γ-谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的制备方法。具体地，本发明涉及如下 方法：由缬氨酰甘氨酸或其盐与y-谷氨酰基供体的酶反应，获得与y-谷氨酰缬氨酰甘 氨酸的混合溶液，通过调节其混合溶液中存在的残留缬氨酰甘氨酸或其盐的量，从而有效 制备y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体。
【背景技术】
[0002] y -谷氨酰缬氨酰甘氨酸（y -Glu-Val-Gly)作为赋予食品醇厚味（3夕味）的肽 为人所知（专利文献1)。Y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸通过诸如化学合成法或酶法制备。其中， 通过酶法制备y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸时，例如如下进行：在y-谷氨酰转移酶（y-谷氨 酰转肽酶，以下也称为"GGT"）的存在下使缬氨酰甘氨酸或其盐作用于谷氨酰胺之类的谷 氨酰基供体，获得含有 Y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸的溶液后，由该溶液获得Y-谷氨酰缬氨酰 甘氨酸（非专利文献1)。
[0003] 现有技術文献
[0004] 专利文献
[0005] 专利文献1:TO2007/055393号公报
[0006] 非专利文献
[0007] 非专利文献1: Suzuki，H.等（2008)用细菌Y-谷氨酰转肽酶提高氨基酸和肽的 风味（Improvement of the flavor of amino acids and peptides using bacterial y-gl utamyltranspeptidase).风味化学与生物的近期关注（In Recent High lights in Flavor Chemistry&Biology). Hofmann，T.等编著? p. 227-232,德国食品化工研宄院
【发明内容】
[0008] 本发明要解决的课题
[0009] 本发明人尝试着从含有缬氨酰甘氨酸的y -谷氨酰缬氨酰甘氨酸溶液结晶y -谷 氨酰缬氨酰甘氨酸，结果发现多存在以下情况：y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸溶液中残留较多 缬氨酰甘氨酸或其盐时，溶液凝胶化，无法结晶。
[0010] 因此，本发明的目的是提供能够有效制备y -谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的方法。
[0011] 本发明的目的是提供能够制备具有更大晶体尺寸的y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶 体的方法。
[0012] 本发明的目的是提供能够有效制备y -谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的方法。
[0013] 解决课题的方法
[0014] 本发明人发现，在从含有缬氨酰甘氨酸的谷氨酰缬氨酰甘氨酸溶液获得 y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体时，例如，在以缬氨酰甘氨酸为起始物质通过酶法获得y-谷 氨酰缬氨酰甘氨酸时，通过调节缬氨酰甘氨酸的残留量后结晶Y -谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶 体，就不发生凝胶化的问题，能够有效地获得Y -谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体，从而完成了本 发明。此外，本发明人发现，通过该方法结晶的Y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体与通过以往的 方法得到的晶体相比，具有较大的晶体尺寸。
[0015] S卩，本发明是具有以下特征的发明。
[0016] [1] -种谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的制备方法，该方法包括：
[0017] 在y-谷氨酰转移酶或含有该酶的微生物的存在下，使缬氨酰甘氨酸或其盐与 y -谷氨酰基供体反应，获得缬氨酰甘氨酸或其盐与Y -谷氨酰缬氨酰甘氨酸的混合溶液 的工序，此处，所述混合溶液中存在的缬氨酰甘氨酸相对于y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸的质 量比为20质量％以上；
[0018] 将获得的混合溶液中存在的缬氨酰甘氨酸或其盐的量调节为相对于该溶液中的 Y_谷氨酰缴氨酰甘氨酸的质量为〇. 1质量％以上低于20质量％，获得y-谷氨酰缴氨酰 甘氨酸溶液的工序；以及
[0019] 将所述y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸溶液结晶，获得y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的 工序。
[0020] [2]如上述[1]所述的方法，其中，所述混合溶液中存在的缬氨酰甘氨酸或其盐的 量在其相对于该溶液中的y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸的质量在1质量％?18质量％的范围 内进行调节。
