鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的成套引物的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域中鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的成套引物。
【背景技术】
[0002] 尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum)是一种世界性分布的土传病原真菌，寄主范围 广泛，可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花丼等100多种植物枯萎病的发生。尽管尖孢镰 刀菌在整体上具有广泛的寄主范围，但单个菌株仅能侵染一种或少数几种植物种类。在不 同的寄主上又分为不同的生理专化型，目前已报道的生理专化型有150多种，有些专化型 依据对不同品种的特异性被进一步划分为不同的生理小种，大多数专化型包含2个或更多 的生理小种，而一小部分是单型。某生理专化型可能在特定的植物种类上引起病害，但是属 于其他专化型的菌株对同样的这种特定植物种类可能无害甚至对其有利。
[0003] 香蕉枯萎病，又称香蕉镰刀菌枯萎病、巴拿马病、黄叶病，是由尖孢镰刀菌古巴专 化型（Fusarium oxyporum f.sp.Cubense，Foc)引起的破坏植株维管束而导致植株死亡的 一种毁灭性病害，目前，除地中海、印度洋、南太平洋一些岛屿国家外，几乎所有香蕉种植区 均有遭受该病害危害的报导。依据尖孢镰刀菌古巴专化型（Foc)对不同品种香蕉的侵染 特异性将其划分为4个生理小种（race):其中1号生理小种（Focl)侵染"大蜜哈" [Gros michel (AAA) ]、Silk (AAB)、Taiwan Latundan (AAB)、IC2 (AAAA)和粉蕉（ABB) ;2 号生理小种 (Foc2)只侵染杂种三倍体Bluggoe及ABB基因型的相关煮食蕉类；3号生理小种侵染野生 揭尾蕉属（Heliconia spp.)而不是香蕉类，因而被划分出Foc ;4号生理小种（Foc4)则侵 染所有的Cavendish类香蕉（AAA)及其他对1号与2号生理小种敏感的蕉类。基于Foc4是 否能在热带环境条件下对Cavendish类香蕉致病，又将Foc4进一步划分为"尖孢镰刀菌古 巴专化型热带4号生理小种"(TR4)与"尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种"(ST4)， 尖孢镰刀菌古巴专化型亚热带4号生理小种仅在亚热带条件下侵染Cavendish类香蕉。我 国广东、广西、福建、海南、云南和台湾等主要香蕉种植区也均已发现香蕉枯萎病，且香蕉枯 萎病的发病加重趋势明显。目前急需一套快速鉴定香蕉是否感染香蕉枯萎病菌的方法，为 生产安全健康香蕉种苗保驾护航。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是如何鉴定香蕉枯萎病菌中的尖孢镰刀菌古巴专化 型和/或尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明提供了鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的成套引物， 其名称为成套引物甲。
[0006] 本发明所提供的成套引物甲，由名称为A的PCR引物对和名称为B的PCR引物对 组成；
[0007] 所述A由序列表中SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2所示的两条单链DNA组成；所述 B由序列表中SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示的两条单链DNA组成。
[0008] 本发明所要解决的另一个技术问题是如何鉴定香蕉枯萎病菌中的尖孢镰刀菌古 巴专化型。
[0009] 为解决上述技术问题，本发明提供了鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的PCR引物 对。
[0010] 本发明所提供的鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的PCR引物对，为所述B。
[0011] 本发明所要解决的再一个技术问题是如何鉴定香蕉枯萎病菌中的尖孢镰刀菌古 巴专化型4号生理小种。
[0012] 为解决上述技术问题，本发明提供了鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的PCR引物 对。
[0013] 本发明所提供的鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的PCR引物对，为所述A。
[0014] 为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的系统。
[0015] 本发明所提供的鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的系统为下述Ll-Nn中的任一种：
