人rrs1基因的应用以及抑制剂的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，具体设及人RRS1基因的应用W及抑制剂。
【背景技术】
[0002] RNA干扰（RNAinterference,RNAi)即用核巧酸组成的短的双链RNA(dsRNA)进行 转录后基因沉默。它可高效、特异地阻断体内特定基因的表达，导致其降解，从而引起生物 体内特异基因的沉默，使细胞表现出某种基因表型的缺失，是近年来新兴的一种常用的研 究基因功能、寻找疾病治疗方法的实验室技术。研究表明，长度为21-23nt的双链RNA能够 在转录和转录后水平特异性的引起RNAi。肿瘤患者虽经化疗、放疗和综合治疗，但五年生存 率仍很低，如能对肿瘤发病和进展有关的基因进行干预，将能为肿瘤的治疗开辟新途径。近 年来，RNAi已成为肿瘤的基因治疗的有效策略。利用RNAi技术可W抑制原癌基因、突变的 抑癌基因、细胞周期相关基因、抗调亡相关基因等的表达来抑制肿瘤进程。
[0003] RRS1编码203个氨基酸残基，是一种新型的、保守的的真核细胞核蛋白基因，有报 道表明在亨廷顿病的实验动物模型中早期表现为RRS1高表达，同时纹状体特异性的高清 标准，和多聚谷氨酷胺依赖性。但是，关于RRS1在肿瘤相关领域未见相关研究报道，特别是 针对结肠癌的研究。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本发明的一个目的在于提供人RRS1基因在筛选肿瘤治疗药物、制备肿 瘤治疗药物或制备肿瘤诊断药物中的应用，特别是在针对结肠癌的肿瘤中。
[0005] 本发明的另外一个目的是提供一种抑制人RRS1基因的核酸分子，使其WRNA干扰 方式稳定并特异地下调RRS1基因的表达，并有效地抑制人肿瘤细胞特别是结肠癌肿瘤细 胞的增殖。
[0006] 本发明的另外一个目的是提供一种抑制人RRS1基因的重组载体，使其WRNA干扰 方式稳定并特异地下调RRS1基因的表达，并有效地抑制人肿瘤细胞特别是结肠癌肿瘤细 胞的增殖。
[0007] 本发明的另外一个目的是提供一种抑制人RRS1基因的慢病毒，使其WRNA干扰方 式稳定并特异地下调RRS1基因的表达，并有效地抑制人肿瘤细胞特别是结肠癌肿瘤细胞 的增殖。
[0008] 本发明的另外一个目的是提供所述核酸分子、重组载体和慢病毒在制备预防或治 疗肿瘤的药物中的应用，特别是针对结肠癌的肿瘤中。
[0009] 本发明的另外一个目的是提供一种预防或治疗肿瘤的药物，使其WRNA干扰方式 稳定并特异地下调RRS1基因的表达，并有效地抑制人肿瘤细胞特别是结肠癌肿瘤细胞的 增殖。
[0010] 为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
[0011] 人RRS1基因在筛选肿瘤治疗药物、制备肿瘤治疗药物或制备肿瘤诊断药物中的 应用。
[0012] 作为优选，所述肿瘤为结肠癌。
[0013] 作为优选，所述药物为RNA干扰药物。
[0014] W人RRS1基因为目标，选择其中合适的祀序列，W此为基础可筛选或制备出能够 高效特异性抑制RRS1基因的转录或翻译，或能够高效特异性抑制RRS1蛋白的表达或活性 的分子，从而进一步抑制肿瘤细胞的生长、增殖、分化、存活等，而所述分子即肿瘤治疗或预 防药物。
[0015] 其中所述分子可选自但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体 药、多肤、蛋白或干扰慢病毒。更进一步地，所述核酸分子包括但不限于：反义寡核巧酸、 双链RNA(dsRNA)，W及核酶、核糖核酸内切酶m制备的小干扰RNA(siRNA)或者短发夹 RNA(shRNA)。所述核酸分子中包含有人RRS1基因的启动子序列或RRS1基因的信息序列。
[0016] 当所述分子为核酸分子时，特别是siRNA或shRNA时，其可W互补人RRS1基因转 录的mRNA，WRNA干扰方式抑制其转录，而前述的人RRS1基因中祀序列即为mRNA所对应的 人RRS1基因上的DNA序列。
[0017] 作为优选，siRNA或shRNA中的一条链包含与祀序列相同的RNA序列，即序列中碱 基A、C、G保持和祀序列一致，对应的碱基T更换为U，进一步地，所述祀序列选自SEQIDNO; 1-5任意一项。
[0018] 所述将RRS1基因用于制备肿瘤诊断药物，是指将RRS1基因表达产物作为一项肿 瘤诊断指标应用于肿瘤诊断药物的制备中，特别是应用于结肠癌诊断药物的制备中。
[0019] 通过免疫组织化学的方法检测RRS1基因在肿瘤组织、正常组织和肿瘤周围正常 组织中的表达水平。申请人发现RRS1基因在肿瘤组织中的表达量显著高于正常组织和肿 瘤周围正常组织。提示RRS1基因可能作为一种癌基因，在肿瘤的发生发展中发挥重要作 用，RRS1基因的表达水平可能成为肿瘤诊断的标志。
