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【技术领域】
[0001] 本发明涉及来自蛋白脂质蛋白（PLP)的肽。具体地，本发明涉及包含衍生自PLP 的一个亲水区段的肽，其能够与MHC分子体外结合并被呈递给T细胞而无须抗原加工。本 申请还涉及该肽在治疗和/或预防疾病中的用途。
【背景技术】
[0002] 多发性硬化（MS)是影响中枢神经系统的慢性退行性疾病，特征在于神经轴突的 脱髓鞘。MS会造成众多生理和精神症状，并且通常发展为生理缺陷和认知功能障碍。疾病 通常在年轻人（20至40岁）中发病，在女性中更常见，并且在世界范围内影响超过一百万 人。
[0003] MS的病程各不相同，并且会潜伏或随时间稳步发展。已根据进展模式描述了MS的 几种亚型。患有MS的人会患有几乎任何神经症状或迹象，包括知觉变化，如丧失敏感度或 发麻、刺痛或麻痹（感觉迟钝和感觉异常）、肌肉虚弱、阵挛、肌肉痉挛或移动困难；协调和 平衡困难（共济失调）；语言问题（构音障碍）或吞咽问题（吞咽困难）、视觉问题（眼球 震颤、视神经炎（包括光幻视）或复视）、疲劳、急性或慢性疼痛以及膀胱和肠困难。
[0004] 目前MS被认为是免疫介导性病症，其中人体自身的免疫系统攻击并损伤了髓鞘 质。
[0005] 没有已知的针对MS的治愈方法。已证明，几种现有疗法在疾病侵袭（复发）后的 功能恢复中、在预防或降低新的疾病侵袭（复发）的程度或频率中、或者在预防或降低残疾 程度中是有效的。然而，很多现有MS疗法有副作用或耐受不良。因而需要对能有效治疗MS 并有效缓解或减少MS的症状的MS替代疗法。
【发明内容】
[0006] 本发明人已确定了一系列衍生自蛋白脂质蛋白（PLP)的肽，所述肽可以通过固定 的抗原呈递细胞呈递给T细胞。这些肽可有效预防和/或治疗脱髓鞘疾病，如多发性硬化。
[0007] 因此，在第一方面，本发明提供了能够与MHC分子体外结合并被呈递给T细胞而无 需抗原加工的肽，且所述肽包含以下蛋白脂质蛋白（PLP)区段的全部或一部分：
[0028] 在第二方面，本发明提供了根据本发明的第一方面的肽，其用于治疗和/或预防 脱髓鞘疾病。
[0029] 在第三方面，本发明提供了包含一种或多种根据本发明的第一方面的肽的药物组 合物。
[0030] 在第四方面，本发明提供了治疗和/或预防有此需要的受试者中的脱髓鞘疾病的 方法，所述方法包含向所述受试者给药根据本发明的第一方面所述的肽的步骤。
[0031] 在第五方面，本发明涉及根据本发明的第一方面的肽在制造用于预防和/或治疗 脱髓鞘疾病的药物中的用途。
[0032] 与本发明的第二、第四和第五方面有关，所述疾病可为多发性硬化。
【附图说明】
[0033] 图1 _图1 :三种PLP肽区段在体外和体内产生应答，以及所述应答与DR结合预测 相关。A，大体上代表计算机模拟的PLP肽与HLA-DRB1*1501的结合预测（IEDB和NetMHCII 法），以及这些肽在这些小鼠中诱导增殖应答的能力。B和C代表这些长肽中的4种诱导 EAE的能力（2组独立实验）。
[0034]图2-确定HEAL-26中的apitope。
[0035]图3-确定TWTT-28中的apitope。
[0036]图4-确定GVLP-28中的apitope。
[0037] 图5 -诱导耐受性（tolerisation)方案。
[0038] 图6-来自用HEAL-26或P0P-4预处理的小鼠的LNC的增殖和细胞因子生成。A， 代表来自用HEAL-26或P0P-4apitope预处理小鼠的LNC的胸腺嘧啶核苷掺入的均值+/-标 准误差（SM)。
[0039] 图7-来自用HEAL-26或P0P-4预处理的小鼠的SPL的增殖和细胞因子生成。A，代 表来自用HEAL-26或P0P-4apitope预处理小鼠的SPL的胸腺嘧啶核苷掺入的均值+/-SEM。
[0040] 图8 -来自用TWTT-28预处理的小鼠的LNC的增殖和细胞因子生成。A，代表来自 用TWTT-28apitope预处理小鼠的LNC的胸腺嘧啶核苷掺入的均值+/-SEM。
[0041] 图9 -来自用TWTT-28预处理的小鼠的SPL的增殖和细胞因子生成。A，代表来自 用TWTT-28apitope预处理小鼠的SPL的胸腺嘧啶核苷掺入的均值+/-SEM。
[0042] 图10_来自用POP-15预处理的小鼠的LNC的增殖和细胞因子生成。A，代表来自 用P0P-15apitope预处理小鼠的LNC的胸腺嘧啶核苷掺入的均值+/-SEM。
[0043] 图11_来自用P0P-15预处理的小鼠的SPL的增殖和细胞因子生成。A，代表来自 用P0P-15apitope预处理小鼠的SPL的胸腺嘧啶核苷掺入的均值+/-SEM。
[0044] 图12-来自用P0P-22预处理的小鼠的LNC的增殖和细胞因子生成。A，代表来自 用P0P-22apitope预处理小鼠的LNC的胸腺嘧啶核苷掺入的均值+/-SEM。
[0045] 图13-来自用P0P-22预处理的小鼠的SPL的增殖。A，代表来自用P0P-22apitope 预处理小鼠的SPL的胸腺嘧啶核苷掺入的均值+/-SEM。
