模拟移动色谱分离法制乳清蛋白抗氧化肽的利记博彩app
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种模拟移动色谱分离法制乳清蛋白抗氧化肽。
【背景技术】
[0002]乳清是生产干酪、干酪素的主要副产物，一般每生产I kg干酪可得到8?9 kg乳清。但其利用率仅占50 %左右，其余乳清均作为饲料或者直接作为废水排放掉，这样不仅浪费了宝贵的食物资源，同时也造成了严重的环境污染。乳清蛋白容易消化，具有很高代谢效率和生物利用效价，近年来的研究表明在乳清蛋白多肽链内部可能普遍存在着功能区，蕴藏着许多生物活性肽，通过蛋白酶水解释放出来即可在体内发挥特定的生理功能。人类的衰老与人体代谢所产生的氧化物有关，特别是自由基的产生，它会产生许多对人体及细胞的不良影响，引起脂质氧化反应从而生成对人体有害的难以降解的脂褐素，攻击生命大分子物质，破坏细胞内DNA、蛋白质以及细胞膜，诱导细胞凋亡，加速人体衰老。同时，自由基过多，也会诱发一系列疾病，如老年痴呆症、脑血栓、动脉粥样硬化和癌症等。因此，探寻能有效清除自由基的物质成分非常有必要。
[0003]天然蛋白来源的抗氧化肽因其分子量小、易吸收、清除自由基活性强、安全性高等特点，在医药、化妆品、保健品和食品与饲料添加剂等方面有广阔的应用前景。但目前抗氧化肽的分离纯化过程一般较繁琐，成本较高，不能满足大规模生产的需求。
【发明内容】
[0004]本发明对于上述现有技术的不足，提供了一种模拟移动色谱分离法制乳清蛋白抗氧化肽。
[0005]本发明的模拟移动色谱分离法制乳清蛋白抗氧化肽，其操作步骤如下:
a、预处理:将I份乳清蛋白粉与10?35份水混合，在95°C下恒温5min后，降温至45°C?60°C，用NaOH溶液调节溶液pH至7.0?8.5，制成乳清蛋白溶液；
b、酶解:在a步骤制得的乳清蛋白溶液中加入碱性蛋白酶0.005?0.02份，同时用NaOH溶液维持系统的pH为7.0?8.5，在45°C?60°C的条件下搅拌2.0?6.0h后，再加入胰蛋白酶0.005?0.02份，仍维持反应液pH为7.0?8.5，在45°C?60°C的条件下搅拌1.0h?3.0h，然后升温至85。。?100。。，保持1min?15min，制得乳清蛋白酶解液；
C、分离:去除b步骤制得的乳清蛋白酶解液中的固体物质，收集酶解液中分子量小于100Da的滤液，制得粗乳清蛋白肽；
d、纯化:将粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其质量百分比浓度为5%?25%，用模拟移动床连续吸附进行分离纯化，然后将吸附液进行喷雾干燥，即制得乳清蛋白抗氧化肽；以上均为质量份数。
[0006]作为本发明的进一步优化，其操作步骤如下:
a、预处理:将I份乳清蛋白粉与20?30份水混合，在95°C下保持5min后，降温至45°C?60°C，用NaOH溶液调节溶液pH至7.0?8.5，制成乳清蛋白溶液；
b、酶解:在a步骤制得的乳清蛋白溶液中加入碱性蛋白酶0.01?0.015份，同时NaOH溶液维持系统的pH为7.0?8.5，在45°C?60°C的条件下搅拌3.0?5.0h后，再加入胰蛋白酶0.01?0.015份，仍维持反应液pH为7.0?8.5，在45°C?60°C的条件下搅拌2.0h?3.0h，然后升温至85°C?100°C，保持1min?15min，制得乳清蛋白酶解液；
C、分离:去除b步骤制得的乳清蛋白酶解液中的固体物质，收集酶解液中分子量小于100Da的滤液，制得粗乳清蛋白肽；
d、纯化:将粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其质量百分比浓度为5%?25%，用模拟移动床连续吸附进行分离纯化，然后将吸附液进行喷雾干燥，即制得乳清蛋白抗氧化肽；以上均为质量份数。
[0007]作为本发明的进一步改进，所述的模拟移动床连续吸附分离，其吸附剂为大孔吸附树脂、吸附原料为粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其控制流量为15?20BV/h ;解析剂为乙醇溶液、其质量百分浓度为90%、其控制流量为20?30BV/h ;冲洗剂为去离子水、其控制流量为15?25BV/h ；吸附树脂的再生剂是NaOH溶液、其质量百分浓度为2%?4%、其控制流量为3?9BV/h ;全程切换时间为300?700s、温度控制在25?60°C、压力控制为0.3?1.0MPa0
[0008]作为本发明的进一步改进，所述的乳清蛋白为食品级。
