一种胡芦巴多糖的提取纯化方法及其作为保润剂在卷烟中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种植物提取物及其应用，具体涉及一种胡芦巴多糖的提取纯化方法 及其作为保润剂在卷烟中的应用。
【背景技术】
[0002] 胡芦巴（Trigonellafoenum-graecumL.)别名香苜蓿、香豆子，为一年生草本植 物，胡芦巴属草本芳香植物，主要种植于西北地区。胡芦巴不仅是一种蔬菜，也是一种药材， 可以补肾阳、祛寒湿、治寒病。胡芦巴化学成分主要有胡芦巴碱、胆碱、烟酰胺等。胡芦巴酊 剂和浸膏应用在卷烟中可以抑制烟草辛辣的刺激性、掩盖杂气。关于胡芦巴多糖的相关报 道目前主要集中在医用方面，在烟草中的应用，目前尚未见报道。
[0003] 多糖是由大量单糖聚合而成，含有大量的羟基，其大量的羟基可以和水分子形成 氢键，从而使多糖具有较强的持水能力。
[0004] 目前，我国卷烟工业中为了维持加工过程中烟丝的含水率，减少加工过程中的造 碎，主要采用甘油、丙二醇和山梨醇等多羟基物质为保润剂，但现有保润剂对于卷烟产品含 水率的维持，吸食舒适度的改善效果不太理想。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是：在目前卷烟工业中常用保润剂使用效果欠佳的前提 下，提供一种胡芦巴多糖提取纯化方法及其作为保润剂在卷烟中的应用。利用本发明技术 方案提取的胡芦巴多糖纯度高，将提取的精制胡芦巴多糖作为保润剂应用于卷烟中，可以 有效地降低卷烟的刺激性和杂气，提高卷烟的圆润感和舒适性。
[0006] 为了解决上述问题，本发明采取的技术方案为： 本发明提供一种胡芦巴多糖的提取纯化方法，所述提取纯化方法包括以下步骤： a、 粉碎：将称取的胡芦巴粉碎成40~60目的胡芦巴粉； b、 闪式提取：将步骤a得到的胡芦巴粉加入闪式提取器中，并加入胡芦巴粉质量20~ 30倍的蒸馏水，然后采用闪式提取器进行提取，得到第一次提取液； c、 离心分离：将步骤b得到的第一次提取液进行离心分离，离心后得到第一次上清液； d、 将步骤c离心后所得残渣按照上述步骤b、c方法再提取、离心分离一次，得到第二次 上清液，合并两次所得上清液； e、 闪式浓缩：将步骤d得到的上清液采用闪式浓缩器进行浓缩，浓缩后得到浓缩液； f、 乙醇沉淀：将步骤e得到的浓缩液中加入无水乙醇至体系乙醇浓度为60~80%进行 醇沉，4°C条件下静置20~24h;然后在8000~10000r/min下离心10~15min，离心后 得到胡芦巴粗多糖； g、 将步骤f得到的胡芦巴粗多糖加入3~5倍质量的水进行溶解，得到胡芦巴粗多糖 水溶液，采用Sevage法脱除蛋白质，脱除蛋白质后的胡芦巴多糖溶液按照步骤e、f依次进 行闪式浓缩、醇沉，然后静置离心取其沉淀，所得沉淀经过冷冻干燥得到精制胡芦巴多糖。
[0007] 根据上述的胡芦巴多糖的提取纯化方法，步骤b中提取条件为：在温度为50~ 7(TC、15000~20000r/min下提取2 ~3min。
[0008] 根据上述的胡芦巴多糖的提取纯化方法，步骤c中离心分离的条件为：在2~ 6°C、8000 ~10000r/min条件下离心 10 ~15min。
[0009] 根据上述的胡芦巴多糖的提取纯化方法，步骤e中浓缩时的条件为：真空度为 0. 08~0. 09MPa，温度为70~80°C，浓缩时间为20~25s。
