一种鱼皮鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及鱼胶原蛋白肽制备领域，具体是一种鱼皮鱼鳞胶原蛋白肽的制备方 法。
【背景技术】
[0002] 胶原蛋白是一种高分子功能性蛋白质。它是皮肤的主要组成部分，占皮肤真皮层 80%的比重。它在皮肤中构成了一张细密的弹力网，牢固锁住水分，支撑着皮肤。胶原蛋白 是由3条肽链拧成螺旋纤维状蛋白质，也是人体内含量最丰富的蛋白质，广泛分布于结缔 组织、皮肤、骨豁、内脏细胞间质及肌腔、韧带、巩膜等部位，大约占人体总蛋白质的30%及 以上。它富含人体需要的脯氨酸、羟脯氨酸等胶原蛋白特征氨基酸，是人体细胞特别是肌 肤细胞外基质中重要组成部分，所以胶原蛋白也是在发达国家美容界流行最久的美容保健 品。
[0003] 活性胶原蛋白有着多种生理功能，其在医药、化工、食品等领域有着广泛的应用， 其酶解产物胶原蛋白肽也具有多种生理功效，主要表现在抗氧化、降血压、降血脂、抗肿瘤 等。因此人们对胶原蛋白及其肽类的研究开发相当关注。胶原蛋白的利用首先是从陆生动 物开始的，但仅是陆生动物的胶原蛋白制品难以满足人们的需求，因此，近几年，人们把目 光转向了胶原蛋白资源更丰富的水产动物，尤其是淡水以及海水鱼类。秦玉青等研究了鱿 鱼皮胶原蛋白提取的最佳工艺条件（中医研究，2002,1 :20-21)，王静凤等（中国专利申请 号200710013140. 2)提供了一种鱿鱼皮胶原蛋白活性肽的制备方法，他们都是单独的制备 胶原蛋白或胶原蛋白活性肽，没有把二者制备的工艺结合起来，以达到对原料更充分的利 用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种小分子胶原蛋白肽得率高、酶制剂成本低、无苦味的 鱼皮鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法，以解决上述【背景技术】中提出的问题。
[0005] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
[0006] -种鱼皮鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
[0007] 步骤一：鱼皮的处理
[0008] 以鱼皮为原料，用6-9倍原料重的含0. 04-0. 07mol/L的NaOH溶液在浸泡温度 为25-35°C下浸泡5-6h，去除杂蛋白和脂肪后用清水漂洗至中性，利用12-15倍原料重的 0. 3-0. 4mol/L的HC1溶液在浸泡温度为25-35°C下浸泡2-4h，再用清水漂洗至pH为4-6 后，磨碎制备成鱼皮的胶原蛋白溶液；
[0009] 步骤二：鱼鳞的处理
[0010] 1)预处理：将鱼鳞放入水槽内，加入鱼鳞重量15-18倍的水，浸泡3-4小时，使得 鱼鳞复水；
[0011] 2)脱钙：将复水后的鱼鳞送入耐酸水槽中，加入鱼鳞重量14-15倍的1-2%盐酸浸 泡3-5小时，使得鱼鳞中的钙转化成氯化钙溶解出来；
[0012] 3)中和去杂质：在经过脱钙后得到的浸泡有鱼鳞的溶液中加入0. 3-0. 5%氢氧化 钠溶液中和至中性，使得氯化钙形成氢氧化钙沉淀出来；
[0013] 4)水洗：将步骤3)中中和去除杂质的鱼鳞用清水清洗，将洗净的鱼鳞放入网眼周 转筐淋水；
[0014] 5)溶胶：将步骤4)洗净的鱼鳞放入反应爸，添加鱼鳞重量12-15倍的脱盐水，加 热蒸煮〇. 8-1小时，制得水溶性胶原蛋白溶液；
[0015] 6)固液分离过滤：先将制得的水溶性胶原蛋白溶液冷却到温度为40_45°C，然后 用滤网对水溶性胶原蛋白溶液进行过滤，去除水溶性胶原蛋白溶液中的鱼鳞；将去除鱼鳞 后的水溶性胶原蛋白溶液存储于储存罐内备用；
[0016] 步骤三：胶原蛋白肽的制备
[0017] 1)水解、酶解：将鱼皮的胶原蛋白溶液与过滤后的水溶性胶原蛋白溶液加入反应 釜内，在70-80°(：热水下加热45-60111111，降温至50°(：，再加入原料重量0.4-0.6%的木瓜蛋 白酶和胶原蛋白酶组成的复合酶，在50°C下酶解4-5h ;再加入原料重量0. 2-0. 3%的菠萝 蛋白酶，在40°C下酶解2-3h ;制备成酶解胶原蛋白肽溶液；
[0018] 2)胶原蛋白过滤分离：将制得的酶解胶原蛋白肽溶液使用超滤器过滤；使得分子 量为5000道尔顿以上的大分子胶原蛋白和水解胶原蛋白溶液分离；将蛋白酶和未完全酶 解的高分子胶原蛋白截留并添加到步骤1)中继续使用；
[0019] 3)灭酶、脱色、脱腥：用85-95°C对超滤获得的滤液加热10_20min进行灭酶，然后 再加入溶液重量的0. 5-2. 0%的活性炭进行脱色脱腥，接着利用离心机去除活性炭；
[0020] 4)干燥：经喷雾干燥或冷冻干燥后得到淡黄色或白色粉状、复溶性好、略带腥味 的鱼皮鱼鳞胶原蛋白肽。
