一种从罗汉果中提取罗汉果苷v的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物成分的提取方法，尤其涉及从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法，其可连续高效的提取罗汉果苷V。
【背景技术】
[0002]罗汉果做为我国的特有植物，因地域上的优势，为罗汉果各方面的研宄提供了便利，对其研宄除罗汉果的复配之外，主要集中在罗汉果甜苷V的提取纯化工艺方面。CN101863946A公开了一种干罗汉果中提取高含量罗汉果甜甙V的方法，该方法是将罗汉果干果破碎后醇提、浓缩、大孔树脂吸附分离、离子交换树脂脱色，经浓缩干燥得产品，该方法过程简单，适应工厂生产，但产品纯度低，树脂利用率低。CN101690573A公开了一种罗汉果苷V含量大于60%罗汉果提取物生产方法，该方法是将罗汉果破碎后酶解、水提、浓缩、离子交换树脂脱色、大孔树脂吸附分离以及氧化铝层析，最后经浓缩干燥得产品，该方法可实现产品甜苷V纯度大于60%，因经多步层析，使得最终产品的收率较低。CN10140266A公开了罗汉果苷V的制备方法，该方法是以罗汉果粗提物为原料，经硅胶层析、C18柱反相层析、浓缩干燥得产品，产品纯度可达70%以上，该方法的主要缺陷为过程中使用大量的有机溶剂，产品收率低，成本高，不适于工业生产。CN101177444A公开了一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，该方法是将罗汉果鲜果破碎、酶解、多级逆流提取、离心、超滤、浓缩、大孔树脂吸附分离、离子交换树脂脱色、C18反相硅胶层析，经浓缩干燥，制得产品，该方法的缺陷为产品收率低、产品纯度低、工艺复杂，不利于工业生产。CN104086615A公开了一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法，该方法是将罗汉果破碎后高压处理、超临界流体萃取、经HP-20SS树脂层析、浓缩、干燥得产品，产品中甜苷V纯度70%以上，该方法工艺简单、纯度高，但由于超临界流体萃取设备一次处理量的限制，不利于连续的规模生产。鉴于此，有必要改进现有技术。
【发明内容】
[0003]本发明提出一种从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法，该方法有机结合了多种提纯方式，实现连续高效的提取罗汉果苷V。
[0004]本发明的技术方案是这样实现的:
一种从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法，其特征在于包括以下步骤:
原料前处理:将罗汉果洗净、破碎；
微波逆流提取:对前处理后的罗汉果进行微波逆流提取，提取溶剂为去离子水，物料与水的流动为逆向连续动态流动，同时对渣进行挤压，挤出残留液与料液混合，经过滤得提取液；
多级过滤:提取液先后经卧式螺旋离心、管式离心、第一超滤以及第二超滤后得滤液，其中，所述卧式螺旋离心的转速为2500?5000r/min，管式离心的转速为12000?16000r/min，第一超滤是经过截留分子量为30k?50kDa的超滤膜，第二超滤是经过截留分子量为4k?6kDa的超滤膜；
大孔树脂吸附分离:调节滤液的Ph值，常温上大孔树脂柱进行吸附，上柱流速为0.5?1.5 BV/h，上柱完成后静置I?2h ;用相当于树脂总体积6?8倍去离子水常温下进行洗脱，洗脱流速为2?3BV/h，然后使用亲水溶剂对大孔树脂柱进行洗脱，洗脱流速为I?2BV/h,收集洗脱液；
多级过滤:将洗脱液使用纳滤膜进行纳滤处理，然后真空浓缩至百利度30?35为止，得浓缩液；
干燥:将浓缩液进行干燥后，得罗汉果甜苷V。
[0005]在本发明的这种从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法中，微波逆流处理的提取时提取温度为70?90 °C，提取时间为50?70 min,微波功率为600?800W，频率6000?8000MHz ο
[0006]在本发明的这种从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法中，滤液Ph为8?9。
[0007]在本发明的这种从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法中，调节滤液Ph的试剂为氢氧化钠或碳酸钠。
[0008]在本发明的这种从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法中，所述的大孔树脂为D-101、AB-8或HPD-100，树脂柱的径高比为1:6。
[0009]在本发明的这种从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法中，所述的亲水溶剂为体积分数为60?80%乙醇溶液，亲水溶剂的用量为2?3 BV。
[0010]在本发明的这种从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法中，所述纳滤的截留分子量为150 ?300Dao
[0011]在本发明的这种从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法中，所述的真空浓缩的浓缩温度为70?80°C，真空度为-0.08Mpa?-0.04Mpa。
[0012]在本发明的这种从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法中，干燥处理的方式为喷雾干燥。