[0009]作为本发明的进一步改进，所述的大孔吸附树脂为XAD16N吸附树脂、XAD18吸附树脂或XAD1600N吸附树脂。
[0010]本发明的模拟移动色谱分离法制乳清蛋白抗氧化肽，自动化程度高、减少吸附剂及水的浪费与污染、提取效率高，既提高了乳清蛋白的利用率，又获得了高活性抗氧化肽；通过本发明制得的乳清蛋白抗氧化肽其DPPH自由基清除活性IC5tl值为1.8mg/mL,羟自由基清除活性IC5tl为110 μ g/mL，产品的质量百分比浓度为5?20%，通过高效液相色谱检测，其纯度为70?90% ;由解吸样品量除以进样量得出，其产品收率可达到95% ;且该方法生产成本低，便于工业化生产；所获得抗氧化肽产品安全、无毒副作用、抗氧化活性高、质量稳定，可广泛应用于食品、化妆品和医药等领域。
【具体实施方式】
[0011]实施例1
模拟移动色谱分离法制乳清蛋白抗氧化肽，其操作步骤如下:
a、预处理:将I份食品级乳清蛋白粉与10份水混合，在95°C下恒温5min后，降温至45°C，用NaOH溶液调节溶液pH至7.0，制成乳清蛋白溶液；
b、酶解:在a步骤制得的乳清蛋白溶液中加入碱性蛋白酶0.005份，同时用NaOH溶液维持系统的PH为7.0，在45°C的条件下搅拌2.0h后，再加入胰蛋白酶0.005份，仍维持反应液pH为7.0，在45°C的条件下搅拌1.0h，然后升温至85°C，保持lOmin，制得乳清蛋白酶解液；
C、分离:去除b步骤制得的乳清蛋白酶解液中的固体物质，收集酶解液中分子量小于100Da的滤液，制得粗乳清蛋白肽；
d、纯化:将粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其质量百分比浓度为5%，用模拟移动床连续吸附进行分离纯化，然后将吸附液进行喷雾干燥，即制得乳清蛋白抗氧化肽；所述的模拟移动床连续吸附分离，其吸附剂为XAD16N吸附树脂、吸附原料为粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其控制流量为15BV/h ;解析剂为乙醇溶液、其质量百分浓度为90%、其控制流量为20BV/h ;冲洗剂为去离子水、其控制流量为15BV/h ;吸附树脂的再生剂是NaOH溶液、其质量百分浓度为2%、其控制流量为3BV/h ;全程切换时间为300s、温度控制在25°C、压力控制为 0.3MPa ；
以上均为质量份数。
[0012]实施例2
模拟移动色谱分离法制乳清蛋白抗氧化肽，其操作步骤如下:
a、预处理:将I份食品级乳清蛋白粉与35份水混合，在95°C下恒温5min后，降温至60°C，用NaOH溶液调节溶液pH至8.5，制成乳清蛋白溶液；
b、酶解:在a步骤制得的乳清蛋白溶液中加入碱性蛋白酶0.02份，同时用NaOH溶液维持系统的pH为8.5，在60°C的条件下搅拌6.0h后，再加入胰蛋白酶0.02份，仍维持反应液pH为8.5，在60°C的条件下搅拌3.0h，然后升温至100°C，保持15min，制得乳清蛋白酶解液；
C、分离:去除b步骤制得的乳清蛋白酶解液中的固体物质，收集酶解液中分子量小于100Da的滤液，制得粗乳清蛋白肽；
d、纯化:将粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其质量百分比浓度为25%，用模拟移动床连续吸附进行分离纯化，然后将吸附液进行喷雾干燥，即制得乳清蛋白抗氧化肽；所述的模拟移动床连续吸附分离，其吸附剂为XAD18吸附树脂、吸附原料为粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其控制流量为20BV/h ;解析剂为乙醇溶液、其质量百分浓度为90%、其控制流量为30BV/h ;冲洗剂为去离子水、其控制流量为25BV/h ;吸附树脂的再生剂是NaOH溶液、其质量百分浓度为4%、其控制流量为9BV/h ;全程切换时间为700s、温度控制在60°C、压力控制为 1.0MPa ；
以上均为质量份数。
[0013]实施例3
模拟移动色谱分离法制乳清蛋白抗氧化肽，其操作步骤如下:
a、预处理:将I份乳清蛋白粉与20份水混合，在95°C下保持5min后，降温至45°C，用NaOH溶液调节溶液pH至7.0，制成乳清蛋白溶液；
b、酶解:在a步骤制得的乳清蛋白溶液中加入碱性蛋白酶0.01份，同时NaOH溶液维持系统的pH为7.5，在45°C的条件下搅拌3.0h后，再加入胰蛋白酶0.01份，仍维持反应液pH为7.5，在45°C的条件下搅拌2.0hh，然后升温至85°C，保持lOmin，制得乳清蛋白酶解液；
C、分离:去除b步骤制得的乳清蛋白酶解