用hla等位基因评估抗癫痫药物苯妥英引发药物过敏反应的方法
【专利说明】用HLA等位基因评估抗癫痫药物苯妥英引发药物过敏反应 的方法
[0001] 本发明为进入国家申请日为2013年12月19日，申请号为201180071752. 1，发明 名称为"评估抗癫痫药物苯妥英引发药物不良反应风险的方法"的专利申请的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及一种用于预测患者对于药物不良反应的风险之方法，尤指抗癫痫药物 苯妥英引发过敏反应的风险评估。
【背景技术】
[0003] 药物不良反应（简称ADRs)是指在正常剂量下使用药物而引起伤害之表现。药物 过敏反应是一种在用药治疗中常见的不良反应且约占通报药物不良反应案件的20%。这些 过敏反应可能从轻微的皮肤起红疹（MPE)到造成生命威胁的药物疹合并嗜伊红血症及全 身症状（DRESS)，史帝文生强生症候群（SJS)和毒性表皮坏死溶解症（TEN)。
[0004] 许多芳香环类抗癫痫药物（AEDs)，如苯妥英，卡马西平或拉莫三嗪经常与过敏反 应有关。特别是，苯妥英是第一线芳香环类抗癫痫用药，然而，超过19%使用苯妥英治疗的 病人会发生过敏反应。先前文献指出微胞体环氧化物水解酶缺失及人类白血球组织抗原基 因型（HLA)可能与芳香环类抗癫痫药物引起的过敏反应有关联。然而，药物代谢/遗传基 因易感性和苯妥英引发过敏反应之间的关系仍尚未明了。
[0005] 因此，仍然需要一种新颖并改进的方法用来预测苯妥英引发药物过敏反应的风 险，其中该风险可以通过评估包括CYP2C9的基因多型性，苯妥英血中浓度和HLA基因型等 因素进行预估。
【发明内容】
[0006] 本发明提供一种评估病患发生苯妥英引发之不良反应风险的方法，特别是史帝 文生强生症候群（SJS)，毒性表皮坏死溶解症（TEN)及药物疹合并嗜伊红血症及全身症状 (DRESS)等严重型皮肤不良反应。针对58位苯妥英引发严重型皮肤不良反应（SCARs)病 患，包括史帝文生强生症候群，毒性表皮溶解症及药物疹合并嗜伊红血症及全身症状及198 位对照组进行全基因扫目苗（Affymetrix 6.0)。在一实施例中，评估病患发生苯妥英引发不 良反应风险的方法包括检测10号染色体上CYP2Cs区域的单点核苷酸变异（SNPs)的步骤， 如 CYP2C18 上的 rsl7110192，rs7896133 ;CYP2C9 上的 rsl057910(CYP2C9*3)，rsl7110321， rs9332093, rs9332245 ;CYP2C19 基因上的 rs3758581，rs2860905, rs4086116 及 CYP2C8 上 的 rs7899038, rsl592037, rsl934952, rsll572139, rs6583967。
[0007] 另一实施例中，评估病患发生苯妥英引发之不良反应风险的方法包含了侦测 结合 rsl057910(CYP2C9*3)， rs3758581， rsl7110192, rs9332245 或 rsl592037(尤其 是rsl7110192, rsl057910和rs3758581)之单倍型的步骤，此单倍型会增加统计学上 的显著相关性当苯妥英引发之史帝文生强生症候群/毒性表皮溶解症/药物疹合并嗜 伊红血症及全身症状病患与苯妥英耐受性对照组相比较时。没有苯妥英耐受性个体带 有结合的 rsl057910 (CYP2C9*3)，rs3758581，rsl7110192, rs9332245 或 rsl592037 (尤 其是rsl057910和rs3758581，0/95)，然而，近三分之一的苯妥英过敏患者带有此组合 (30/96)。这些SNPs中有一些会造成胺基酸序列改变，例如CYP2C19exon7上造成错义改变 的rs3758581显著与苯妥英-史帝文生强生症候群/毒性表皮溶解症/药物疹合并嗜伊红 血症及全身症状相关，进一步更发现CYP2C9*3与苯妥英引发之史帝文生强生症候群/毒性 表皮溶解症/药物疹合并嗜伊红血症及全身症状有显著相关性。
[0008] 在又一实施例中，本发明提供评估病患发生苯妥英引发之过敏反应风险的方法， 包括利用候选基因（CYP2Cs和HLA)检测152位苯妥英药物过敏病患，包含53例苯妥英-史 帝文生强生症候群/毒性表皮溶解症，24例苯妥英-药物疹合并嗜伊红血症及全身症状和 75例苯妥英-皮肤红疹，以及118位耐受性对照组病人为服用苯妥英超过3个月，但没有任 何不良反应。结果显示高达30. 2 %的苯妥英-史帝文生强生症候群/毒性表皮溶解症病 患及37. 5%的苯妥英-药物疹合并嗜伊红血症及全身症状病患带有CYP2C9*3基因型，相 比之下，14. 7%的苯妥英-皮肤红疹病患及只有2. 5%的耐受性对照组病人带有CYP2C9*3。 本发明也指出CYP2C9以及CYP2C19, CYP2C8和CYP2C18的基因变异型涉及苯妥英低下 代谢能力并会增加血浆中的药物累积进而导致过敏反应。除了 CYP2CS的基因关连之外， HLA-A*0207, HLA-A*2402, HLA-B*1301，HLA-B*1502, HLA-B*4001，HLA-B*4609, HLA-B*5101， HLA-DRB1*1001或HLA-DRB1*1502也显示出与苯妥英引发过敏反应有显著关系。因此，这些 数据表明CYP2C9/2C19/2C8/2C18的基因多型性或其缺陷之等位基因，苯妥英血中浓度和 特定之HLA基因型都有助于苯妥英引发严重皮肤药物不良反应。