[0021] 作为本发明进一步的方案：步骤三中加入原料重量0. 5%的木瓜蛋白酶和胶原蛋 白酶组成的复合酶。
[0022] 作为本发明进一步的方案：步骤三中加入原料重量0. 2%的菠萝蛋白酶。
[0023] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明所得胶原蛋白肽中灰分含量明显 低于其他酶解方法，且无腥味。本发明利用复合蛋白酶与菠萝蛋白酶对胶原蛋白进行水解， 小分子胶原蛋白肽得率高、酶制剂成本低、无苦味。本发明的方法可显著降低了胶原蛋白肽 的生产成本，所得胶原蛋白肽为白色无味粉末，灰分含量小于0. 5%，分子量小于3000Da的 肽段占总氮的96%以上。
【具体实施方式】
[0024] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的 实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本发明保护的范围。
[0025] 实施例1
[0026] 本发明实施例中，一种鱼皮鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
[0027] 步骤一：鱼皮的处理
[0028] 以鱼皮为原料，用6倍原料重的含0. 04mol/L的NaOH溶液在浸泡温度为25°C下浸 泡5h，去除杂蛋白和脂肪后用清水漂洗至中性，利用12倍原料重的0. 3mol/L的HC1溶液在 浸泡温度为25°C下浸泡2h，再用清水漂洗至pH为4后，磨碎制备成鱼皮的胶原蛋白溶液。
[0029] 步骤二：鱼鳞的处理
[0030] 1)预处理：将鱼鳞放入水槽内，加入鱼鳞重量15倍的水，浸泡3小时，使得鱼鳞复 水。
[0031] 2)脱钙：将复水后的鱼鳞送入耐酸水槽中，加入鱼鳞重量14倍的1%盐酸浸泡3 小时，使得鱼鳞中的钙转化成氯化钙溶解出来。
[0032] 3)中和去杂质：在经过脱钙后得到的浸泡有鱼鳞的溶液中加入0. 3%氢氧化钠溶 液中和至中性，使得氯化钙形成氢氧化钙沉淀出来。
[0033] 4)水洗：将步骤3)中中和去除杂质的鱼鳞用清水清洗，将洗净的鱼鳞放入网眼周 转筐淋水。
[0034] 5)溶胶：将步骤4)洗净的鱼鳞放入反应釜，添加鱼鳞重量12倍的脱盐水，加热蒸 煮0. 8小时，制得水溶性胶原蛋白溶液。
[0035] 6)固液分离过滤：先将制得的水溶性胶原蛋白溶液冷却到温度为40°C，然后用滤 网对水溶性胶原蛋白溶液进行过滤，去除水溶性胶原蛋白溶液中的鱼鳞；将去除鱼鳞后的 水溶性胶原蛋白溶液存储于储存罐内备用。
[0036] 步骤三：胶原蛋白肽的制备
[0037] 1)水解、酶解：将鱼皮的胶原蛋白溶液与过滤后的水溶性胶原蛋白溶液加入反应 釜内，在70°C热水下加热45min，降温至50°C，再加入原料重量0. 4%的木瓜蛋白酶和胶原 蛋白酶组成的复合酶，在50°C下酶解4h ;再加入原料重量0. 2%的菠萝蛋白酶，在40°C下酶 解2h ;制备成酶解胶原蛋白肽溶液。
[0038] 2)胶原蛋白过滤分离：将制得的酶解胶原蛋白肽溶液使用超滤器过滤；使得分子 量为5000道尔顿以上的大分子胶原蛋白和水解胶原蛋白溶液分离；将蛋白酶和未完全酶 解的高分子胶原蛋白截留并添加到步骤1)中继续使用。
[0039] 3)灭酶、脱色、脱腥：用85°C对超滤获得的滤液加热lOmin进行灭酶，然后再加入 溶液重量的〇. 5%的活性炭进行脱色脱腥，接着利用离心机去除活性炭。
[0040] 4)干燥：经喷雾干燥或冷冻干燥后得到淡黄色或白色粉状、复溶性好、略带腥味 的鱼皮鱼鳞胶原蛋白肽。
[0041] 实施例2
[0042] 本发明实施例中，本发明实施例中，一种鱼皮鱼鳞胶原蛋白肽的制备方法，包括以 下步骤：
[0043] 步骤一：鱼皮的处理
[0044] 以鱼皮为原料，用9倍原料重的含0. 07mol/L的NaOH溶液在浸泡温度为35°C下浸 泡6h，去除杂蛋白和脂肪后用清水漂洗至中性，利用15倍原料重的0. 4mol/L的HC1溶液在 浸泡温度为35°C下浸泡4h，再用清水漂洗至pH为6后，磨碎制备成鱼皮的胶原蛋白溶液。
[0045] 步骤二：鱼鳞的处理
[0046] 1)预处理：将鱼鳞放入水槽内，加入鱼鳞重量18倍的水，浸泡4小时，使得鱼鳞复 水。
[0047] 2)脱妈：将复水后的鱼鳞送入耐酸水槽中，加入鱼鳞重量15倍的2%盐酸浸泡5 小时，使得鱼鳞中的钙转化成氯化钙溶解出来。
[0048] 3)中和去杂质：在经过脱钙后得到的浸泡有鱼鳞的溶液中加入0. 5%氢氧化钠溶 液中和至中性，使得氯化钙形成氢氧化钙沉淀出来。
[0049] 4)水洗：将步骤3)中中和去除杂质的鱼鳞用清水清洗，将洗净的鱼鳞放入网眼周 转筐淋水。
[0050] 5)溶胶：将步骤4)洗净的鱼鳞放入反应釜，添加鱼鳞重量15倍的脱盐水，加热蒸 煮1小时，制得水溶性胶原蛋白溶液。