[0046] 图14 -来自用P0P-22或GVLP-28预处理的小鼠的LNC的增殖和细胞因子生成。 A，代表来自用P0P-22(左图）或GVLP-28(右图）apitope预处理小鼠的LNC的胸腺嘧啶核 苷掺入的均值+/-SEM。
[0047] 图15-用P0P-22或GVLP-28预处理的小鼠的SPL的增殖和细胞因子生成。A，代表 来自用P0P-22或GVLP-28apitope预处理小鼠的SPL的胸腺嘧啶核苷掺入的均值+/-SEM。
[0048] 对于图6至15的每张图，B，表示胸腺嘧啶核苷掺入的刺激指数。C，表示在培养物 上清液中分泌的细胞因子的量。在B和C中，每剂量的每个点表示单只小鼠，而带横杜的表 示中值。P是用Mann-Whitney检验计算的。仅显示了低p值。小于0. 05的p值被认为是 显著的。
【具体实施方式】
[0049] 在第一方面，本发明涉及肽。
[0050]肽
[0051] 术语"肽"根据其标准含义是用来指一系列残基（通常为L-氨基酸），通常通过 a_氨基和相邻氨基酸的羧基之间的肽键彼此相连。该术语包括修饰的肽和合成的肽类似 物。
[0052] 本发明的肽的长度为能够与主要组织相容性复合体（MHC)I类或II类分子体外结 合并被呈递给T细胞而无需抗原加工。换句话说，该肽能够直接与MHC分子的肽结合槽结 合而无需在一个端点或两个端点进行任何修剪。
[0053] 与MHCI类分子结合的肽通常为7至13个氨基酸、更通常地为8至10个氨基酸 的长度。该肽的结合通过以下方式在其两个端点得到稳定，所述方式为肽的主链原子与所 有MHCI类分子的肽结合槽内的非可变位点之间的接触。在所述槽的两个端点处都具有非 可变位点，其与肽的氨基和羧基末端结合。肽长度的变化通过肽主链的卷曲来调节，通常在 允许所需柔性的脯氨酸或甘氨酸残基处发生。
[0054] 与MHCII类分子结合的肽通常为8至20个氨基酸之间的长度，更通常地为10至 17个氨基酸之间的长度，并且可以更长。这些肽以沿着两端开放的MHCII肽结合槽（与 MHCI类肽结合槽不同）伸展的构象存在。主要通过主链原子与排列形成肽结合槽的保守 残基接触而使肽维持在合适的位置。
[0055] 本发明的肽可以通过化学方法制备（PeptideChemistry,Apractical Textbook.MikosBodansky,Springer-Verlag,Berlin.)。例如，可以通过固相技术合成 肽（RobergeJY等人（1995)Science269:202-204)，从树脂上切除，并通过制备性高效液 相色谱纯化（如Creighton(1983)ProteinsStructuresAndMolecularPrinciples,WH FreemanandCo,NewYorkNY)。例如，根据制造商提供的说明书使用ABI431A肽合成仪 (PerkinElmer)可实现自动合成。
[0056] 或者，可通过重组方式、或通过从更长的多肽上切除来制备所述肽。例如，可以通 过从髓鞘蛋白脂质蛋白上切除来获得所述肽。肽的组成可通过氨基酸分析或测序来确定 (如Edman降解法）。
[0057] 髓鞘蛋白脂质蛋白（PLP)
[0058] 髓鞘质是非传导性（电绝缘）材料，其形成层即髓鞘，该层通常仅环绕神经元的 轴突。其对于神经系统发挥正常功能十分重要。组成髓鞘质的一些蛋白为髓鞘碱性蛋白 (MBP)、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG)和蛋白脂质蛋白（PLP)。
[0059] 髓鞘蛋白脂质蛋白（PLP)，即中枢神经系统（CNS)髓鞘质中最丰富的蛋白，是疏水 性完整膜蛋白。
[0060] 人类PLP序列如SEQIDNo. 16中所示。
[0061] SEQIDNo. 16
[0067] 本发明的肽可衍生自PLP序列的亲水区段。所述肽可衍生自经抗原呈递细胞对抗 原天然加工而产生的抗原片段。
[0068] PLP的亲水区段为：
[0099] 所述肽可包含来自这些肽中的一种的最小表位。
[0100] 具体地，所述肽可包含以下中的一种、由以下中的一种组成或包含以下中的一种 的最小表位：
[0105] 在适应性免疫应答中，T淋巴细胞能够识别蛋白质抗原的内在表位。抗原呈递细 胞（APC)吸收蛋白抗原并将它们降解成短的肽片段。肽可与细胞内的主要组织相容性复合 体（MHC)I类或II类分子结合并被转运至细胞表面。当与MHC分子一起被呈递至细胞表面 时，该肽可被T细胞识别（通过T细胞受体（TCR))，在这种情况下该肽为T细胞表位。
[0106]T细胞表位在对任何抗原（无论是自身的或外来的）的适应性免疫应答中扮演了 重要的角色。已通过使用实验模型证实了T细胞表位在超敏性疾病（包括过敏、自身免疫 性疾病和移植排斥）中扮演的重要角色。通过注射与佐剂组合的合成肽（基于T细胞表位 的结构）可以诱导炎症性或过敏性疾病。
[0107] 相比之下，已显示可以通过给药可溶形式的肽表位来诱导对特定肽表位 的免疫耐受。在实验性自身免疫脑脊髓炎（EAE--种多发性硬化（MS)的模型） (Metzler和Wraith(1993)Int.Immunol.5:1159-1165;Liu和Wraith(1995)Int. Immunol. 7:1255-1263;Anderton和Wraith(1998)