【附图说明】
[0009] 图1说明苯妥英引发严重皮肤药物不良反应（SCARs)的全基因组关联研究，其中 每个点代表一个SNP。x轴表示的SNP在染色体上的位置，y轴表示SNP在病患-对照关联 研究的-l〇gl〇的显著性差异。此研究包含58例苯妥英-史帝文生强生症候群/毒性表皮 溶解症/药物疹合并嗜伊红血症及全身症状及198例一般人控制组。显著性差异〈10 6的 SNP以红色突显。强度信号座落于在10号染色体上的CYP2C区域。
[0010] 图2显示苯妥英药物不良反应病患及耐受性控制组的苯妥英血中浓度。苯妥英的 正常治疗浓度通常介于10-20微克/毫升，耐受性控制组的苯妥英血中浓度介于5-15微克 /毫升。然而，苯妥英-史帝文生强生症候群/毒性表皮溶解症患者的苯妥英血中浓度介于 40-50微克/毫升，高于耐受性控制组。
【具体实施方式】
[0011] 以下详细描述的目的在于作为一个根据本发明的各方面提供了现前的示例性描 述，而不是旨在表示本发明可以制备或利用的唯一形式。而可被理解的是，能在不同实施例 中被实施的相同或等同之功能及要素也包括在本发明的精神和范围之内。
[0012] 除非另有定义，在本文中所使用的所有技术性和科学性术语对于本发明所属领域 的任一普通技术人员都具有通常理解的相同含义。虽然任何类似或等同于本发明所述的方 法、装置和材料都能在本发明的实践或试验中使用，现在开始描述该示例性方法、装置和材 料。
[0013] 所有提及的发表文献都被并入参考文献并目的在于描述和揭露，举例来说，在发 表文献描述过的设计和方法可能被用来和本发明连结。本文上下及全文中所列出或讨论的 发表文献仅在提供其在本发明申请日之前的发现，不应被解释为承认本发明人没有资格由 于先前发明早于这些公开内容。
[0014] 史蒂文生症候群（SJS)和毒性表皮坏死溶解症（TEN)的诊断是依照具共识性标 准的临床症状来定义（Bastuji-Garin S，Rzany B等人，1993)。史帝文生强生症候群被定 义为皮肤剥离面积小于体表面积的10%，重迭史帝文生强生症候群_毒性表皮溶解症为皮 肤剥离介于10-29%，毒性表皮溶解症为大于等于30%。药物疹合并嗜伊红血症及全身症 状（DRESS)的诊断标准为皮疹（如弥漫性斑丘疹、剥脱性皮炎）伴随嗜酸粒细胞增多、非 典型淋巴细胞循环，急性肝细胞损伤或肾功能恶化等症状（Kardaun SH，Sidoroff A等人， 2007)。符合由苯妥英引发史帝文生强生症候群、毒性表皮溶解症或药物疹合并嗜伊红血症 及全身症状诊断标准之患者将经长庚纪念医院体系鉴定并选入本研究。
[0015]本发明发现特定CYP2C基因变异型，包括CYP2C9, CYP2C19, CYP2C8和CYP2C18涉 及苯妥英的低代谢活性并与苯妥英引发过敏反应有关。除了CYP2C变异型，HLA-A*0207， HLA-A*2402, HLA-B*1301，HLA-B*1502, HLA-B*4001，HLA-B*4609, HLA-B*5101， HLA-DRB1*1001或HLA-DRB1*1502也被发现与苯妥英引发过敏反应或皮肤药物不良反应有 显著关联。
[0016] 因此，本发明提供一种评估苯妥英引发过敏反应风险的方法，系检测染色体10号 上CYP2C区域的单点核苷酸变异（SNPs)之存在，包括CYP2C9, CYP2C19, CYP2C8和CYP2C18。 透过58位苯妥英引发严重型皮肤药物不良反应患者（包括史帝文生强生症候群、毒性表 皮溶解症及药物疹合并嗜伊红血症及全身症状）和198位一般人对照组进行全基因扫 目苗（Affymetrix 6. 0)，发现最有显著相关的单点核苷酸变异（SNP)大部分皆都位于10号 染色体上的CYP2C区域（见图1)，例如CYP2C18上的rsl7110192, rs7896133 ;CYP2C9上 的rsl7110321，rs9332093, rs9332245 ;CYP2C19上的rs3758581，rs2860905, rs4086116 ; 和CYP2C8上的rs7899038, rsl592037, rsl934952, rsll572139, rs6583967(见表1)。 其他位于CYP2C区域附近之SNP如rs2274222, rslll88183, rs7921561，rsl0882544， rs7084271,rs644437,rsl2769577,rs617848,rsl0882551,rs585381,rs648638,rs664093, rsl2262878,rsl7524438,rsl2413028,rslll88246,rsl2415795, rsll