[0020] 基于上述技术思路，本发明还提供了多种人RRS1的抑制剂，包括：
[002。 一种抑制人RRS1基因的核酸分子，所述核酸分子为SiRNA或shRNA，且包含与人 RRS1基因中15-27个连续核巧酸序列相同的RNA序列；优选地，所述核酸分子包含与人RRS1基因中19-23个连续核巧酸序列相同的RNA序列；更优选地，所述核酸分子包含与人 RRS1基因中19、20或21个连续核巧酸序列相同的RNA序列。
[0022] 进一步优选，所述SiRNA中的第一条链包含与人RRS1基因中15-27个连续核巧酸 序列相同的RNA序列，第二条链与第一条链互补；更进一步优选地，所述第一条链核巧酸序 列包含与如SEQIDNO;1-5任意一项所示的核巧酸序列相同的RNA序列；最优选地，所述第 一条链核巧酸序列如SEQIDN0;6-10任意一项所示，即分别与SEQIDN0;l-5所示的核巧 酸序列相同的RNA序列，具体如下：
[0023] 沈QIDNO;6(对应于沈QIDNO ;1) ;5, -CCGCUGCCUUCAUUGAGUUUA-3,；
[0024] 沈QIDNO;7(对应于沈QIDNO ;2) ;5, -CCGUCUGUAAACCAAGGACUA-3,；
[00巧]SEQIDNO;8(对应于沈QIDNO ;3) ;5, -CAGAGAAGUUGCAACGCAUCA-3,；
[0026] 沈QIDNO;9(对应于沈QIDNO ;4) ;5, -CGUCUGUAAACCAAGGACUAU-3,；
[0027] SEQIDNO;10(对应于SEQIDNO;5) ;5, -CCGGGAAUGAGUUCUAUUCUU-3,。
[002引进一步优选，所述shRNA包括正义链和反义链，W及连接正义链和反义链的茎环 结构（loop),所述正义链和反义链互补，且所述正义链序列包含与人RRSl基因中15-27个 连续核巧酸序列相同的RNA序列；更进一步优选地，所述正义链核巧酸序列包含与如SEQ IDNO;1-5任意一项所示的核巧酸序列相同的RNA序列，所述茎环结构的序列如SEQID N0;16-23任意一项所示序列；最优选地，所述正义链核巧酸序列如SEQIDN0;ll-15任意 一项所示，即包含了分别与如SEQIDNO;1-5所示的核巧酸序列相同的RNA序列，具体如 下：
[0029] 沈QIDNO;11(对应于沈QIDNO;1) ； 5 ^-CCGCUGCCUUCAUUGAGUUUACUCGAGUAAACU CAAUGAAGGCAGCGG-3' ；
[0030] 沈QIDNO; 12 (对应于沈QIDNO; 2) : 5 '-CCGUCUGUAAACCAAGGACUAAAGCUUUAGUCC UUGGUUUACAGACGG-3,
[0031] 沈QIDNO; 13 (对应于沈QIDNO; 3) : 5 '-CAGAGAAGUUGCAACGCAUCACCACCUGAUGCG UUGCAACUUCUCUG-3,
[0032] 沈QIDNO;14(对应于沈QIDNO;4) :5'-CGUCUGUAAACCAAGGA抓AUAAGCUMUAGUC CUUGGUUUACAGACG-3,
[0033] 沈QIDNO; 15 (对应于沈QIDNO; 5) : 5'-CCGGGAAUGAGUUCUAUUCUUCCACACCAAGAA UAGAACUCAUUCCCGG-3,
[0034] 其中下划线部分表示茎环结构的序列，也可任意选自SEQIDNO;16-23任意一项 所示序列。
[00巧]当核酸分子为shRNA时，其可经酶切加工后成为siRNA。需要说明的是，所述与人RRS1基因中15-27个连续核巧酸序列相同（或与如SEQIDN0;l-5任意一项所示的核巧 酸序列相同）的RNA序列等相似的描述语句是指，siRNA或shRNA序列中碱基A、C、G保持 和祀序列一致，祀序列中对应的碱基T更换为U。
[0036] 同时，本发明还提供一种抑制人RRS1基因的重组载体，包含能转录出本发明所述 核酸分子的序列W及载体，所述序列嵌入载体中。需要说明的是，所述能转录出本发明所述 核酸分子的序列即与人RRS1基因中15-27个连续核巧酸祀序列相同，优选SEQIDNO;1-5 任意所示的核巧酸序列或与SEQIDNO 任意所示序列相同的DM序列（仅将SEQID N0;ll-15中的U替换为T)。
[0037] 优选地，所述载体为慢病毒载体；更优选地，所述慢病毒载体包含启动子和/或编 码被检测到的标记物的核巧酸序列；进一步优选地，所述被检测到的标记物为绿色巧光蛋 白；最优选地，所述慢病毒载体为pLKO.l-puro、pLK0.l-CMV-tGFP、pLK0. 1-puro-CMV-tGFP、 pLKO. 1-CMV-Neo、pLKO. 1-Neo、pLKO. 1-Neo-CMV-tGFP、pLK