光叶子花中三萜皂苷,以其为活性成分的降血糖药物,及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体地涉及一类光叶子花中三萜皂苷，该类化合物可 用作为降血糖活性化合物，以其为有效成分的药物组合物，其制备方法及其在制备降血糖 药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 2型糖尿病在全球范围内持续高发，已经成为继心脑血管病和恶性肿瘤之后第三 大严重威胁人们健康和生命的非传染性疾病。糖尿病人长期的高血糖状态会导致大血管病 变（心脏病、高血压、脑血管意外及下肢血管病变）、微血管病变（糖尿病视网膜病变、糖尿 病肾病），和神经病变等，危及心、脑、肾等生命器官。目前，临床上使用的降血糖药物主要 有胰岛素增敏类（如双胍类及噻唑烷二酮类），促胰岛素分泌剂磺脲类（如格列美脲等）， 葡萄糖苷酶抑制剂（如阿卡波糖和伏格列波糖等），肠促胰岛素类似物（如艾塞那肽 等）、DPP_4抑制剂（如西格列汀等），但这些药物基本都为化学合成药物，存在长期使用后 血糖浓度无法有效控制，以及长期使用会对肾脏、肝脏及造血功能等造成损害等问题，如临 床用药曲格列酮被发现具有严重的肝脏毒性风险，而吡咯列酮则具有增加水肿和心率衰 竭发生率等危害。天然产物是大自然经过长期进化并选择优化过的化合物，也是人类防治 疾病药物的主要来源，具有结构丰富、疗效确切、安全低毒以及无依耐性等优点。在过去几 十年上市的小分子新化学实体（NCE)中，近60%是直接或间接来源于天然产物，天然产物 仍然是药物或先导化合物研发的重要源泉。所以从植物中发现更加安全有效的降血糖药物 具有十分重要的学术意义和很好的应用前景。
[0003] 2型糖尿病是一种代谢性综合疾病，其形成与现代人高糖高脂以及运动不足的生 活方式密切相关。链脲佐菌素（STZ)对小鼠的胰岛β细胞有选择性破坏作用，诱导其产生 糖尿病。小鼠高热量饲料饲养一定时间并禁食，按一定量腹腔注射STZ，可制备II型糖尿病 动物模型，且按该法制备出的模型具有超重、糖耐量减低、血脂升高、血清胰岛素升高及胰 岛素受体结合力降低伴胰岛素抵抗的特点，类似于II型糖尿病病人的临床特征。STZ诱导的 小鼠糖尿病因其周期较短，方法简便，是研宄人类II型糖尿病治疗新药的理想模型。
[0004] 现有技术中未见有光叶子花中三猫阜苷作为降血糖药物的报道。
[0005] 三萜皂苷在紫茉莉科叶子花属植物中存在种类不多，目前仅从紫茉莉科叶子花属 光叶子花和叶子花中分离得到3个。本类的三萜皂苷因其含量较低和无紫外吸收等原因较 难分离。现有技术中，从叶子花属植物中分离三猫阜苷成分已公开发表如下方法：光叶子花 干燥粉碎地上部分用甲醇提取，用乙醚和正丁醇萃取，得乙醚、正丁醇和水三个部位。正丁 醇部分经s印hadex LH-20柱层析，以甲醇洗脱，其中7 - 13管三萜皂苷部分再经RP-18柱 层析，以甲醇/水洗脱，其中48%甲醇部位最后经s印hadex LH-20纯化得到化合物β -D-g lucopyranosyl3-〇- ( β -D-xylopyranosyl- (I 3) -〇- β -D-glucopyranosyluronic acid) oleanolate。 参见：Simon, A. ；Toth, G. ；Duddeck, H. ； So liman, H. S. M. ；Mahmoud I. I.； Samir Η. , Glycosides from Bougainvillea glabra. Natural Product Research 2006， 20(1)，63 - 67。现有技术中，从牛膝（八(：115〇^111:1168 13丨(161^3七3)中分离化合物（1)已公开发 表如下方法：牛膝干燥根7kg，用甲醇浸提回流3次（10L*3)，合并滤液，减压回收溶剂得甲 醇浸膏I. 2kg。取浸膏（500g)混悬于水中，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取。正丁醇萃取液减 压浓缩得浅黄色固体约28g。取正丁醇提取物25g湿法上硅胶柱，用氯仿-甲醇（VBV，10 : 1一5 :5)梯度洗脱，得 5 个组分 I (0· 5g)、II (6. 10g)、111 (2. 5g)、IV (6. 0g)、V (5. Og)。 组分 II 用 Cosmosil 75C-0PN 柱，以甲醇-水（V:V = 4:1)洗脱，得组分 II -I (500mg)、 II -2 (I. 2g)、II -3 (2. 5g)、II -4 (I. 4g)。将化合物组分 II -1 反复用 Cosmosil 75C-0PN 柱 分离，用甲醇-水（VBV = 4B1)洗脱得化合物⑴（25mg)，参见：祈乃喜，贾淑萍，郝志 芳，李建新，怀牛膝成分的分离与鉴定.中国药物化学杂志，2005, 15(3)，162-165。从地 肤子中分离化合物（2)和（3)的已公开发表方法如下：地肤子10.0 kg，用8倍量体积分数 70%乙醇提取3次，每次2h。合并提取液，减压浓缩得浸膏约3. 75kg。取其中3500g，硅藻土 拌样，依次以石油醚、三氯甲烷、甲醇索氏提取，得到石油醚部分520g，三氯甲烷部分130g， 甲醇部分1420g。