作为孤儿核受体RORγ调节物的经甲酰胺或磺酰胺取代的噻唑及相关衍生物的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明提供作为孤儿核受体R0RY调节物的含有甲酰胺或磺酰胺的环状化合物 (优选地噻唑）及通过将这些新颖RORy调节物给药至有需要的人类或哺乳动物来治疗 R〇RY介导的慢性炎性及自体免疫疾病的方法。
【背景技术】
[0002] 类视色素受体相关孤儿受体由3个家族成员（即RORa(Beckerandre等人， Biochem.Biophys.Res.Commun. 1993, 194:1371)、ROR0(Andre等人，Gene1998,516:277) 及RORY(He等人，Immunityl998,9:797))组成且构成核受体超家族的NR1F(R0R/RZR)子 群（Mangelsdorf等人，Cell1995,83:835)。
[0003] 核受体超家族拥有由高变N-端结构域、保守DNA结合结构域（DBD)、铰链区及保 守配体结合结构域（LBD)组成的一般模块化构造结构域。DBD使受体靶向特异性DNA序列 (核激素反应组件或NREs)，且LBD在内源性或外源性化学配体的识别中发挥作用。组成性 转录活化结构域位于N-端（AF1)且受配体调控的转录活化结构域包埋于典型NRs的C-端 LBD内。核受体在结合其靶标NREs时可以转录活化或阻抑状态存在。基因活化的基本机制 涉及共调控蛋白（即共活化子（co-activator)及共阻抑子（co-repressor))的配体依赖 性交换（McKenna等人，EndocrineRev. 1999, 20:321)。处于阻抑状态的NR结合其DNA识 别组件并与招募组蛋白去乙酰酶（HDACs)的共阻抑蛋白缔合。在激动剂存在下，共阻抑子 与招募转录因子的共活化子发生交换，转录因子有助于染色质重塑复合物的组装，染色质 重塑复合物经由组蛋白乙酰化减轻转录阻抑并刺激转录启动。LBD的AF-2结构域充当配体 依赖性分子开关，其对共阻抑蛋白或共活化蛋白展示相互作用表面并对基因活化或阻抑提 供核受体超家族成员共有的保守机制。
[0004] 在不存在已知配体时，NR1F家族核受体成员（例如R0RY)被视为组成性活性转 录因子，此与雌激素相关受体ct类似（Vanacker等人，Mol.Endocrinol. 1999,13:764)。 最近，7-氧合的氧基固醇经识别为RORa及R〇RY的高亲和力配体（Wang等人，J.Biol. Chem. 2010, 285:5013)。7_羟基胆固醇为胆固醇向胆汁酸转化期间的关键代谢物，但迄今尚 不清楚其是否为R0R的真正内源性配体。在任一情形下，可预计R0RY反向激动剂会减小 R0RY转录活性并影响受R0RY控制的生物路径。
[0005] R0R表现为因差别剪接或可变转录起始位点而产生的异型体。迄今，已阐述仅 N-端结构域（A/B-结构域）不同的异型体。在人类中，已识别四种不同RORa异型体 (R0Ra1至4)，而对于R0R0 (1及2)及R0Ry(1及2)二者均仅获知两种异型体（Andre等 人，Gene1998, 216:277;Villey等人，Eur.J.Immunol. 1999, 29:4072)。RORy在本文中用 作阐述R〇RY1及/或R〇RY2 (亦称为R0Ryt)二者的术语。
[0006] R0R异型体显示不同的组织表现型式且调控不同的靶标基因及生理路径。举例 而言，R0RYt高度局限于⑶4+CD8+胸腺细胞及产生介白素-17(IL-17)的T细胞，而其 他组织表现R〇Ryl(Eberl等人，Science2004,305:248;Zhou及Littmann，Cur;r.Opin.Immunol. 2009, 21:146)。
[0007]RORs展示核受体的典型结构架构。RORs含有四个主要功能结构域：胺基端 (A/B)结构域、DNA结合结构域、铰链结构域及配体结合结构域（Evans等人，Science 1988,240:889)。DBD由参与R0R反应组件（ROREs)识别的两个高度保守锌指基序（zinc fingermotif)组成，R0RE由以富含AT的序列为首的共有基序AGGTCA组成（Andre等 人，GeneI"8, 2比：277)，此与核受体Rev-ErbAa及Rev-ErbP(分别为NR1D1 及D2) 类似（Giguere等人，Genomics1995,28:596)。这些识别组件亦显示与那些经雌激素 相关受体识别者且具体而言ERRa(ERRs、NR3B1、NR3B2、NR3B3) (Vanacker等人，Mol. Endocrinol. 1999, 13:764)、类固醇生成因子 1 (SF-1、NR5A)及NGFI-B(NR4A1、NR4A2、 NR4A3)(Wilson等人，Mol.Cell.Biol. 1993, 13:5794)的高相似性。
