乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及免疫学领域与疫苗学领域，具体地，涉及一种抗乙型肝炎病毒表面抗 原单克隆抗体及产生该抗体的杂交瘤细胞株以及抗体的应用。
【背景技术】
[0002] 乙型肝炎病毒Ofepatitis B Virus，HBV)是一种嗜肝病毒，是肝病毒家族的DNA 逆转录病毒，于1965年被丹娜发现，被称之为丹式颗粒。主要存在于肝细胞并损害肝细胞， 该病原体可通过血液，母婴和性传播感染机体，引起肝细胞炎症、坏死、纤维化，损害肝脏， 引发乙型病毒性肝炎疾病，简称乙肝。乙型病毒性肝炎分急性和慢性两种。急性乙型肝炎 在成年人中90%可自愈，而慢性乙型肝炎表现不一，分为慢性乙肝携带者、慢性活动性乙型 肝炎、乙肝肝硬化等。HBV在全世界范围内均有流行，据WHO统计，全球约有20亿人感染过 HBV病毒，其中3亿以上的人群为慢性HBV携带者，迄今为止，每年仍有近100万人死于HBV 感染引起的肝衰竭和肝癌。在我国，约有1亿的HBV携带者，目前乙肝病毒携带率为7. 18%， 其中约三分之一有反复肝损害，表现为活动性的乙型肝炎或者肝硬化。
[0003] 乙肝流行范围广，治疗困难，对人体造成的危害大。首先，乙肝的传染性极强。乙 肝病毒由质地坚硬的外壳包被，保护病毒不受外界恶劣环境侵害，使其生命力极其顽强，它 可通过患者排出的各种体液传染给健康的人群。其次，乙肝的治愈非常困难，虽然现在市面 上针对乙肝治疗的药品很多，但真正治愈的特效药品很少。此外，乙肝容易发生恶变，据统 计，HBV携带者如果不加以治疗，31. 6 %~60. 1 %将会转化成慢性肝炎，而20. 8 %~56. 3 % 的慢性肝炎会恶化变成肝硬化，肝硬化患者如不及时治疗就会有16 %~51. 1 %的患者转 化为肝癌，危及生命。乙肝还具有突发性，乙肝病毒在人体内存在，具有一定的潜伏期，不易 被发现，当外界条件成熟，就可突然间发作，并且不可抑制。对HBV的防治成为全世界亟待 解决的问题。在尚未找到较好的治疗方法之前，对乙肝病毒的预防就显得尤为重要。乙肝 疫苗的推广应用，使得乙肝病毒的感染率逐年下降，对乙型肝炎的预防和控制起重要作用。
[0004] 乙型肝炎表面抗体是对乙肝病毒免疫的保护性抗体。它的阳性表明既往感染过乙 肝病毒，但已经排除病毒，或者接种过乙肝疫苗，产生了保护性抗体。血清中乙型肝炎表面 抗体滴度越高，保护力越强。乙型肝炎表面抗体是由乙型肝炎表面抗原诱导产生，为保护性 抗体。在HBV感染恢复期或注射乙肝疫苗后出现，它的出现标志对HBV感染产生特异性免 疫。乙型肝炎表面抗体是指动物或人体抗乙型肝炎表面抗原产生的IgG、IgM等类型抗体的 总称，广泛应用于乙型肝炎病毒鉴定、乙型肝炎疫苗以及乙型肝炎表面抗原的定性和定量 检测中。
[0005] 由于目前乙型肝炎表面抗原检测多采用人源乙型肝炎表面抗体检测体系，而人源 乙型肝炎表面抗体的获取较为困难，因此需要一种获取相对较为容易，且产量较高的乙型 肝炎表面抗体来取代。目前，市售的乙肝疫苗有血源性乙肝疫苗、乙肝多肽疫苗和基因工程 重组乙肝疫苗等。由于血源性乙肝疫苗有传播其它疾病（如艾滋病、丙型肝炎等）的风险， 我国目前主要提倡使用基因工程重组乙肝疫苗，因此，有必要制备一种特异性的抗重组乙 型肝炎表面抗原的单克隆抗体，用于重组乙型肝炎表面抗原、抗体的检测及病毒的鉴别。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种乙型肝炎病毒表面抗原的单克隆抗体，用于乙型肝炎 病毒表面抗原含量的检测。
[0007] 本发明的另一目的在于提供上述单克隆抗体的应用。
[0008] 为了达到上述目的，本发明首先提供一种能够稳定、高效分泌乙型肝炎病毒表面 抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株，其为SVAHBV-1，于2015年1月23日在中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物 研宄所，简称CGMCC，邮编100101)保藏，分类命名为乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体杂 交瘤细胞株SVAHBV-1，其保藏编号为CGMCC No. 10320。
