的细黄链霉菌（Str巧tomycesmicroflavus)与常见的细黄链霉菌有一定 的生理生化特性差异和分子水平的差异性，依据菌种生理生化特性分析，分子水平分析及 系统分类学的综合鉴定，编号为X服0032化的菌种尽管在生理生化特性和分子水平方面与 常见的白地霉有明显的差异，从分类学鉴定为细黄链霉菌（Str巧tomycesmicroflavus)。
[0010] 本发明提供一种细黄链霉菌（Str巧tomycesmicroflavus)X服0032化CGMCC NO. 9432在溫室大棚±壤修复中的应用。通过利用XHS0032化菌株制备±壤修复剂应用于 改良溫室大棚的±壤，有效地改良和活化±壤、降解±壤中的有害物质、解决±壤的次生盐 溃化问题，获得显著良好的技术效果。
[0011] 同时，本发明具体提供一种溫室大棚±壤修复组剂的制备方法，具体制备方法步 骤如下：
[001 引（l)接种：制备细黄链霉菌（Str巧tomycesmicroflavus)X服0032XhCGMCC NO. 9432、藤黄微球菌、己斯德芽抱杆菌和热带假丝酵母菌四种菌种的固体培养基，灭菌后 严格进行无菌操作，从斜面转接至平板，溫度30°C下培养3天。
[0013] (2) -级培养：从步骤（1)中的固体培养基上挑取单菌落转接至装有液体培养基 的50血锥形瓶中，无菌操作，30°C、120r/min培养2地-4她。
[0014] 做二级发酵：将上述步骤一级培养菌种接种于盛有液体培养基的SOOmL锥形瓶 中，无菌操作，30°C、120;r/min培养24h-4她。
[0015] (4)菌种发酵液的配伍：按照重量份比核计，选用步骤（3)制备的细黄链霉菌 (Str巧tomycesmicroflavus)X服0032化CGMCCNO. 9432 的二级发酵液 70 份-85 份、藤黄 微球菌二级发酵液20份-35份、己斯德芽抱杆菌二级发酵液25份-40份和热带假丝酵母 菌二级发酵液15份-30份进行混合，制备复合菌种的混合液。
[0016] (5)添加辅料：将步骤（4)制备的复合菌种混合液充分吸附于载体中，载体选用溫 室大棚±壤；辅料采用尿素和过憐酸巧，其中尿素与过憐酸巧的重量比为1:2 ;载体和辅料 的用量按照重量比为1:2. 5配比混合，加水至含水量40-70%，然后按体积比每立方米载体 与辅料混合用料加入上述步骤（4)制备的复合菌种混合液100-300g，并混合均匀，制备获 得溫室大棚±壤修复组剂。
[0017] 进一步，本发明提供应用上述溫室大棚±壤修复组剂在溫室大棚中的应用。通过 利用自行筛选分离驯化获得细黄链霉菌（Str巧tomycesmicroflavus)X服0032化CGMCC NO. 9432,通过实践与藤黄微球菌、己斯德芽抱杆菌和热带假丝酵母菌S种菌种融合试验， 实践证明制备的±壤修复组剂应用于改良溫室大棚的±壤，对于改良和活化±壤、降解± 壤中的有害物质、解决±壤的盐溃化问题，获得显著突出的技术效果。
[0018] 本发明同时提供上述溫室大棚±壤修复组剂的应用方法：在空气溫度28-30°C 下堆制；堆制是在覆盖草帘下进行，堆制开始后每30天翻堆一次，翻堆时补水至含水量 40-70%，堆制时间持续120天；堆制完成后摊惊至干燥后即可直接施用于±壤。