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【技术领域】
[0001] 本发明涉及来自髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG)的肽。具体地，本发明涉及包含 MOG的40-60区段的一部分的肽，其能够与MHC分子体外结合并被呈递给T细胞而无须抗原 加工。本申请还涉及该肽在治疗和/或预防疾病中的用途。
【背景技术】
[0002] 多发性硬化（MS)是影响中枢神经系统的慢性退行性疾病，特征在于神经轴突的 脱髓鞘。MS会造成众多生理和精神症状，并且通常发展为生理缺陷和认知功能障碍。疾病 通常在年轻人（20至40岁）中发病，在女性中更常见，并且在世界范围内影响超过一百万 人。
[0003]MS的病程各不相同，并且会潜伏或随时间稳步发展。已根据进展模式描述了MS的几种亚型。患有MS的人会患有几乎任何神经症状或迹象，包括知觉变化，如丧失敏感度 或发麻、刺痛或麻痹（感觉迟钝和感觉异常）、肌肉虚弱、阵挛、肌肉痉挛或移动困难；协调 和平衡困难（共济失调）；语言问题（构音障碍）或吞咽问题（吞咽困难）问题、视觉问题 (眼球震颤、视神经炎（包括光幻视）或复视）、疲劳、急性或慢性疼痛以及膀胱和肠困难。
[0004] 目前MS被认为是免疫介导性病症，其中人体自身的免疫系统攻击并损伤了髓鞘 质。
[0005] 没有已知的针对MS的治愈方法。已证明，几种现有疗法在疾病侵袭（复发）后的 功能恢复中、在防止或降低新的疾病侵袭（复发）的程度或频率中、或者在预防或降低残疾 程度中是有效的。然而，很多现有MS疗法有副作用或耐受不良。因而需要对能有效治疗MS 并有效缓解或减少MS的症状的MS替代疗法。
【发明内容】
[0006] 本发明人已确定了一系列衍生自髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的肽，所述肽可以通过 固定的抗原呈递细胞呈递给T细胞。这些肽可有效预防和/或治疗脱髓鞘疾病，如多发性 硬化。
[0007] 因此，在第一方面，本发明提供了能够与MHC分子体外结合并被呈递给T细胞而无 需抗原加工的肽（即apitope)，所述肽包含髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG)的40至60区 段的一部分。
[0008] 所述肽可包含髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的41至59区段的一部分。
[0009] 所述肽可选自以下髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽：MOG41-55、43-57、44-58和 45-59〇
[0010] 所述肽可为MOG41-55。
[0011] 在第二方面，本发明提供了根据本发明的第一方面的肽以用于治疗和/或预防脱 髓鞘疾病。
[0012] 在第三方面，本发明提供了包含一种或多种根据本发明的第一方面的肽的药物组 合物。
[0013] 在第四方面，本发明提供了治疗和/或预防有此需要的受试者中的脱髓鞘疾病的 方法，所述方法包含向所述受试者给药根据本发明的第一方面所述的肽的步骤。
[0014] 在第五方面，本发明涉及根据本发明的第一方面的肽在制造用于预防和/或治疗 脱髓鞘疾病的药物中的用途。
[0015] 与本发明的第二、第四和第五方面有关，所述疾病可为多发性硬化。
【附图说明】
[0016] 图1为显示不同MOG特异性杂交瘤克隆的肽特异性的图。
[0017] 图2显示了增殖恢复测定（recallproliferationassay)的结果，所述测定用于 测试用R0K5(M0G41-55)治疗小鼠的效果，在所述治疗之后用M0G35-55免疫接种，随后用 M0G35-55体外恢复。
[0018] 图3显示了来自小鼠的脾细胞的上清液的细胞因子分布，所述小鼠用R0K5或PBS 体内预处理，并用M0G35-55免疫接种，随后用M0G35-55体外恢复。
[0019] 图4图解说明体内EAE预防方案。
[0020] 图5显示了肽M0G35-55在鼠模型中诱导了EAE。
[0021] 图6显示了小鼠和人类R0K5apitope均可降低由M0G35-55诱导的疾病的严重性。
[0022] 图7显示了huR0K5降低了疾病的严重性，并造成疾病负担（diseaseburden)峰 的延迟。
【具体实施方式】
[0023] 在第一方面，本发明涉及一种肽。
[0024] 肽
[0025] 术语"肽"根据其标准含义是用来指一系列残基（通常为L-氨基酸），通常通过 a_氨基和相邻氨基酸的羧基之间的肽键彼此相连。该术语包括修饰的肽和合成的肽类似 物。
[0026] 本发明的肽的长度为能够与主要组织相容性复合体（MHC)I类或II类分子体外结 合并被呈递给T细胞而无需抗原加工。换句话说，该肽能够直接与MHC分子的肽结合槽结 合而无需在一个端点或两个端点进行任何修剪。
