pVAX-PTX3真核表达载体、构建方法及所表达的PTX3蛋白对猪链球菌2型的抗菌应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于猪链球菌病防控研宄技术领域，涉及PVAX-PTX3真核表达载体、构建 方法及所表达的PTX3蛋白对猪链球菌2型的抗菌应用。
【背景技术】
[0002] Pentraxins是一个具有多功能的蛋白质家族，包括短pentraxins蛋白和长 pentraxins蛋白。PTX3蛋白是第一个被确认的长正五聚蛋白[1'2]，与经典的短正五聚蛋 白-C反应蛋白和血清淀粉样蛋白p复合物同属于可溶性识别受体（PRMs) [3'4]。PTX3主要 来源于髓样树突状细胞，但还有多种细胞可表达PTX3,包括成纤维细胞、血管内皮细胞、单 核细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞、肾上皮细胞、滑膜细胞、软骨细胞、脂肪细胞和肺泡上皮细 胞等。
[0003] PTX3最先被研宄的功能是其可以绑定在某些病原体上，研宄还发现PTX3还可以 识别分生孢子A烟曲霉、某些革兰氏阳性和革兰阴性细菌（如金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞 菌，肺炎克雷伯氏菌，鼠伤寒沙门氏菌）和一些病毒株^，但PTX3不能识别白色念珠菌或 伯克氏菌。有研宄发现，PTX3还具有调理素活性，通过Fcy受体II(Fcyrii)和补体依赖 途径可提高中性粒细胞识别和吞噬分生孢子。并且通过与Fc γ RIIA/⑶32的结合，PTX3可 激活⑶Ilb和增强细胞对烟曲霉分生孢子的吞噬能力。ΡΤΧ3也可参与抵抗一些病毒感染的 过程，研宄表明ΡΤΧ3可分别与人类和小鼠巨细胞病毒（HCMV和MCMV)结合，从而减少在体 外环境下病毒对树突状细胞的感染。因此，ΡΤΧ3+小鼠对病毒的感染比野生型小鼠出现较 高的敏感性，并且用重组的ΡΤΧ3治疗可降低病毒的滴度。此外，ΡΤΧ3可保护感染MCMV (小 鼠巨细胞病毒）的小鼠不受烟曲霉菌的入侵，并分别提高了树突状细胞和T细胞中IL-12 和IFN-γ的产生。
[0004] 猪链球菌（Streptococcus suis，SS)是一种革兰氏阳性菌，依据荚膜多糖抗原的 不同，可分为35个血清型（1?34型和1/2型）[8' 9]，其中猪链球菌2型（Str印tococcus suis 2, SS2)流行区域最广，感染宿主谱最宽，毒力最强，是一种重要的人畜共患病病原[1°' 11]。猪链球菌不仅导致、致猪发病出现败血症、肺炎、关节炎、脑膜炎、肺炎、心内膜炎等症 状，还会引起断奶仔猪或育肥猪的突然死亡 [12'13]。猪链球菌病的爆发频繁，给养猪业带来 了巨大损失，已经成为一种严重影响养猪业发展的重要病原菌之一 [14]。但是至今，我们对 于猪链球菌的致病机理还不十分清楚，目前对猪链球菌2型的致病机理和毒力因子的研宄 还不是十分透彻，所以对猪链球菌2型仍缺乏行之有效的防治方法。
[0005] [1]· Breviario，R，et al.，Interleukin-l-inducible genes in endothelial cells.Cloning of a new gene related to C-reactive protein and serum amyloid P component. [J]· Biol Chem，1992. 267 (31) :p. 22190-7.
[0006] [2] · Lee，G. W.，T. H. Lee and J. Vilcek，TSG-14, a tumor necrosis factor-and IL-l-inducible protein，is a novel member of the pentaxin family of acute phase proteins. [J]· Immunol，1993. 150(5) :ρ· 1804-12.
[0007] [3].Pepys? Μ. B. and G. M. Hirschfield? C-reactive protein ：a critical update. [J].Clin Invest? 2003. Ill (12) ：p. 1805-12.
[0008] [4] · Garlanda，C.，etal.，Pentraxins at the crossroads between innate immunity，inflammation，matrix deposition，and female fertility. [J] · Annu Rev Immunol，2005. 23 :p. 337-66.
[0009] [5] · Bozza，S.，et al. ? Pentraxin 3protects from MCMV infection and reactivation through TLR sensing pathways leading to IRF3activation. [J]. Blood? 2006. 108(10) ：p. 3387-96.
[0010] [6]. Diniz ? S. N. ? et al. ? PTX3funct ion as a opsonin for the dectin-l-dependent internalization of zymosan by macrophages. [J]. Leukoc Biol， 2004. 75(4) ：p. 649-56.
[0011] [7] · Jeannin，P.，et al.，Complexity and complementarity of outer membrane protein A recognition by cellular and humoral innate immunity receptors. [J]. Immunity，2005. 22 (5) :p. 551-60.
[0012] [8]. Windsor? R. S. and S. D. Elliott? Streptococcal infection in young pigs. IV. An outbreak of streptococcal meningitis in weaned pigs. [J]. J Hyg(Lond)， 1975. 75(1) ：p. 69-78.
[0013] [9]· Staats，J. J.，et al.，Streptococcus suis ：past and present. [J]. Vet Res Commun，1997. 21 (6) :p. 381-407.
[0014] [10]·Higgins，R. and M. Gottschalk，Distribution of Streptococcus suis capsular types in 2000. [J].Can Vet J? 2001. 42 (3) ：p. 223.
[0015] [11]. Hynes? W. L. and S.L. Walton? Hyaluronidases of Gram-positive bacteria. [J].FEMS Microbiol Lett? 2000. 183(2) ：p. 201-7.
[0016] [12]. Sihvonen?L. ?D. N. Kurl and J. Henrichsen，Streptococcus suis isolated from pigs in Finland. [J]· Acta Vet Scand，1988. 29(1) :p. 9-13.
[0017] [13]. Sanford? S.E.and Μ. E. Tilker? Streptococcus suis type Il-associated diseases in swine observations of a one-year study. [J]. J Am Vet Med Assoc， 1982. 181 (7) ：p. 673-6.
[0018] [14]. Chengappa?M. M. ?et al. ,Efficacy of tiamulin against experimentally induced Streptococcus suis type-2infection in swine. [J]. J Am Vet Med Assoc， 1990. 197(11) ：p. 1467-70.
【发明内容】
[0019] 本发明的目的是解决现有技术中对猪链球菌2型缺乏行之有效的防治方法，养猪 产业受到严重影响等问题，依靠对猪源PTX3功能研究的现有成果，试验发现PTX3蛋白对猪 链球菌2型具有一定的抗菌作用，可作为适应临床猪链球菌病的预防和治疗的新方法。
[0020] 本发明的目的通过以下技术方案实现
[0021] 1.本发明提供一种重组真核表达载体PVAX-PTX3,该重组表达载体中包括PTX3蛋 白基因 ptx3,其序列如SEQID NO. 1所示。
[0022] 2.本发明还提供重组真核表达载体pVAX-PTX3对猪链球菌2型的抗菌应用，该应 用通过将PVAX-PTX3注射进入动物体内，在组织内pVAX-PTX3稳定表达PT