[0013]实施发明的这种从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法，具有以下有益效果:本发明综合了多种提取方式的优点，完成了连续高效率的提取罗汉果苷V。按照本发明方法所得到的产品，经高效液相色谱法检测，罗汉果甜苷V63?65%，罗汉果甜苷V最终收率70?74%。除乙醇外，本方法未使用其他的对人体有害的有机溶剂溶剂，对环境环保，产品中乙醇残留在1ppm以下，产品安全，品质高。
[0014]微波逆流提取代替传统的热回流提取，一方面实现了提取的连续性，提高了生产规模，另一方面保证收率的同时，减少了提取时间与溶剂的使用，提取时间减为原来的1/5，溶剂使用量为原来的50%以下。
[0015]多级过滤方式进一步去除了料液中的颗粒与大分子杂质，纯化了料液。过程中使用了离心与超滤结合的方式过滤，首先采用中低速的卧式螺旋离心，去除了料液中大颗粒的悬浮颗粒，然后再使用高速的管式离心，去除了料液中细小的固体颗粒，接着依次经过截留分子量分别为30k?50kDa、4k?6kDa的超滤膜，去除了大部分的糖类、蛋白质、親质等大分子物质，由于逐级过滤方式搭配合理，保证了过滤的连续性同时，去除了料液中的部分杂质，使得后续树脂的利用率更高，有利于活性物质的富集。
[0016]碱性上柱将上柱的液的PH调为8?9，使得料液中的绝大部分色素物质、黄酮等酸性物质以离子形式存在，在上柱过程中不被大孔树脂吸附而随上柱流出液流出，进一步纯化了目标成分，同时也提高了树脂对活性成分的吸附量，提高了树脂的利用效率。
[0017]纳滤主要是脱去大量的溶剂，如乙醇、水、无机盐等，达到一定的浓缩目的，在采用纳滤方式进行纯化的同时，也一定程度减少后续浓缩的能耗，降低了生产成本。
【附图说明】
[0018]图1为本发明的从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法的示意图。
【具体实施方式】
[0019]下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
[0020]如图1所示，本发明的这种从罗汉果中提取罗汉果苷V的方法包括:原料前处理，微波逆流处理，多级过滤处理，大孔树脂吸附处理，纳滤、浓缩处理，干燥处理，具体如下所述。
[0021]S1:将罗汉果鲜果除杂，洗净，适当破碎，以不打碎罗汉果果好为Jl。
[0022]S2:微波逆流提取使用微波逆流提取装置对破碎后的罗汉果进行提取，提取时提取温度为70?90 °C，提取时间为50?70 min,微波功率为600?800W，频率6000?8000MHz?提取溶剂为去离子水，正向进料，反相进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动，滤渣经螺旋输送器强制推送至出渣口，出渣螺旋同时对渣进行挤压，残渣排出，残留液挤出并与料液混合，经过滤得提取液。
[0023]S3:将S2所得提取液进行离心，首先是经过卧式螺旋离心，转速为2500?5000r/min，然后经管式离心，转速为12000?16000r/min。离心后进行超滤，经过截留分子量为30k?50kDa超滤膜，然后是经过截留分子量为4k?6kDa，均为中空纤维膜，最后得滤液。
[0024]S4:调节S3中所得滤液Ph至8?9后，常温上大孔树脂柱进行吸附，上柱流速为0.5?1.5 BV/h,上柱完成后静置I?2h。用相当于树脂总体积6?8倍去离子水常温下进行洗脱，洗脱流速为2?3BV/h，然后使用亲水溶剂对大孔树脂柱进行洗脱，洗脱流速为I?
2BV/h，收集洗脱液。调节滤液Ph的试剂为氢氧化钠或碳酸。所述的大孔树脂为D-101、AB-8或HPD-100，树脂柱的径高比为1:6。其中，D_101、AB_8生产厂家为上海南开树脂有限公司，DM130生产厂家为安徽三星树脂科技有限公司。所述的亲水溶剂为体积分数为60?80%乙醇溶液，亲水溶剂的用量为2?3 BV。
[0025]S5:将S4中所得洗脱液使用纳滤膜进行纳滤处理，截留分子量为150?300Da。然后真空浓缩至百利度30?35为止，浓缩温度为70?80°C，真空度为-0.08Mpa?-0.04Mpa，最后得浓缩液。
[0026]S6:将S5中所得浓缩液进行喷雾干燥后，罗汉果甜苷V的产品。
[0027]为更为清楚的了解本发明，以下提供五个实施例。
[0028]实施例1
Si原料前处理:取1000 kg罗汉果鲜果除杂，洗净，适当破碎，以不打碎罗汉果果籽为宜；
s2微波逆流提取:使用微波逆流提取装置对破碎后的罗汉果进行提取，提取溶剂为去离子水，正向进料，反相进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动，提取温度为90°C，提取时间为70 min,微波功率为800w，频率为6000MHz，滤渣经螺旋输送器强制推送至出渣口，出渣螺旋同时对渣进行挤压，残渣排出，残留液挤出并与料液混合，经过滤得提取液；
s3多级过滤:将步骤s2中所得提取液使用卧式螺旋离心机进行离心，离心转速为5000 r/min，然后过管式离心机，离心转速为14000 r/min，所得离心液依次过截留分子量为50kDa、6kDa中空纤维超滤膜，得滤液；
s4大孔树脂吸附分离:使用氢氧化钠调节步骤s3中所得滤液Ph至8.98后，常温上D-101树脂柱进行吸附，树脂柱径高比为1:6，上柱流速为0.5BV/h，上柱完成后静置2h ;用相当于树脂总体积8倍去离子水常温下进行洗脱，洗脱流速为2BV/h，然后使用3BV的80%乙醇对大孔树脂柱进行洗脱，洗脱流速为lBV/h，收集洗脱液；
s5纳滤、浓缩:将步骤s4中所得洗脱液使用300Da纳滤膜进行纳滤处理，然后在温度为80°C，真空度为-0.08Mpa?-0.04Mpa的条件下，真空浓缩至百利度35为止，得浓缩液；s6干燥:将步骤s5中所得浓缩液进行喷雾干燥，得罗汉果甜苷V的产品，称重6.422
kg ο
[0029]经液相色谱仪检测的结果:罗汉