一种注射用蛋黄磷脂酰胆碱的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于制药工程技术领域，具体地说，涉及一种注射用蛋黄磷脂酰胆碱的制 备方法。
【背景技术】
[0002] 磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine简称PC)又称为卵磷脂，结构上是由胆碱与磷 脂酸两部分组成的一类磷脂化合物。磷脂酰胆碱是生物体的重要组分，作为天然的乳化剂 及营养补充剂，在食品、化工、医药中应用广泛。在药品领域中主要用作增溶剂、乳化剂、油 脂类的抗氧化剂等，是新型靶向制剂如脂质体和脂微球等制剂的重要辅料。临床上，磷脂酰 胆碱可作为低水溶性药物的载体，能提高药物的生物利用度，降低药物毒性。注射用磷脂酰 胆碱作为新型脂质体、脂微球制剂的关键辅料，其质量标准包括产品的纯度、杂质限度、氧 化指标等，另外甲氧基苯胺值是过氧化物的再次氧化产物指标，在制剂中有严格控制，因此 开发注射用磷脂酰胆碱需要严格控制上述关键指标。
[0003] 目前纯化磷脂酰胆碱的方法包括CO2超临界萃取法、膜分离法、金属盐沉淀法、吸 附法、柱层析法、溶剂提取法等工艺方法。
[0004] 金属盐沉淀法存在络合物解析金属离子过程繁琐、容易造成污染等缺陷，导致实 际应用率低。CO2超临界萃取法只适合制备混合磷脂，所得产品磷脂酰胆碱含量普遍偏低。 磷脂酰胆碱与其他磷脂的分子量较接近，膜分离法要得到单一磷脂酰胆碱仍存在困难，其 产品含量偏低不能满足注射用辅料要求。溶剂提取法是通过磷脂酰胆碱在两相溶剂中的溶 解度的差异达到富集纯化的目的，对理化性质非常相似的各类磷脂杂质的选择性较差。
[0005] 吸附法是一种较常用的纯化方法，通过选择不同理化特性的吸附剂对待吸附原料 液进行搅拌吸附，达到纯化的效果，常见的吸附剂有：三氧化二铝、硅胶等，该方法只对磷脂 酰乙醇胺（PE)、酸值等指标有一定的吸附效果，很难保证含量、溶血磷脂酰胆碱（LPC)以及 胆固醇等关键指标符合注射用标准。
[0006] 硅胶柱层析法是另一种较常用的分离纯化方法，固定相与待分离物质的比例、洗 脱溶剂种类和比例对柱层析的分离效果与除杂能力有显著的影响，柱层析方法的溶剂及比 例选择与产品本身的性质以及杂质性质有关，该方法虽常见，但能够使产品质量在满足注 射用质量标准要求的同时又能符合商业化大生产的方法未见文献报道。
[0007] 采用柱层析纯化磷脂酰胆碱的专利较多，其中日本专利JP52083912A、 JP52057212A公开以硅胶柱层析，以三氯甲烷-乙醇或三氯甲烷-甲醇为洗脱剂，得到磷脂 酰胆碱含量分别为80%、89%的产品，上述两篇专利产品的含量均低于98%，不能满足注 射用要求。
[0008] 中国专利CN103073572A公开了一种经过180°C高温热化，丙酮脱油，离心，硅胶吸 附过滤等步骤，得到过氧化值0. 84、酸值9. 06、磷脂酰胆碱含量为88. 6% -92. 1 %的产品， 该专利技术高温处理磷脂会导致醛酮类氧化物质（甲氧基苯胺值）的产生，且所得产品纯 度、酸值、脂肪酸等指标均不能符合注射用标准要求。
[0009] 中国专利CN100500676C公开了以大豆粉末磷脂为原料经过提取，一次氧化铝层 析一次硅胶层析，低碳醇-水洗脱，得到酸值8. 7、磷脂酰胆碱含量为93. 4%的产品，该方法 所得产品磷脂酰胆碱含量偏低，酸值、甘油三酯、脂肪酸、甲氧基苯胺值等指标无法有效控 制。
