用于检测自身免疫性疾病的诊断方法和相关主题的利记博彩app
【专利说明】用于检测自身免疫性疾病的诊断方法和相关主题 发明领域
[0001 ] 本发明涉及新鉴定的自身免疫性疾病的诊断和治疗，提供包含衍生自新的细胞表 面自身抗原的至少一个表位的多肽或蛋白以及用于检测和治疗所述自身免疫性疾病的相 关装置（means)和方法。
[0002] 发明背景
[0003] 记忆、行为、认知和思维过程可以被自身抗体改变的这一发现已经改变了之前被 认为是特发性的（idiopathic)神经精神疾病的诊断和治疗方法（approach)。从2007年以 来，已经鉴定了七种这样的抗体（抗匪0六1?、410^1?、6484(8)、1^11工38口12、6171?和11161111?5)， 均靶向细胞表面蛋白质，所述蛋白质参与突触传递、可塑性或神经兴奋性并与尽管严重但 通常对免疫治疗作出应答的综合征有关。 1患者可昏迷数月，具有怪异的行为、异常的动作 或顽固性癫痫并在免疫治疗和扩展的护理支持下仍然恢复。2考虑到直到最近这些疾病是 未知的，一些疾病相对高的频率已经是令人惊讶的。例如，在专注于脑炎的诊断和流行病学 的中心（加利福尼亚脑炎项目）里，抗NMDAR脑炎的频率超过了任何个体病毒性脑炎的频 率。3由于这些原因，在未知病因的脑炎（经常发生的情况）的背景下发展成快速进展性神 经精神症状的患者中，类似的免疫机制被越来越多地予以考虑。目前大约70%的不明病因 的脑炎在针对感染性病因的广泛评估之后仍未得到诊断。 4在这样的情形下，针对神经元细 胞表面抗原的自身抗体的鉴定将管理转向了免疫治疗的使用，并且可以在其它方式被认为 是徒劳的情况下扩展重症监护支持。
[0004] 鉴于上述情况，本发明的潜在问题在于提供分别用于之前未鉴定的自身免疫性脑 炎或不明病因的脑炎的诊断和治疗的装置。
[0005] 发明概述
[0006] 该问题由本申请权利要求的方案得到解决，特别是通过提供包含衍生自DPPX(用 于检测和治疗自身免疫性疾病（特别是脑炎）的新的自身抗原）的至少一个表位的多肽或 蛋白质，编码这样的多肽的核酸或载体，包含这样的载体的细胞，涉及这样的多肽的体外诊 断方法和检测试剂盒，包含这样的多肽的药物组合物，涂敷有这样的多肽或药物组合物的 医疗设备以及用于治疗受试者中自身免疫性疾病（特别是脑炎）的方法。
[0007] 本发明的一个优点在于这样的事实，病因不明脑炎的诊断能够分别鉴定所述疾病 为自身免疫性脑炎，区分其它（非自身免疫性）形式的脑炎或其他疾病或相关的症状，并从 而给患者的具体治疗提供例如免疫抑制剂。
[0008] 附图概述
[0009] 图1显示DPPX的免疫沉淀；
[0010] 图2显示肠肌丛中DPPX的表达；
[0011] 图3显示采用基于细胞的测定分析DPPX抗体；
[0012] 图4显示采用DPPX无效突变体和野生型小鼠的大脑对比患者的血清反应性；
[0013] 图5显示用患者的血清免疫染色的大鼠大脑；
[0014] 图6显示采用表达缺失了DPPX细胞外结构域的突变体（DPPXed-myc)的基于细胞 的测定分析患者的抗体；以及
[0015] 图7显示采用表达Kv4. 2的基于细胞的测定分析患者的抗体。
[0016] 发明详述
[0017] 根据本发明，"多肽"应理解为两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个或更多个 氨基酸的聚合物，其可以包括标准氨基酸以及非标准氨基酸。本文互换使用术语多肽、肽和 蛋白质。