[0016] L1、含有所述成套引物甲的系统；
[0017] Mm、含有所述B的系统；
[0018] Nn、含有所述A的系统。
[0019] 上述鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的系统，可包括通过PCR鉴定或辅助鉴定香蕉 枯萎病菌所需的试剂和仪器。具体来说，鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的系统可包括所述 成套引物甲、所述B或所述A以及PCR所需要的其它试剂和仪器。
[0020] 上述鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的系统还可仅包括所述成套引物甲、所述B或 所述A。
[0021] 所述成套引物甲中的各引物对以及PCR所需要的其它试剂均可独立包装。所述B 以及PCR所需要的其它试剂均可独立包装。所述A以及PCR所需要的其它试剂均可独立包 装。
[0022] PCR所需要的其它试剂可包括DNA聚合酶（DNA Polymerase)和/或10 XPCR buffer和/或dNTPs。PCR所需要的仪器可为PCR仪。
[0023] 为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的方法。
[0024] 本发明所提供的鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的方法，为下述LI)或L2):
[0025] LI)下述 L11)和 L12):
[0026] L11)以待测生物样品的核酸（DNA或RNA或以RNA为模板转录得到的cDNA)为模 板，用所述A进行PCR扩增得到PCR产物Al ;以所述待测生物样品的RNA或以RNA为模板 转录得到的cDNA为模板，用所述B进行PCR扩增得到PCR产物Bl ;
[0027] L12)检测L11)所述PCR产物Al和所述PCR产物Bl的大小，如果所述PCR产 物Bl中含有500bp-750bp的DNA片段（即699bp的DNA片段），所述PCR产物Al中含有 500bp-750bp的DNA片段（即699bp的DNA片段），所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀 菌古巴专化型4号生理小种；如果所述PCR产物Bl中含有500bp-750bp的DNA片段（即 699bp的DNA片段），所述PCR产物Al中不含500bp-750bp的DNA片段（即不含699bp的 DNA片段），所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型，所述尖孢镰刀菌古巴专 化型不为尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种；如果所述PCR产物Bl中不含500bp-750bp 的DNA片段（即不含699bp的DNA片段），所述待测样品不含或候选不含尖孢镰刀菌古巴专 化型；
[0028] L2)下述 L21)和 L22):
[0029] L21)以待测生物样品的核酸（DNA或RNA或以RNA为模板转录得到的cDNA)为模 板，用所述A进行PCR扩增得到PCR产物A2 ;以所述待测生物样品的DNA为模板，用所述B 进行PCR扩增得到PCR产物B2 ;
[0030] L22)检测L21)所述PCR产物A2和所述PCR产物B2的大小，如果所述PCR产 物B2中含有500bp-750bp的DNA片段（即730bp的DNA片段），所述PCR产物A2中含有 500bp-750bp的DNA片段（即699bp的DNA片段），所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀 菌古巴专化型4号生理小种；如果所述PCR产物B2中含有500bp-750bp的DNA片段（即 730bp的DNA片段），所述PCR产物A2中不含500bp-750bp的DNA片段（即不含699bp的 DNA片段），所述待测样品含有或候选含有尖孢镰刀菌古巴专化型，所述尖孢镰刀菌古巴专 化型不为尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种；如果所述PCR产物B2中不含500bp-750bp 的DNA片段（即不含730bp的DNA片段），所述待测样品不含或候选不含尖孢镰刀菌古巴专 化型。
[0031] 上述方法中，所述香蕉枯萎病菌可为尖孢镰刀菌古巴专化型和/或尖孢镰刀菌古 巴专化型4号生理小种。
[0032] 上述方法中，用所述B进行PCR扩增时的退火温度可为54°C。用所述A进行PCR 扩增时的退火温度可为56°C。
[0033] 为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的方法。
[0034] 本发明所提供的鉴定或辅助鉴定香蕉枯萎病菌的方法，为下述M或N :
[0035] M 下述 Ml)或 M2):
[0036] Ml)下述 Mil)和 M12):
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