[0010] 中国专利CN102633832A公开了一种以硅胶柱层析，以醇水洗脱得到含有磷脂酰 胆碱含量分别为90% -97. 5%的产品方法，该专利方法均无法做到在纯化提高含量的同时 控制甘油三酯等杂质指标和过氧化值等氧化指标，使产品质量符合注射用辅料要求。
[0011] 以上报道磷脂酰胆碱柱层析专利技术方法在甘油三酯、胆固醇、脂肪酸等杂质限 度和酸值、过氧化值、甲氧基苯胺值等氧化指标方面均没法控制，难以将上述技术方法应用 于注射用药用辅料领域。目前开发注射用磷脂酰胆碱的技术领域里，没有专门针对控制过 氧化值、甲氧基苯胺值等理化指标的方法，磷脂酰胆碱本身具有高不稳定性，开发该类产品 需要过度依赖于起始原料的新鲜度；受技术约束，目前国内注射用蛋黄磷脂酰胆碱主要依 赖进口，且价格昂贵，供货周期长，导致磷脂酰胆碱相关产品开发周期长、成本高，不利于市 场的普及。
[0012] 因此，开发以蛋黄卵磷脂为原料，通过柱层析并对三元混合溶剂比例进行控制，经 过两次洗脱，即可以提高产品含量又可以降低胆固醇、甘油三酯、游离脂肪酸、酸值、过氧化 值、甲氧基苯胺值等关键指标，使蛋黄磷脂酰胆碱符合注射用辅料标准的方法，对开发新型 革巴向制剂极具意义。
【发明内容】
[0013] 本发明的目的在于提供一种注射用蛋黄磷脂酰胆碱的制备方法。通过柱层析以三 元混合溶剂为洗脱剂进行两次洗脱，一步提高磷脂酰胆碱含量并且有效控制产品中杂质限 度（溶血磷脂酰胆碱、鞘磷脂、游离脂肪酸、甘油三酯）和氧化指标（酸值、过氧化值、甲氧 基苯胺值）。
[0014] 本发明的技术方案：
[0015] 以蛋黄卵磷脂为原料，加入多卤代烷烃溶解，经过柱层析以多卤代烷烃-低碳 醇-水所组成的三元混合溶剂进行两次洗脱，干燥，得到注射用蛋黄磷脂酰胆碱。
[0016] 所用原料是磷脂酰胆碱含量符合中国药典2010版二部要求（PC> 72% )的蛋黄 卵磷脂。
[0017] 所用填料包括硅胶、二醇基硅胶。
[0018] 所用填料与原料的重量比例为1:1?10:1。
[0019] 所用的多卤代烷烃包括二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷。
[0020] 所用的低碳醇为无水乙醇、丙醇、异丙醇或正丁醇。
[0021] 第一次洗脱所用的三元混合溶剂包括多卤代烷烃，低碳醇和水。其中多卤代烷烃 占混合溶剂的比例为65. 5%?89. 8%，水占混合溶剂的比例为0. 2%?1. 5%，其余为低碳 醇。
[0022] 第二次洗脱所用的三元混合溶剂包括多卤代烷烃，低碳醇和水。其中多卤代烷烃 占混合溶剂的比例为44. 8 %?62. 3 %，水占混合溶剂的比例为1. 5 %?3. 0 %，其余为低碳 醇。
[0023] 方法所述第一次洗脱体积用量（v)与原料重量（w)比为3:1?18:1 (L/Kg)。
[0024] 方法所述第二次洗脱体积用量（V)与原料重量（w)比为10:1?60:1 (L/Kg)。
[0025] 本发明的有益效果：
[0026] (1)本发明采用三元混合溶剂体系，结合两次洗脱，就可以保证蛋黄磷脂酰胆碱含 量符合要求的同时达到脱色、除杂（降低溶血磷脂酰胆碱、胆固醇、甘油三酯、游离脂肪酸 含量等杂质限度）、降值（降低酸值、过氧化值、甲氧基苯胺值）的效果。