[0018] 对于本发明，术语"自身免疫性疾病"涉及与抗DPPX抗体的出现有关的疾病。如本 文所报道的，具有这样的自身免疫性疾病的患者患有例如包括癫痫、认知功能障碍、幻觉、 精神病症状、情绪激动、神志不清、静止性震颤和肌阵挛的症状。这些症状的大部分与神经 疾病有关。因此，根据本发明一个优选的实施方案，自身免疫性疾病是神经系统的自身免疫 性疾病。此外，本文所列的症状至少部分与中枢神经系统的缺陷有关。因此，根据本发明 的另一个实施方案，所述自身免疫性疾病是自身免疫性脑炎。更进一步地，一组特定的症状 (如震颤）也可以是由外周神经系统的缺陷（例如由影响运动神经元的自身免疫性疾病） 引起的。因此，根据本发明一个进一步的实施方案，所述自身免疫性疾病是外周神经系统的 自身免疫性疾病。另外，在患有本文所述的疾病的患者中观察到严重的腹泻、便秘和体重减 轻，表明其它组织（如消化道的组织）也可以受这样的自身免疫性疾病的影响。因此，根据 本发明的一个实施方案，所述自身免疫性疾病是自主神经系统的自身免疫性疾病。本文互 换使用术语病症（disorder)和疾病（disease)。
[0019] 在本发明的范围内，"表位"应理解为能够被抗体特异性识别（即结合）的多肽的 一部分。所述表位可以是构象表位（由多肽的氨基酸序列的不连续部分组成）或线性表位 (由多肽的氨基酸序列的连续部分组成）。
[0020] 在本发明的范围内，对于表位，术语"衍生的"涉及由多肽或蛋白质的一级氨基酸 序列的不连续或连续部分形成的表位。本领域已知的是，表位中的一个或更多个氨基酸可 以被取代，例如通过基本上不改变抗体结合强度或特异性的保守氨基酸置换（例如谷氨酸 至天冬氨酸E-D，谷氨酰胺至天冬酰胺Q-N，苯丙氨酸至酪氨酸F-Y，亮氨酸至异亮氨 酸L-I)。因此，术语"衍生的"还涉及这样的表位：当与具有原始氨基酸序列的表位相比， 尽管在氨基酸序列上具有差异，所述表位表现出不变的或基本上不变的抗体结合强度或特 异性。
[0021] 根据本发明，"核酸"涉及DNA或RNA聚合物，还包括其化学衍生物或合成类似物 (如肽核酸或吗啉代核酸）。本领域已知的是，由于遗传密码的简并性，核酸编码的某些变 化不会导致其所编码的肽序列的变化。因此，术语"核酸"还涵盖编码相同肽序列、与原始 核酸序列在序列上存在不同的核酸序列。
[0022] 根据本发明的"载体"应理解为包括插入物（例如编码所需蛋白质的基因或核酸 序列）和其它特征（如载体复制、所述插入物的表达、承载载体的宿主细胞的阳性选择或标 记蛋白的表达所需的序列）的环状或线性核酸序列。这样的载体和序列是本领域广泛已知 的。
[0023] 本发明范围内的"细胞"是能够被载体转化的任何原核或真核宿主细胞。例如，细 胞可以是细菌细胞（如大肠杆菌细胞）或真核细胞（如永生化的人培养细胞）。永生化的 人培养细胞的一个例子是J1EK293细胞。
[0024] 术语"DPPX"涉及二肽基肽酶样蛋白-6 (DPP6或DPPX)，KV4. 2钾通道的细胞表面 辅助亚基。DPPX的同义词包括二肽基氨肽酶相关蛋白、二肽基肽酶6、二肽基肽酶IV样蛋 白和二肽基肽酶VI。