[0027] 与MHCI类分子结合的肽通常为7至13个氨基酸、更通常地为8至10个氨基酸 的长度。该肽的结合通过以下方式在其两个端点得到稳定，所述方式为肽的主链原子与所 有MHCI类分子的肽结合槽内的非可变位点之间的接触。在所述槽的两个端点处都具有非 可变位点，其与肽的氨基和羧基末端结合。肽长度的变化通过肽主链的卷曲来调节，通常在 允许所需柔性的脯氨酸或甘氨酸残基处发生。
[0028] 与MHCII类分子结合的肽通常为8至20个氨基酸之间的长度，更通常地为10至 17个氨基酸之间的长度。这些肽以沿着两端开放的MHCII肽结合槽（与MHCI类肽结合 槽不同）伸展的构象存在。主要通过主链原子与排列形成肽结合槽的保守残基接触而使肽 维持在合适的位置。
[0029] 本发明的肽可以通过化学方法制备（PeptideChemistry,Apractical Textbook.MikosBodansky,Springer-Verlag,Berlin.)。例如，可以通过固相技术合成 肽（RobergeJY等人（1995)Science269:202-204)，从树脂上切除，并通过制备性高效液 相色谱纯化（如Creighton(1983)ProteinsStructuresAndMolecularPrinciples,WH FreemanandCo,NewYorkNY)。例如，根据制造商提供的说明书使用ABI431A肽合成仪 (PerkinElmer)可实现自动合成。
[0030] 或者，可通过重组方式、或通过从更长的多肽上切除来制备所述肽。例如，可以通 过从髓鞘碱性蛋白上切除来获得所述肽。肽的组成可通过氨基酸分析或测序来确定（如 Edman降解法）。
[0031] 髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG)
[0032] 髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG)是具有单个胞外Ig可变域（Ig-V)的I型完整膜 蛋白。MOG的氨基酸序列在动物物种间高度保守（>90%)，这表明其重要的生物功能。MOG 在CNS中在髓鞘以及胞体最外层上和少突胶质细胞过程中特异性表达。
[0033] 成熟MOG的序列（缺少29氨基酸信号肽）如下（SEQIDNo. 5)。
[0034] SEQIDNo.5
[0039] 本发明的肽衍生自髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG)的40-60区段。所述肽可衍生 自经抗原呈递细胞对抗原天然加工而产生的抗原片段。
[0040] MOG的40-60区段具有以下序列：
[0041]SEQIDNo.6
[0049] 所述肽可包含来自MOG41-55的最小表位。所述肽可由MOG41-55组成。
[0050]Apitope
[0051] 在适应性免疫应答中，T淋巴细胞能够识别蛋白抗原的内在表位。抗原呈递细胞 (APC)吸收蛋白抗原并将它们降解成短的肽片段。肽可与细胞内的主要组织相容性复合体 (MHC)I类或II类分子结合并被转运至细胞表面。当与MHC分子一起被呈递至细胞表面时， 该肽可被T细胞识别（通过T细胞受体（TCR))，在这种情况下该肽为T细胞表位。
[0052]T细胞表位在对任何抗原（无论是自身的或外来的）的适应性免疫应答中扮演了 重要的角色。已通过使用实验模型证实了T细胞表位在超敏性疾病（包括过敏、自身免疫 性疾病和移植排斥）中扮演的重要角色。通过注射与佐剂组合的合成肽（基于T细胞表位 的结构）可以诱导炎症或过敏性疾病。
[0053] 相比之下，已显示可以通过给药可溶形式的肽表位来诱导对特定肽表位 的免疫耐受。在实验性自身免疫脑脊髓炎（EAE--种多发性硬化（MS)的模型） (Metzler和Wraith(1993)Int.Immunol.5:1159-1165;Liu和Wraith(1995)Int. Immunol. 7:1255-1263;Anderton和Wraith(1998)Eur.J.Immunol. 28:1251-1261);以及关 节炎、糖尿病和葡萄膜视网膜炎的实验模型（如以上Anderton和Wraith(1998)中所述） 中，给药可溶性的肽抗原被证实是一种抑制疾病的有效方法。这也被证实是一种治疗EAE 中疾病进展的方法（如上所述的Anderton和Wraith(1998))。
[0054] 致耐受性肽在治疗或预防疾病中的用途已吸引了相当多的注意力。其一个原因是 已显示某些致耐受性表位可下调针对相同组织内的不同抗原的T细胞应答。这种被称为 "旁观者抑制"的现象是指使用特定的致耐受性肽（如上所述的Anderton和Wraith(1998)) 可以诱导针对给定抗原内的多于一个表位（优选所有表位）的耐受性和针对给定疾病的多 于一个抗原的耐受性。这避免了需确定特定疾病中的全部病原性抗原的需要。
[0055] 肽也是一种有利的治疗选择，这是由于肽相对较低的成本以及可生产出具有改变 的免疫性状的肽类似物的事实。因而可以对肽进行修饰以改变其与MHC或TCR的相互作用。
[0056] 这种方法的一个可能的问题是，已经显示并不是所有作为T细胞表位的肽都能够 诱导耐受性。髓鞘碱性蛋白（MBP)肽89-101是一种免疫接种后的免疫显性抗原，同时在引 发T细胞反应和诱导EAE方面也具有非常有效的免疫原。然而，已显示，当以溶液形式给药