[0021] [3]如上述[1]或[2]所述的方法，其中，所述混合溶液中存在的缬氨酰甘氨酸或 其盐的量如下进行调节：使所述混合溶液中的y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸吸附于吸附树脂， 而所述混合溶液中的缬氨酰甘氨酸或其盐流过所述吸附树脂后，将Y -谷氨酰缬氨酰甘氨 酸从吸附树脂上洗脱。
[0022] [4]如上述[1]?[3]中任一项所述的方法，其中，Y-谷氨酰基供体是谷氨酰胺。
[0023] [5]如上述[1]?[4]中任一项所述的方法，其中，Y-谷氨酰转移酶或含有该酶 的微生物是属于肠杆菌科的细菌。
[0024] [6]如上述[5]所述的方法，其中，所述细菌是大肠埃希氏菌。
[0025] [7]如权利要求[1]?[6]中任一项所述的方法，其中，缬氨酰甘氨酸或其盐与 Y-谷氨酰基供体的反应在选自水或缓冲液的溶剂中进行。
[0026] [8] -种y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸的晶体，所述晶体中含有2. 0质量％以下的选自 缬氨酰缬氨酸、缬氨酰缬氨酸盐、缬氨酰缬氨酰甘氨酸和缬氨酰缬氨酰甘氨酸盐中的一种 以上，且长轴方向长度在35ym以上的晶体的短轴方向直径的平均值在2. 1ym以上。
[0027] [9]如上述[8]所述的Y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸的晶体，其中，用光学显微镜拍摄 的Y -谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体图像在415ymX332ym的区域内包含了全体晶体图像的 结晶中，长轴方向长度在35ym以上的晶体的短轴方向直径的平均值在2. 1ym以上。
[0028] [10]如上述[8]或[9]所述的y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸的晶体，其中，y-谷氨酰 缬氨酰甘氨酸晶体中缬氨酰甘氨酸的浓度在3质量％以下。
[0029] 通过本发明可以有效地制备y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体。
[0030] 通过本发明还可以制备具有较大晶体尺寸的y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体。
[0031] 此外，通过本发明，由于获得较大的晶体，因此实现了更适合于工业处理的优异的 处理工艺。
【附图说明】
[0032] 图1是显示缬氨酰甘氨酸浓度为10质量％时（实施例6)获得的本发明的y-谷 氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的光学显微镜照片。
[0033]图2是显示缬氨酰甘氨酸浓度为15质量％时（实施例7)获得的本发明的Y-谷 氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的光学显微镜照片。
[0034] 图3是显示缬氨酰甘氨酸浓度为20质量％时（比较例2)获得的本发明的y -谷 氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的光学显微镜照片。
[0035] 图4是显示缬氨酰甘氨酸浓度为25质量％时（比较例3)获得的本发明的y -谷 氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的光学显微镜照片。
[0036] 图5是显示比较例5中获得的Y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的光学显微镜照片。
【具体实施方式】
[0037] [1] y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的制备方法
[0038] 本发明涉及一种y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸晶体的制备方法，该方法包括：（1)在 y-谷氨酰转移酶或含有该酶的微生物的存在下，使缬氨酰甘氨酸或其盐与y-谷氨酰基 供体反应，获得缬氨酰甘氨酸或其盐与谷氨酰缬氨酰甘氨酸的混合溶液的工序；（2)将 获得的混合溶液中存在的缬氨酰甘氨酸或其盐的量调节为相对于该溶液中的y-谷氨酰 缬氨酰甘氨酸的质量为〇. 1质量％以上低于20质量％，获得y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸溶液 的工序；以及（3)将所述y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸溶液结晶，获得y-谷氨酰缬氨酰甘氨 酸晶体的工序。
[0039] (1)获得y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸混合溶液的工序
[0040] 作为获得y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸混合溶液的工序，例如有如下方法：(a)在 y -谷氨酰转移酶或含有该酶的微生物的存在下，使缬氨酰甘氨酸或其盐与y -谷氨酰基 供体反应，获得缬氨酰甘氨酸或其盐与y-谷氨酰缬氨酰甘氨酸的混合溶液的方法；(b)如 日本专利特开2012-85637号公报