[0010] 根据上述的胡芦巴多糖的提取纯化方法，步骤g中所述采用Sevage法脱除蛋白 质，其具体操作方法为：将所得胡芦巴粗多糖水溶液与Sevage试剂混合，萌芦巴粗多糖水 溶液与Sevage试剂之间加入的体积比为5~3:1，在频率160~200r/min条件下，振摇 20~30min，蛋白质变性生成凝胶，离心分离，分去水层和试剂层交界处的变性蛋白质；重 复上述步骤三次，得到脱除蛋白质后的萌芦巴多糖溶液。
[0011] 根据上述的胡芦巴多糖的提取纯化方法，所述Sevage试剂为氯仿和戊醇按照体 积比5:1形成的混合物，或者为氯仿和正丁醇按照体积比5:1形成的混合物。
[0012] -种利用上述方法得到的胡芦巴多糖作为保润剂在卷烟中的应用。
[0013] 根据上述的胡芦巴多糖作为保润剂在卷烟中的应用，所述胡芦巴多糖的用量为烟 丝质量的0. 005~0. 1%。
[0014] 萌芦巴多糖作为保润剂在卷烟应用中，添加方式为用水稀释后均匀喷洒到烟丝 中，多糖加入量为烟丝质量的0. 005~0. 1%。
[0015] 本发明的积极有益效果： 1、通过本发明技术方案提取纯化能够得到较高纯度的精制胡芦巴多糖，将本发明所得 高纯度精制胡芦巴多糖应用于卷烟中，可以降低卷烟的刺激性和杂气，提高卷烟的圆润感 和舒适性(详见表1)。
[0016] 2、与现有技术相比，本发明还具有以下主要优点： (1) 本发明采用闪式提取法提取胡芦巴多糖，可以缩短提取时间，提高提取率； (2) 本发明提取工艺简便，设备运行和维护成本低，有利于保持多糖的结构完整性和生 物活性； (3) 本发明采用Sevage法除蛋白质，获得了较高纯度多糖，整个过程条件温和，使用的 原料和试剂廉价易得，操作简单，且便于较大规模生产； (4) 经过实验证明，本发明胡芦巴多糖对烟草制品的保润效果明显(详见附图1、2)。 [0017]
【附图说明】： 图1本发明多糖溶液标准曲线。
[0018] 图2将本发明所得胡芦巴多糖、丙二醇和水分别添加应用到卷烟中，在低湿环境 下烟丝含水率变化趋势图。
[0019] 图3将本发明所得胡芦巴多糖、丙二醇和水分别添加应用到卷烟中，在高湿环境 下烟丝含水率变化趋势图。
[0020]
【具体实施方式】： 以下结合实施例进一步阐述本发明，但并不限制本发明的内容。
[0021] 实施例1 : 本发明胡芦巴多糖的提取纯化方法，其详细步骤如下： a、 粉碎：首先将称取的胡芦巴粉碎成40~60目的胡芦巴粉； b、 闪式提取：将步骤a得到的胡芦巴粉100g加入闪式提取器中，并加入胡芦巴粉质量 24倍的50°C蒸馏水，然后采用闪式提取器进行提取，在50°C、20000r/min下提取2min，得到 第一次提取液； c、 离心分离：将步骤b得到的第一次提取液进行离心分离，即在4°C、8000r/min条件 下离心lOmin，离心后得到第一次上清液； d、 将步骤c离心后所得残渣按照上述b、c方法再提取、分离一次，得到第二次上清液， 合并两次所得上清液； e、 闪式浓缩：将步骤d得到的上清液用闪式浓缩器进行浓缩(浓缩时真空度为 0. 08MPa，温度为70°C，浓缩时间为25s)，得到浓缩液； f、 乙醇沉淀：将步骤e得到的浓缩液中加入无水乙醇至体系乙醇浓度为60%进行醇沉， 4°C条件下静置24h;然后在8000r/min下离心lOmin，离心后得到胡芦巴粗多糖； g、 将步骤f?得到的萌芦巴粗多糖加入3倍质量的蒸馏水进行溶解，得到萌芦巴粗多糖 水溶液，采用Sevage法脱除蛋白质(采用的Sevage试剂为氯仿和戊醇按照体积比5:1形成 的混合物，萌芦巴粗多糖水溶液和Sevage试剂之间加入的体积比为4:1)，脱除蛋白质后的 胡芦巴多糖溶液按照步骤e、f?依次进行闪式浓缩、醇沉，然后静置离心取其沉淀，所得沉淀 经过冷冻干燥得到精制胡芦巴多糖12. 61g，收率12. 61%，多糖含量27. 30%。
