一种珍珠蛋白的制备方法及该方法制备得到的水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白的利记博彩app
【技术领域】
[0001]本发明涉及珍珠提取物生产领域，尤其涉及一种珍珠蛋白的制备方法及该方法制备得到的水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白。
【背景技术】
[0002]目前，珍珠粉的应用过程中，曾相继遇到颗粒大小安全隐患、流动性差、不溶水以及功效成分难以释放等诸多问题，这些直接影响珍珠粉的应用领域。为能解决以上问题，业内已经向水溶性珍珠粉以及珍珠水解液发展，然而，在此过程中，我们只是简单的进行原有成分的复配或者粗放型的水解，未能研究其中各个成分的功效，很少进行精细分离纯化。
[0003]目前的珍珠提取物一般均是采用酶解的方式进行生产，如中国发明专利(申请号:01139157.X申请日:2001-12-19)公开了一种珍珠粉的生物酶解制备方法，其关键是以乳酸水溶液为溶剂，将珍珠溶解，并调整溶液的PH值至近中性再用酸回调至偏酸性，再放入适量生物活性酶催化分解其蛋白质，得到酶解珍珠胶液，再采用喷雾干燥将酶解珍珠胶液快速干燥，固化造粒，制得超细酶解珍珠粉。所制备的珍珠粉保留了珍珠中的多种氨基酸、微量元素等有效成份，并使珍珠中的碳酸钙转化为人体易吸收的活性钙，胃酸不溶解的角质蛋白酶解成易吸收的游离氨基酸。
[0004]中国发明专利(申请号:200710141569.Χ申请日:2007-08-07)公开了一种制备珍珠活性肽的方法，它从新活的珍珠贝里取出珍珠粒，水洗干净，将珍珠粒与去离子水混合后，用磷酸盐缓冲溶液将混合液的PH值调至中性偏酸，然后用沙雷肽酶与珍珠粒进行酶水解反应；用滤网过滤分离得珍珠粒和澄清液，然后将反应液水煮灭酶；再将所得的溶液经喷雾干燥即得珍珠活性肽。
[0005]中国发明专利(申请号:200910114409.5申请日:2009-09-18)公开了珍珠水解液的制备方法，其步骤如下:1)取珍珠粉置于盐酸水溶液中，搅拌，直至反应完全，用氨水调节该混合液的PH值至中性，离心，得沉淀A ;2)沉淀A用纯净水溶解，再以氨水调节其pH值为7.5?8.5，离心，得沉淀B ；3)沉淀B用纯净水溶解，加入酶进行酶解，酶解液离心，得上清液和沉淀C ;所述的酶为蜗牛蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物，加入量为沉淀B重量的
0.3?1.05% ；4)将沉淀C用纯净水溶解加酶进行二次酶解，离心，收集上清液；酶为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的混合物，加入量为沉淀B重量的0.2?0.45%；5)合并两次上清液，煮沸，用孔径为I?3nm的纳滤膜过滤，即得。
[0006]上述的方法采用了酶解的方法可以获得低分子量的氨基酸和多肽，但同时酶解也会破坏一些有活性的蛋白物质，造成活性物质的流失。
[0007]中国发明专利申请(申请号201410055730.1，申请日2014.02.19)公开了一种纳米珍珠蛋白的制备方法，是将珍珠粉碎制成平均粒径为I?4微米的珍珠微粉，酸解，过滤，滤渣用净化水洗涤干净即为粗珍珠蛋白，在粗珍珠蛋白中加入分散剂进行研磨，期间超声震荡；研磨后的液体用膜后浓缩，然后加热杀菌保存得到纳米珍珠蛋白。该方法加入分散剂物质，在后续的处理工艺中很难去除，限制了产品的应用。
【发明内容】
[0008]为了解决上述的技术问题，本发明的目的是提供一种珍珠蛋白的制备方法，本该方法利用纳米级珍珠粉，进行水解和酸解然后进行脱盐，分别获得水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白，为珍珠护肤品和保健品提供原料。