[0025] DPPX是高度保守的，使得即使是来自与人类关系较远的物种的DPPX也适合于引 发与人抗DPPX抗体的特异性结合。这也适用于DPPX蛋白的所有人同种型。此外，已知例如 线性MHCI类表位长度为大约8至11个氨基酸。因此，在DPPX同系物中，在各自物种和人 类之间保守的、长度在8至11个氨基酸的区域原则上已足以引发与人抗DPPX抗体的特异 性结合。在这方面，构成构象表位的保守序列可能甚至更短。因此，对于本发明，"DPPX"涉 及源自真核生物、优选哺乳动物、更优选智人（homosapiens)或大鼠（rattusnorvegicus) 的DPPX蛋白的任何已知同种型。
[0026] 此外，与人抗DPPX抗体的特异性结合也可被DPPX的同系物（如DPPX天然存在的 同系物）引发。还包括DPPX非天然存在的同系物，例如，如通过单个或多个氨基酸或甚至 蛋白质基序或结构域的缺失或交换衍生自DPPX天然存在的同系物的同系物。因此，对于本 发明，"DPPX"还涉及DPPX天然和非天然存在的同系物。
[0027] 我们在本文中报道4位患有新型自身免疫性疾病的患者，特征在于与抗 DPPX(KV4. 2钾通道的细胞表面辅助亚基）抗体有关的认知功能障碍、情绪激动、幻觉、神志 不清、静止性震颤和肌阵挛的亚急性发展。在三位患者中，严重腹泻和体重减轻先于神经学 症状出现或与其重叠，其程度达到两位患者进行了广泛的内窥镜活检而没有得到明确诊断 的地步。脑脊液（CSF)细胞增多、增加的IgG指数或寡克隆带和针对密集或持久的免疫治 疗的神经学应答的存在给该病的自身免疫性病因提供支持。采用患者的抗体，三组实验确 立了DPPX作为主要自身抗原：从分离的大鼠海马神经元的培养物中免疫沉淀DPPX;基于细 胞的测定中DPPX的免疫染色和野生型和DPPX无效小鼠的对比大脑免疫染色，显示出患者 抗体与DPPX无效小鼠大脑的反应性的消除，并在一位患者中显示出针对未知抗原的额外 的抗体。
[0028]DPPX具有通过重构通道门控"上调（tuningup) "Kv4. 2通道的关键作用。5这种 类型的钾通道属于哺乳动物ShalK+通道家族6(其具有与ShakerK+(Kvl)家族相比不同 的性质），之前被认为是抗体相关边缘性脑炎、神经性肌强直或莫旺氏（Morvan's)综合征 (主要自身抗原是LGI1和Caspr2)的靶标。7'8Kv4. 2通道在膜电位的亚阈值范围内工作。 5这种细胞体-树突亚阈值A型K+电流（ISA)是决定细胞体-树突信号整合的电压门控离 子流的集合（ensemble)的关键组成部分。9在许多神经元中，始于轴丘（axonhillock)的 动作电位不但沿轴下传而且回传入树突。在树突树中，这些动作电位充当报告神经元输出 状态的信号。树突中的瞬时亚阈值、电流减弱动作电位的这种回传。在静息条件下，ISA 关闭该动作电位，因为它试图传入树突树的远端区域。然而，在某个时间窗口内兴奋性突触 输入与体细胞动作电位配对时，在远端树突中随之而来的亚阈值去极化灭活ISA，并且回传 动作电位的衰减实质上被降低了。6据信，这种相互作用提供了一致性检测机制，其在树突 Ca++信号传导、信号整合和突触可塑性中起着重要作用。5'6' 9
[0029]Kv4通道的功能依赖于两个辅助亚基，即细胞内Kv通道相互作用蛋白（KChIPs)，1Q 和细胞外DPPX(主要表达于海马锥体神经元和小脑）或DPP10 (具有不同的大脑表达谱并 且还存在于胰腺）。n'12DPPX由短的细胞质N末端、单个跨膜结构域和大的细胞外C末端组 成。依赖于细胞质结构域的长度，已经鉴定了两个成熟形式，DPPX-S和DPPX-L。13'14与抗细 胞外表位抗体的存在一致的是，我们的4位患者的血清和CSF同等识别DPPX-S和DPPX-L， 但是两位患者具有抗细胞外C末端被缺失的突变体构建