[0022] 实施例2 : 本发明胡芦巴多糖的提取纯化方法，其详细步骤如下： a、 粉碎：首先将称取的胡芦巴粉碎成40~60目的胡芦巴粉； b、 闪式提取：将步骤a得到的胡芦巴粉100g加入闪式提取器中，并加入胡芦巴粉质量 27倍的60°C蒸馏水，然后采用闪式提取器进行提取，在60°C、20000r/min下提取2min，得到 第一次提取液； c、 离心分离：将步骤b得到的第一次提取液进行离心分离，即在4°C、8000r/min条件 下离心10min，离心后得到第一次上清液； d、 将步骤c离心后所得残渣按照上述b、c方法再提取、分离一次，得到第二次上清液， 合并两次所得上清液； e、 闪式浓缩：将步骤d得到的上清液用闪式浓缩器进行浓缩(浓缩时真空度为 0. 09MPa，温度为75°C，浓缩时间为22s)，得到浓缩液； f、 乙醇沉淀：将步骤e得到的浓缩液中加入无水乙醇至体系乙醇浓度为70%进行醇沉， 4°C条件下静置24h;然后在8000r/min下离心10min，离心后得到萌芦巴粗多糖； g、 将步骤f?得到的萌芦巴粗多糖加入5倍质量蒸馏水进行溶解，得到萌芦巴粗多糖水 溶液，采用Sevage法脱除蛋白质（采用的Sevage试剂为氯仿和戊醇按照体积比5:1形成的 混合物，萌芦巴粗多糖水溶液和Sevage试剂之间加入的体积比为5:1)，脱除蛋白质后的胡 芦巴多糖溶液按照步骤e、f?依次进行闪式浓缩、醇沉，然后静置离心取其沉淀，所得沉淀经 过冷冻干燥得到精制胡芦巴多糖14. 00g，收率14. 00%，多糖含量29. 10%。
[0023] 实施例3: 本发明胡芦巴多糖的提取纯化方法，其详细步骤如下： a、 粉碎：首先将称取的胡芦巴粉碎成40~60目的胡芦巴粉； b、 闪式提取：将步骤a得到的胡芦巴粉100g加入闪式提取器中，并加入胡芦巴粉质量 30倍的70°C蒸馏水，然后采用闪式提取器进行提取，在70°C、15000r/min下提取3min，得到 第一次提取液； c、 离心分离：将步骤b得到的第一次提取液进行离心分离，即在6°C、9000r/min条件 下离心lOmin，离心后得到第一次上清液； d、 将步骤c离心后所得残渣按照上述b、c方法再提取、分离一次，得到第二次上清液， 合并两次所得上清液； e、 闪式浓缩：将步骤d得到的上清液用闪式浓缩器进行浓缩(浓缩时真空度为 0. 08MPa，温度为80°C，浓缩时间为20s)，得到浓缩液； f、 乙醇沉淀：将步骤e得到的浓缩液中加入无水乙醇至体系乙醇浓度为80%进行醇沉， 4°C条件下静置24h;然后在8000r/min下离心lOmin，离心后得到萌芦巴粗多糖； g、 将步骤f?得到的萌芦巴粗多糖加入4倍质量的蒸馏水进行溶解，得到萌芦巴粗多糖 水溶液，采用Sevage法脱除蛋白质(采用的Sevage试剂为氯仿和戊醇按照体积比5:1形成 的混合物，萌芦巴粗多糖水溶液和Sevage试剂之间加入的体积比为3:1)，脱除蛋白质后的 胡芦巴多糖溶液按照步骤e、f?依次进行闪式浓缩、醇沉，然后静置离心取其沉淀，所得沉淀 经过冷冻干燥得到精制胡芦巴多糖12. 80g，收率是12. 80%，多糖含量是25. 60%。
[0024] 实施例4 : 本发明胡芦巴多糖的提取纯化方法，其详细步骤如下