[0027] (2)本发明解决了现有同类专利技术所存在的技术瓶颈，从技术层面解决了降低 过氧化值、甲氧基苯胺值等理化指标的难题，大大减少蛋黄磷脂酰胆碱产品对起始原料新 鲜程度的过度依赖。
[0028] (3)现有技术主要是以大豆来源的磷脂为起始原料制备高纯度的磷脂酰胆碱，本 发明以蛋黄来源的磷脂为原料制备注射用蛋黄磷脂酰胆碱，填补了国内该领域的技术空 白。
[0029] (4)本发明对原料的处理量大，生产操作简便，可商业化大生产得到符合注射用蛋 黄磷脂酰胆碱标准的合格产品，打破国外垄断，有利于国内新型靶向制剂在市场上的普及 应用。
【具体实施方式】
[0030] 以下实施例所得产品中磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、鞘磷脂、胆固醇、甘油三酯、 游离脂肪酸含量以及酸值、过氧化值等关键指标均参照进口注册标准（JF20100002)所述 方法进行测定，甲氧基苯胺值按照欧洲药典8. 0版2. 5. 36方法测定。
[0031] 实施例1 :
[0032] 取蛋黄卵磷脂1公斤，加入三氯甲烷溶解配成原料液，填装10公斤硅胶进行柱层 析，第一次以洗脱剂（三氯甲烷77. 8%、乙醇21. 8%、水0.4% )洗脱18升，第二次再以洗 脱剂（二氯甲烷44. 8%、乙醇53. 7%、水1. 5% )洗脱60升收集洗脱液，经过真空浓缩，冷 冻干燥得到磷脂酰胆碱产品，PC转移率为75. 5 %，磷脂酰胆碱纯度为99. 5 %，溶血磷脂酰 胆碱未检出，鞘磷脂0. 3 %，酸值为0. 8，过氧化值未检出，甲氧基苯胺值为3. 8，甘油三酯、 胆固醇、游离脂肪酸含量均符合规定。
[0033] 实施例2 :
[0034] 取蛋黄卵磷脂1公斤，加入二氯乙烷溶解配成原料液，填装7公斤硅胶进行柱层 析，第一次以洗脱剂（二氯乙烷84.0%、异丙醇14. 5%、水1.5% )洗脱18升，第二次再以 洗脱剂（三氯甲烷62. 3%、丙醇34. 7、水3.0% )洗脱55升收集洗脱液，经过真空浓缩，冷 冻干燥得到磷脂酰胆碱产品，PC转移率为80. 7 %，磷脂酰胆碱纯度为99. 1 %，溶血磷脂酰 胆碱未检出，鞘磷脂0. 5%，酸值为0. 3,过氧化值未检出，甲氧基苯胺值为2. 5,甘油三酯、 胆固醇、游离脂肪酸含量均符合规定。
[0035] 实施例3 :
[0036] 取蛋黄卵磷脂5公斤，加入二氯甲烷溶解配成原料液，填装25公斤二醇基硅胶进 行柱层析，第一次以洗脱剂（二氯甲烷89. 8%、乙醇10%、水0. 2%)洗脱75升，第二次再 以洗脱剂（三氯甲烷44. 8%、正丁醇52. 7%、水2. 5%)洗脱200升收集洗脱液，经过真空 浓缩，冷冻干燥得到磷脂酰胆碱产品，PC转移率为82. 1%，磷脂酰胆碱纯度为98. 9%，溶血 磷脂酰胆碱含量未检出，鞘磷脂0. 3%，酸值为0. 9,过氧化值未检出，甲氧基苯胺值为4. 2， 甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸含量均符合规定。
[0037] 实施例4:
[0038] 取蛋黄卵磷脂10公斤，加入二氯乙烷溶解配成原料液，填装50公