一种通过静电纺丝制备细胞爬片的方法
【技术领域】
:
[0001]本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及细胞爬片的制备方法，尤其涉及一种通过静电纺丝制备细胞爬片的制备方法。
【背景技术】
:
[0002]细胞爬片是将玻片浸入细胞培养基中，使细胞在玻片上生长，以此进行生物体外实验。利用细胞爬片进行体外细胞实验时，可以有效避免一些体内实验的干扰因素，但细胞爬片的种类、质量也同样成为体外实验中的干扰因素。因此，需要对细胞爬片进行相关处理，以减少实验干扰因素，从而获得准确的实验结果。
[0003]通过静电纺丝技术制备出的纳米纤维膜具有三维多孔结构，纤维直径在几十纳米到几微米之间，与细胞外基质在结构上存在一定的相似性，因而被经常用于模拟天然的细胞外基质。此外，因纳米纤维膜拥有较高的比表面积和孔隙率，更加有利于细胞的吸附、生长和增殖，是制备细胞培养载体、组织工程支架、伤口创伤敷料、药物控释剂的优良材料。
[0004]玉米醇溶蛋白是一种从玉米蛋白粉中提取出来的天然蛋白类物质，拥有优良的生物性能，被广泛地应用于细胞载体材料等医学卫生领域。在申请号为20120084617.7的专利文献中，公开了一种用于细胞培养的玉米醇溶蛋白纳米纤维膜的制备方法，具体通过静电纺丝制得玉米醇溶蛋白和聚乙烯醇纳米纤维膜，并作为细胞培养的载体材料。
[0005]林蛙皮胶原蛋白是一种从林蛙皮中提取出来的天然蛋白类物质，同样拥有优良的生物性能。在申请号为201410117708.5的专利文献中，公开了一种林蛙皮胶原蛋白纤维膜的制备方法，其中记载了以林蛙皮为原料提取胶原蛋白，再通过静电纺丝制得林蛙皮胶原蛋白纤维膜，用于制作各种医用创伤辅料。
[0006]关于细胞爬片的制备方法，在申请号为201410141763.8的专利文献中，仅记载了一种直接把消毒后的玻片浸入培养液中，再放置于培养板，注入细胞悬垂液进行后续的培养的方法。但至今未见对玻片表面进行其他处理，以提高其细胞培养效果的记载。
【发明内容】
:
[0007]本发明目的是为了提高细胞爬片的细胞培养效果，提供一种以天然蛋白为纺丝原料，通过静电纺丝制备细胞爬片的方法。
[0008]具体而言，本发明针对不同的细胞培养需求，采用生物性能较好的天然蛋白类物质，如玉米醇溶蛋白或林蛙皮胶原蛋白，以及聚乳酸为原料，溶于六氟异丙醇配制成电纺溶液，再通过静电纺丝制备出安全、无毒、可降解、针对性强的细胞爬片，使之更有利于细胞的粘附、生长、增殖和培养，有效提高体外细胞培养效果。
[0009]本发明为解决技术问题而采用如下技术方案:
[0010]一种通过静电纺丝制备细胞爬片的方法，包括如下步骤:
[0011](I)取盖玻片，用蒸馏水浸泡后冲洗，于紫外灯下照射灭菌；
[0012](2)分别称取玉米醇溶蛋白或林蛙皮胶原蛋白与聚乳酸，使二者的质量比为1:1至5: 1，溶于六氟异丙醇中，配制成质量百分比浓度为10%的纺丝溶液；
[0013](3)将前述盖玻片贴附于静电纺丝装置中的接收装置表面；
[0014](4)按设定的纺丝电压、纺丝距离、纺丝速率，使用上述配制好的纺丝溶液进行静电纺丝；
[0015](5)将盖玻片取下，真空干燥后，得到细胞爬片。
[0016]所述步骤(2)中所述的玉米醇溶蛋白或林蛙皮胶原蛋白与聚乳酸的质量比优选为 3: I。
[0017]所述步骤(4)中使用玉米醇蛋白与聚乳酸配制的纺丝溶液的静电纺丝条件为:所述的纺丝电压为13-17KV，纺丝距离为10-14cm，纺丝速率为0.5-0.7ml/h。
[0018]所述步骤(4)中使用林蛙皮胶原蛋白与聚乳酸配制的纺丝溶液的静电纺丝条件为:纺丝电压13-17KV，纺丝距离为10-15cm，纺丝速率为0.8-1.2ml/h。
[0019]本发明与现有技术相比具有如下有益效果:
[0020]本发明针对不同的细胞培养需求，采用生物性能较好的天然蛋白类物质和聚乳酸为原料制备电纺溶液，通过静电纺丝在普通盖玻片表面制成三维多孔结构的纳米纤维膜。采用本发明方法制备的细胞爬片，安全无毒、可降解、针对性强，更有利于细胞的粘附、生长、增殖和培养，可有效提高体外细胞培养的实验效果；本发明克服了现有细胞爬片制备技术单一、培养效果欠佳的缺点，具有效果显著、简便易行、成本低廉，利于推广的优点。
【附图说明】
[0021]图1为实施例1中制备的细胞爬片实物照片；
[0022]图2为实施例1中制备的细胞爬片的微观扫描电镜照片；
[0023]图3为实施例4中制备的细胞爬片的微观扫描电镜照片；
[0024]图4为应用实施例1中细胞培养的电镜照片；
[0025]图5为应用实施例2中细胞培养的电镜照片
【具体实施方式】
:
[0026]下面通过实施例对本发明进一步说明，但这些实施例仅用于解释本发明，对本发明的范围并不构成限制。
[0027]实施例1
[0028](I)取盖玻片15个，使用蒸馏水浸泡冲洗后，放入紫外灯光下照射2h ;
[0029](2)分别称取玉米醇溶蛋白0.601g，以及聚乳酸0.198g，溶于4.5ml的六氟异丙醇(25°C，密度1.596g/ml)中，磁力搅拌2h ；
[0030](3)将盖玻片粘贴于静电纺丝装置中的接收装置表面；
[0031](4)调节静电纺丝条件中的电压为15kv，纺丝距离12cm，纺丝速率0.6ml/h进行静电纺丝；
[0032](5)将接收装置上贴附的盖玻片取下，在温度为37°C，真空度为0.09MPa的真空干燥箱中恒温干燥24h，得到细胞爬片(见图1和图2)。
[0033]实施例2
[0034](I)取盖玻片15个，使用蒸馏水浸泡冲洗后，放入紫外灯光下照射2h ;
[0035](2)分别称取玉米醇溶蛋白0.666g，以及聚乳酸0.133g，溶于4.5ml的六氟异丙醇(25°C，密度1.596g/ml)中，磁力搅拌2h ；
[0036](3)将盖玻片粘贴于静电纺丝装置中的接收装置表面；
[0037](4)调节静电纺丝条件中的电压为13kv，纺丝距离10cm，纺丝速率0.5ml/h，进行静电纺丝；
[0038](5)将接收装置上贴附的盖玻片取下，在温度为37°C，真空度为0.09MPa的真空干燥箱中恒温干燥24h，得到细胞爬片。
[0039]实施例3
[0040](I)取盖玻片15个，使用蒸馏水浸泡冲洗后，放入紫外灯光下照射2h ;
[00