[0008]R0Ra高度表现于不同脑区域中且在小脑及丘脑中最高。R〇Ra敲除小鼠显示运 动失调伴严重小脑萎缩，此与在所谓的蹒跚病突变小鼠（R〇Rasg/sg)中所展示的症状高度 类似。此小鼠的R〇Ra携带突变，进而产生不含LBD的截短RORa(Hamilton等人，Nature 1996, 379:736)。
[0009]RORasg/sg蹒跚病小鼠的分析已揭示除CNS缺陷以外亦对脂质代谢具有强烈影响， 即血清及肝脏三酸甘油酯显著减少、血清HDL胆固醇浓度降低及肥胖减轻。蹒跚病小鼠肝 脏中的SREBPlc及胆固醇转运蛋白ABCA1与ABCG1减少且CHIP分析表明RORa被直接招 募至SREBPlc启动子并对其进行调控。另外，发现诸如肝脏或白色及褐色脂肪组织等组织 中的PGC1a、PGC1 0、lipinl及0 2-肾上腺素受体增加，此可有助于解释在蹒跚病小鼠中 所观察到的对饮食诱导的肥胖症的抗性（Lau等人，J.Biol.Chem. 2008, 283:18411)。
[0010] ROR0表现主要局限于脑且最多见于视网膜中。ROR0敲除小鼠展示鸭子般的步 态及导致失明的视网膜变性（Andre等人，EMB0J. 1998, 17:3867)。对此视网膜变性背后的 分子机制仍缺乏了解。
[0011] R0RY(尤其RORYt)无效突变小鼠缺乏淋巴结及培氏斑（Peyer'spatch)(Eberl 及Littmann，Immunol.Rev. 2003, 195:81)且脾肠为膜及肠中完全不存在淋巴组织诱导物 (LTi)细胞。另外，RORy无效小鼠的胸腺大小及胸腺细胞数量因双阳性CD4+CD8+及单阳性 ⑶4XD8+或⑶4 +⑶8_细胞减少而极大地减少，此表明R0Ryt在胸腺细胞发育中发挥极重要 作用（Sun等人，Science2000,288:2369)。
[0012] 胸腺细胞发育遵循复杂程序，该程序涉及由细胞种群专用微环境的细胞种群中的 增殖、分化、细胞死亡及基因重组的协调循环。自胎儿肝脏或成人骨髓迁移至胸腺的多潜能 淋巴细胞祖细胞（lymphocyteprogenitor)发育成T细胞谱为。其发育历经自⑶4TDK双 阴性细胞至CD4+CD8+细胞的一为列步骤且通过阴性选择来消除那些对自身MHC-肽具有低 亲和力者。这些细胞进一步发育成⑶4TD8+(杀手细胞（killer))或⑶4+⑶81辅助细胞 (helper))T细胞谱为。R0Ryt不表现于双阴性胸腺细胞中且几乎不表现于未成熟单阴性 胸腺细胞中（He等人，J.Immunol. 2000, 164:5668)，而在双阳性胸腺细胞中高度向上调控 且在单阳性胸腺细胞分化期间向下调控。R0RY缺失导致CD4+CD8+细胞凋亡增加及末梢血 液胸腺细胞的数量减少至1/6 (CD4+减少至1/10且CD8 +胸腺细胞减少至1/3)。
[0013]在卵白蛋（0VA)诱导的发炎的小鼠模型（作为过敏性呼吸道疾病模型）中 的最近实验证实，在用OVA激发后严重损害RORyKO小鼠过敏性表型的发展并且减少 ⑶4+细胞数量并降低肺中Th2细胞介素/趋化因子蛋白及mRNA表现（Tilley等人， J.Immunol. 2007, 178:3208)。在用OVA抗原重新刺激后，脾细胞中IFN-y及IL-10产量与 wt脾细胞相比有所增加，此表明向Thl型免疫反应转移为以Th2型反应减少为代价。此表 明利用配体向下调节RORY转录活性可达成免疫反应向Thl型反应的类似转移，从而可有 益于治疗某些肺部疾病，如气喘、慢性阻塞性肺部疾病（C0PD)或过敏性炎性病况。
[0014]T-辅助细胞先前被视为由Thl细胞及Th2细胞组成。然而，一种新颖Th细胞种 类产生IL-17的Thl7细胞亦经识别为独特T细胞种类，其被视为具有促发炎性。认为这 些细胞为自体免疫及炎性疾病的关键参与者，因为IL-17表现与诸如类风湿性关节炎、全 身性红斑狼疮（SLE)及同种异体移植排斥等许多炎性疾病相关（Tesmer等人，Immunol. Rev.2008, 223:87)。
[0015] R0RYt仅表现于免疫系统细胞中且经识别为Th17细胞分化的主要调控物。 R〇RYt的表现由TGF- 0或IL-6诱导且R0Ryt过表现导致Thl7细胞谱为及IL-17表现增 力口。R0RYtK0小鼠显示肠固有层中Thl7细胞极少且证实对激发的反应减弱通常会引起自 体免疫疾病（Ivanov等人，Cell2006,126:1121)。