[0009]为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案:
一种珍珠蛋白的制备方法，该方法包括以下的步骤:
1)将珍珠研磨成纳米级珍珠粉；
2)用去离子水浴纳米珍珠粉超高压均质，40?80°C下均质0.2?lh，低温0~8°C离心获取水溶性珍珠提取物a和沉淀，并将沉淀用乙醇溶液清洗上边，随后进行下一步操作；
3)以上获得的沉淀用弱酸在30?50°C温度下溶解，低速搅拌80-120rpm下反应0.5?3h ;低温0~8°C离心取上清液，为酸溶性珍珠提取物b ；
4)将水溶性珍珠提取物a和酸溶性珍珠提取物b分别进行脱盐；
5)脱盐之后将水溶性珍珠提取物a和酸溶性珍珠提取物b冻干，分别获得水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白。
[0010]作为优选，所述的纳米级珍珠粉的粒度为10~100nm。
[0011]作为优选，所述的弱酸采用食用醋酸、柠檬酸或碳酸。
[0012]作为优选，所述的脱盐采用透析脱盐:2~10°C环境下用3000~5000Da分子量的透析袋透析3~5天除盐,I体积的样品对应10~20体积的蒸懼水,每天换水1~2次。
[0013]作为优选，所述的脱盐采用层析脱盐:用葡聚糖凝胶G-15装柱，首次脱盐加样后即开始收集，每1~2分钟收集一次，收集多份样品，分别加入少量硫酸铵，检测是否有沉淀，验证从第几份样品开始有盐析出，收集这个时间点之前的溶液即为脱盐之后的蛋白溶液。
[0014]本发明所述的方法制备的水溶性珍珠蛋白，该水溶性珍珠蛋白的主要分子量分布为小于15kd。本发明的“主要”表示该蛋白中90%以上的物质。
[0015]本发明所述的方法制备的酸溶性珍珠蛋白，该酸溶性珍珠蛋白的主要分子量分布为14kd~50kd。本发明的“主要”表示该蛋白中90%以上的物质。
[0016]本发明由于采用上述的技术方案，利用纳米级珍珠粉，进行水解和酸解然后进行脱盐，分别获得水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白，为珍珠护肤品和保健品提供原料。其中，酸溶性珍珠蛋白抗氧化能力强，并能促进成纤维细胞的生长，同时有利于胶原蛋白的分泌，有利于伤口的愈合，在化妆品修护领域具有强劲的潜力。而珍珠水溶性珍珠蛋白可以在美白、补水等方面获得良好的效果。
【附图说明】
[0017]图1为酸溶性珍珠蛋白的分子量分布图。
[0018]图2为水溶性珍珠蛋白的分子量分布图。
[0019]图3为不同珍珠蛋白对成纤维细胞生长的影响图。
[0020]图4为不同珍珠蛋白对DPPH自由基清除率的影响图。
[0021 ] 图5为酸溶性珍珠蛋白对成纤维细胞分泌胶原蛋白的影响图。
【具体实施方式】
[0022]实施例1
一种珍珠蛋白的制备方法，该方法包括以下的步骤:
1)将珍珠研磨成纳米级珍珠粉(10?10nm)；
2)用10倍质量的去离子水浴纳米珍珠粉超高压均质，60°C下均质0.5h。低温4°C离心获取水溶性珍珠提取物a和沉淀。并将沉淀用乙醇溶液清洗3遍，随后进行下一步操作；
3)以上获得的沉淀用弱酸中温真空下(40°C，101325~1333pa)溶解，低速搅拌(10rpm)下反应2h ;低温4°C离心取上清液，为酸溶性珍珠提取物b ；
4)珍珠提取物a和b可用以下两种方法可以脱盐
①透析脱盐:4?7°C环境下用3500Da分子量的透析袋透析4天除盐，I体积的样品对应10?15体积的蒸馏水，每天换水I次
或②层析脱盐:用葡聚糖凝胶G-15装柱，首次脱盐加样后即开始收集，每I分钟收集一次，收集15