[0009] 本发明还提供了由上述杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体。
[0010] 具体而言，本发明采用小鼠骨髓瘤细胞杂交瘤技术制备乙型肝炎病毒表面抗原的 中和性单克隆抗体，通过以下技术方案实现：通过将免疫乙肝疫苗原液的小鼠脾细胞与骨 髓瘤细胞融合，分离出能够分泌乙型肝炎病毒表面抗体的单克隆杂交瘤细胞，接种小鼠腹 腔，制备含有特异性乙型肝炎病毒表面抗体的腹水，经过后期处理并验证，得到特异性好、 抗体水平高且能长期保存的乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体。
[0011] 进一步，本发明提供了一种乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体，其由保藏编号为 CGMCC No. 10320的杂交瘤细胞株分泌获得。
[0012] 所述乙肝疫苗原液的制备方法为：取以DNA重组技术构建的表达乙型肝炎病毒表 面抗原的重组汉逊酵母工作种子批菌种，经锥形瓶、种子罐和生产罐进行三级发酵，收获菌 体并破碎，获得菌体破碎上清液，经纯化后获得精纯液，经除菌过滤后即为乙肝疫苗原液。
[0013] 更进一步地，本发明提供了上述单克隆抗体在制备检测乙型肝炎病毒表面抗原试 剂盒中的应用。
[0014] 本发明提供了上述的单克隆抗体在制备检测乙型肝炎病毒表面抗体试剂盒中的 应用。
[0015] 本发明提供了一种用于检测乙型肝炎病毒表面抗原或抗体的试剂盒，含有上述单 克隆抗体。
[0016] 对本发明的单克隆抗体，经生物标记或化学标记后获得的单克隆抗体也属于本发 明的保护范围。
[0017] 进一步地，经酶标记的上述单克隆抗体属于本发明的保护范围。
[0018] 所述的酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。
[0019] 本发明提供了保藏编号为CGMCC No. 10320的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体在 检测生物样品中乙型肝炎病毒表面抗原中的应用。
[0020] 本发明提供了保藏编号为CGMCC No. 10320的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体在 制备预防乙型肝炎病毒感染药物中的应用。
[0021] 含有本发明所述单克隆抗体的预防或治疗乙型肝炎的药物属于本发明的保护范 围。
[0022] 本发明提供了保藏编号为CGMCC No. 10320的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体在 乙肝疫苗制备过程中质量检测中的应用。
[0023]本发明提供的乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体具有如下有益效果：
[0024] 1、本发明的单克隆抗体具有较高的效价即反应性，间接法效价最高可达106。
[0025] 2、本发明的单克隆抗体与甲肝病毒、肠道病毒71型病毒、柯萨奇A16病毒等无交 叉反应，均有较好的病毒特异性。
[0026] 3、本发明杂交瘤细胞SVAHBV-1分泌的单克隆抗体的亲和常数为1. 39X KfM'可 广泛应用于乙型肝炎病毒表面抗原的检测、鉴别、筛查与疫苗生产的抗原检测以及流行病 调查中；同时检测的乙型肝炎病毒表面抗原，可以更加有效的反映乙肝疫苗中的抗原含量， 对疫苗的工艺研宄与生产具有重要意义。
【附图说明】
[0027] 图1为杂交瘤细胞SVAHBV-1分泌的单克隆抗体的免疫印迹图。
【具体实施方式】
[0028] 以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离 本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明 的范围。
[0029]本发明选用的表达乙型肝炎病毒表面抗原的重组汉逊酵母工程菌株来自北京科 兴生物制品有限公司，工作种子为原始种子扩增5代，但菌株不限于本来源与本代次的菌 株