[0016] 在IL-17深度参与的异位性皮炎及牛皮癣中经由抑制Thl7细胞发育来抑制IL-17 产生亦可能为有利的。令人感兴趣的是，最近的证据展示IL-10抑制由巨噬细胞及T细 胞二者分泌的IL-17的表现。另外，其抑制Thl7转录因子RORyt的表现（Gu等人，Eur. J.Immunol. 2008, 38:1807)。此外，缺乏IL-10的小鼠为时常观察到向Thl型炎性反应转移 的炎性肠疾病（IBD)提供良好模型。经口递送IL-10展示IBD可能的治疗选项。
[0017]产生IL-17的Thl7细胞的促发炎作用被另一T-辅助细胞类型（所谓的调控T细 胞或Tregs)抵消。天然T细胞在受到TGF0刺激时分化成Tregs。进而向上调控转录调节 物FoxP3,产生CD4+FoxP3+Tregs。倘若IL-6共同刺激天然T细胞，则抑制FoxP3表现并诱导 R0RYt表现。然后，这些⑶4+FoxP3_R0Ryt+T-辅助细胞分化成产生IL-17的Thl7细胞（综 述于Awasthi及Kuchroo,Int.Immunol. 2009, 21:489 以及ZhouandLittmann,Curr.Opin. Immunol. 2009,21:146中）。若干证据表明这些Thl7细胞负责大量自体免疫疾病（例如多 发性硬化症、类风湿性关节炎、关节黏连性脊椎炎、牛皮癣、克隆氏症（Crohn'sdisease)及 其他类型炎性肠疾病、红斑狼疮及气喘）的病因学。疾病的严重程度似乎与IL_17+Thl7细 胞的存在相关且据信通过小分子反向激动剂或拮抗剂阻止R〇RYt将减少这些IL-17+Thl7 细胞，最终减轻疾病症状及结果（Crome等人，Clin.Exp.Immunol. 2010, 159:109)。
[0018] 人们认为Thl及Thl7亚型效应子⑶4+T细胞在人类及实验新月形肾丝球肾炎的 发病机制中发挥重要作用（Paust等人，KidneyInt. 2012,doi: 10. 1038/ki. 2012. 101)。 因此，IL-17调节物可有益于治疗急性肾丝球肾炎（Velden等人，Am.J.Physiol.Renal Physiol. 2012,inpress;Hopfer等人，KidneyInt. 2012,doi: 10. 1038/ki. 2012. 73)。
[0019] RORs配体：
[0020] 据报导，胆固醇及其硫酸化衍生物可充当RORci配体，且具体而言，胆固 醇-硫酸盐可恢复RORct在缺乏胆固醇的细胞中的转录活性（Kallen等人，Structure 2002, 10:1697)。先前有人提议用褪黑激素（melatonin)(Missbach等人，J.Biol. Chem. 1998, 271:13515)及噻唑陡二酮结合R0Ra(Wiesenberg等人，NucleicAcid Res. 1995, 23:327)。然而，已显示这些物质均非RORa或任一其他ROR的功能配体。已证 实某些类视色素（包括全反式视黄酸）结合ROR0并充当ROR0而非RORa的部分拮抗剂 (Stehlin-Gaon等人，Nat.Struct.Biol. 2003, 10:820)。
[0021] 最近，7-氧合固醇（例如7-羟基-胆固醇及7-酮基-胆固醇）在活体外分 析中经识别为R0RY活性的高效调节物（Wang等人，J.Biol.Chem. 2010, 285:5013)。同 组研究者亦发现，已知LXR激动剂T0901317([N-(2,2,2-三氟乙基）-N-[4-[2,2,2-三 氟-1-羟基-1-(三氟-甲基）乙基]苯基]-苯磺酰胺])以次微莫耳效价充当R0RY反 向激动剂（Kumar等人，Mol.Pharmacol. 2010, 77:228)。然而，在该两种情形下均未获得 证实对这些调节R0RY的化合物的有益影响的活体内数据。在7-氧基固醇情形下，其内 源性存在作为其身体自然产生的代谢物以及其快速转变及其对许多细胞蛋白的生物活性 阻碍推断R0RY作用的有意义的动物研究。在T0901317情形下，其作用于至少6种不同 的核受体（LXRa/ 0、FXR、PXR、RORa/Y )的多重药效性质阻碍其在自体免疫疾病应用中 用作研发候选药物（Houck等人，Mol.Genet.Metab. 2004, 83:184;Xue等人，Bioorg.Med. Chem. 2007, 15:2