甲醇部分经大孔树脂吸附，依次用水、75%和95%乙醇洗脱，回收乙醇洗 脱液，75 %乙醇洗脱液得干浸膏127g，95 %乙醇洗液得干浸膏23g，薄层检测发现两者化学 成分重叠较多，将二者合并。总浸膏经S印hadex LH - 20柱色谱，甲醇洗脱，得总皂苷36g 和总黄酮苷5g。总皂苷经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇（含3%水）梯度洗脱，薄层色谱检 测，得4个流分。其中第2流分经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇（含3%水）（82 : 18)洗 脱，再经RPC18硅胶柱色谱，甲醇-水（77 : 23)洗脱，得化合物（2) (17mg)和（3) (229mg)， 参见：卢向红，徐向东，付红伟，陈波，田景奎，张琳，地肤子化学成分的研宄。中国药学杂志， 2012, 47 (5)，338-342。其缺点是化合物（1)、（2)、（3)的含量低，分离纯化中多次用到有机 溶剂和水的混合溶剂系统，该混合溶剂回收温度高，不利于溶剂的回收利用，不利于工业 化大量生产。
【发明内容】
[0006] 针对现有技术存在的上述不足之处，本发明的目的在于提供一类光叶子花三萜皂 苷化合物，本发明涉及的有降血糖活性的三萜皂苷类化合物在叶子花属植物中为首次分离 得到；提供制备该类化合物的方法，该提取分离方法可控性和重现性好，样品损失少，成本 较低，操作方便，可较易分离得到三萜皂苷，溶剂可以反复回收利用，也适用于工业生产。本 发明的目的还在于提供以光叶子花三萜皂苷化合物为有效成分的降血糖药物组合物；该类 化合物及其组合物在制备降血糖药物中的应用。
[0007] 为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下技术方案：
[0008] 光叶子花中三萜皂苷化合物，是指骨架含有一个齐墩果酸，齐墩果酸3位与一个 β-D-吡喃葡萄糖醛酸的Γ位通过氧原子相连接的三萜皂苷和其他两个同骨架结构的衍 生物。
[0009] 本发明的三萜皂苷，优选具有下述结构式的化合物齐墩果酸-3-0-β -D-吡喃葡 萄糖醛酸苷（1)、齐墩果酸-3-0- β -D-吡喃木糖（1 - 3) - β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷（2)、齐 墩果酸-3-0-β -D-吡喃木糖（1 - 3) - β -D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷（3)，
[0010]
[0011] R1 =氢或甲基；R2 =氢或β-D-吡喃木糖
[0012] 制备本发明上述光叶子花三萜皂苷化合物的方法，取光叶子花枝叶，经干燥、粉粹 后，用90%甲醇室温冷浸充分提取，甲醇浸膏；将甲醇浸膏加水混悬后，依次用乙酸乙酯和 正丁醇充分萃取；乙酸乙酯部分和正丁醇部分反复用硅胶、S印hadex LH-20、RP-18各种层 析柱分离纯化，再结合三萜皂苷的TLC检测方法即得到光叶子花三萜皂苷。
[0013] 制备如下结构式所示光叶子花三萜皂苷化合物齐墩果酸-3-0-β -D-吡喃葡萄糖 醛酸苷（1)、齐墩果酸-3-0- β -D-吡喃木糖（1 - 3) - β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷（2)、齐墩果 酸-3-0-β-D-吡喃木糖（1 - 3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯苷（3)的方法，取光叶子花 枝叶，经干燥、粉粹后，用90%甲醇室温冷浸提取3次，时间分别为每次7、3、3天，提取液经 减压浓缩得甲醇浸膏；将甲醇浸膏加水混悬后，依次用乙酸乙酯和正丁醇充分萃取，等体积 各萃取三次，回收溶剂得到乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分；将正丁醇部分经硅胶柱层 析，用100:0,20:1，10:1，8:1，6:1，2:1，0:100的氯仿/甲醇梯度洗脱，薄层层析，结合三猫 皂苷TLC检测方法合并其中的10: 1，8:1和6:1含有三萜皂苷的部分；以下的每一步骤都须 结合三萜皂苷TLC检测方法来进行分离纯化；合并后的浸膏再次经硅胶柱层析，先用20:1 的氯仿/甲醇等度洗脱去除非三萜皂苷部分，再以90:10:1的氯仿/甲醇/甲酸等度洗脱， 根据三萜皂苷点的不同合并为三个组分Fr. 1-Fr. 3 ;Fr. 1组分经S印hadexLH-20凝胶柱层 析，1:1的氯仿/甲醇洗脱，合并得到三个亚组分Fr. 1-1 - Fr. 1-3 ;Fr. 1-2再经反相RP-18 柱层析，先以50:50的甲醇/水洗脱去除杂质，再以100:0的甲醇/水洗脱得到化合物齐墩 果酸-3-0- β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷（I) ;Fr. 2组分经SephadexLH-20凝胶柱层析，用1:1 氯仿/甲醇为洗脱剂除去色素；富集得到的叶子花三萜皂苷再经反相RP-18柱层析，先以 50:50的甲醇/水洗脱去除杂质；所得三萜皂苷最后经硅胶柱层析，以90:10:1的氯仿/甲 醇/甲酸等度