一种短短芽孢杆菌bbc-3及其应用与菌剂制备
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于防治西兰花真菌病害的短短芽孢杆菌BBC-3 (5r#i知ciBm 及其菌剂制备与应用，属于农作物病害生物防治领域。
【背景技术】
[0002] 西兰花为十字花科，一、二年生草本植物，属甘蓝类蔬菜。其富含维生素A、维生素 C以及磷、铁、钙等无机质，且蛋白质的含量亦很高，是我国重要的出口创汇蔬菜。真菌病害 是十字花科蔬菜上的一类重要病害，发生普遍且危害严重。
[0003] 当前对西兰花真菌病害的防治主要通过种植抗（耐）病品种和化学防治来控制。 随着有害病原菌抗性问题日益严重，且化学农药残留易造成残毒、环境污染等严重危害，对 人体健康、生态环境造成了很大的威胁，不利于西兰花栽培生产的可持续发展。
[0004] 利用拮抗微生物及其代谢产物来抑制或杀死病原物，是植物病害防治的有效措施 之一。生物防治不仅可以避免化学农药带来的危害，而且安全有效、作用持久。在众多生防 菌之中，芽孢杆菌生长旺盛，繁殖迅速，能产生抗逆性内生孢子，有着其他微生物无法媲比 的优势。
[0005] 目前在西兰花真菌病害生物防治方面的研究还较少，尤其是这方面的专利文献暂 时未见报道。本发明的目的在于提供一种能够高效拮抗西兰花病原真菌的芽孢菌，并形成 微生物制剂，为开发新型西兰花真菌病害生防产品奠定基础。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种能够高效拮抗西兰花多种病原真菌的短短芽孢杆菌 及其微生物制剂，并提供该微生物制剂的制备方法。该制剂施用后可有效防治西兰花真菌 病害，减少化学农药的使用，降低环境污染，提高产品品质。
[0007] 本发明所采用的技术方案如下： 本发明的短短芽孢杆菌BBC-3于2014年8月28日在中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物菌种保藏中心进行了保藏，保藏号为：CGMCC No. 9622。
[0008] 本发明的短短芽孢杆菌BBC-3在植物真菌病害防治中的应用。
[0009] 进一步的，本发明所述的真菌病害包括灰霉病菌、霜霉病菌、黑腐病菌、菌核病菌、 黑斑病菌、疫霉菌、炭疽病菌、枯萎病菌、灰霉病菌或立枯丝核菌。
[0010] 进一步的，本发明所述的植物为西兰花。
[0011] 进一步的，本发明所述的短短芽孢杆菌BBC-3的菌剂的制备方法中所述短短芽孢 杆菌BBC-3用液体PB培养基，28°C振荡培养得到发酵液，所述短短芽孢杆菌BBC-3菌含量 > 2. OX 109 cfu/mL，采用喷雾干燥法制得固体粉剂。
[0012] 进一步的，本发明所述喷雾干燥的基质为微粉碳酸钙、0 -环糊精。
[0013] 进一步的，本发明所述发酵液为10重量份，所述微粉碳酸钙为0. 2~0. 8重量份，所 述的P -环糊精为0. 7~1. 3重量份。
[0014] 进一步的，本发明所述固体粉剂含所述短短芽孢杆菌BBC-3总数> 2. 5XKT cfu/g。
[0015] 本发明的有益效果是提供了一种能有效防治西兰花真菌病害的拮抗菌株及其菌 剂与应用，该产品具有如下优点：1)本发明公布的短短芽孢杆菌具有广谱抗菌性，不仅对西 兰花的多种病原菌有较强的拮抗作用，而且对其他病原菌如辣椒疫霉菌、黄瓜炭疽病菌、棉 花枯萎病菌、黄瓜灰霉病菌、葡萄灰霉病菌、立枯丝核菌、西瓜霜霉病菌等也有较好的拮抗 作用。2)具有良好的促生作用：本发明制备的微生物菌剂施用后，不仅能够有效抑制西兰花 真菌病害的发生，而且还可以促进西兰花的营养生长，增加产量，减少产品农药残留。3)相 对于化学农药，本发明制备的微生物菌剂更安全、环保，其制备和使用过程无污染、无公害、 对环境友好。总之，本发明公布的短短芽孢杆菌菌剂在西兰花栽培生产中使用具有无毒、无 污染、无残留的优点，是解决西兰花农药残留和病菌抗药性问题的有效途径，而且该菌剂在 其他作物上也有一定的应用潜力，对促进蔬菜产业可持续发展具有重要意义。
[0016] 生物样品保藏信息 短短芽抱杆菌BBC-3,分类命名为该菌株已于2014年8月28 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号为：CGMCC No. 9622 ;保藏地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编 100101。
【附图说明】
[0017] 图1为本发明短短芽孢杆菌BBC-3的系统发育树。
【具体实施方式】
[0018] 本发明通过大量筛选工作，得到了一株对西兰花真菌病害病菌有较强拮抗作用的 菌株BBC-3,通过菌体形态、生理生化特征以及16S rDNA分子生物学鉴定，确定该菌株为短 短芽孢杆菌Wren's)。该菌株已于2014年9月5日保存于中国微生物菌 种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号为：CGMCC No. 9622 ;保藏地址：中国 北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101 ; 本发明所述的短短芽孢杆菌菌株BBC-3在PB培养基平板形成的单菌落圆形，不透明， 表面光滑湿润，边缘整齐，中间隆起，不产生可溶性色素。菌体形态为杆菌，产芽孢，芽孢中 生，呈椭圆形，革兰氏染色阳性，菌体大小为（0. 6-0.8) MmX (3. 5-4.0) Mm。
[0019] 本发明所述的短短芽孢杆菌菌株BBC-3对西兰花灰霉病、霜霉病、黑腐病、菌核 病、黑斑病等病原真菌具有较强的拮抗作用。
[0020] 本发明所述的短短芽孢杆菌菌株BBC-3对辣椒疫霉菌、黄瓜炭疽病菌、棉花枯萎 病菌、黄瓜灰霉病菌、葡萄灰霉病菌、立枯丝核菌、西瓜霜霉病菌等植物性病原真菌也具有 拮抗作用。
[0021] 本发明的微生物制剂含有保藏号为CGMCC No. 9622的短短芽孢杆菌菌株BBC-3。 其液体菌剂细菌总数彡2. OX 109 cfu/mL，固体粉剂含细菌总数彡2. 5X 101(| cfu/g。
[0022] 本发明所述的微生物制剂的制备方法包括以下步骤： 步骤一：将保存的短短芽孢杆菌BBC-3划线转接到PB培养基平板中，置于28 °C恒温 培养2 d。将获得的短短芽孢杆菌BBC-3菌苔接种于PB种子培养基中，28 °C摇床振荡培养 24 h，制得种子液。
[0023] 步骤二：将步骤一的种子液按体积比10%的接种量接种到大量发酵培养基中，于 28 °C下培养36 h，得到发酵液。
[0024] 步骤三：将步骤二的发酵液经镜检计数后，菌液浓度> 2. 0X109 cfu/mL，无菌分 装，得到的短短芽孢杆菌微生物液体制剂。
[0025] 步骤四：将步骤二所得到