一种富勒烯橄榄油组合物及其在治疗帕金森病中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种富勒締橄揽油组合物及其在治疗帕金森病中的应用，属于生物医 药领域。
【背景技术】
[0002] 帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种常见的W黑质纹状体通路的退变为 主要特征的中枢神经系统变性疾病，多发于老年人当中，平均发病年龄为60岁左右。ro主要 的病理改变是中脑黑质多己胺能神经元的变性死亡，由此导致纹状体多己胺含量显著减少 而致病。其临床表现主要有静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态障碍等。
[0003] 据调查，帕金森病在65岁W上的发病率达1-2%，随着人口老龄化的发展，帕金森 病的研究也渐渐得到人们的关注。对于PD的发病原因目前尚不清楚，年龄老化、遗传因素、 环境因素、氧化应激等都有可能与PD有关。目前，大多数学者较为认同的学说是线粒体功能 障碍和氧化应激，线粒体I复合物的抑制导致大量的自由基生成，氧化应激产生大量的自由 基，又相应的降低线粒体I复合物的活性，从而加重对神经元的毒害。但是，现阶段对于PD还 没有很好的治疗方法，药物治疗仍是主要的治疗方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种富勒締橄揽油组合物及其在治疗帕金森病中的应用，本 发明将富勒締单分散于橄揽油中，利用富勒締的清除自由基功效和单分散性富勒締通过血 脑屏障来治疗帕金森病，具有较好的效果，并将在治疗此类自由基疾病中有更大的应用前 景。
[0005] 本发明首先提供一种富勒締橄揽油组合物，为富勒締和/或金属富勒締的橄揽油 分散液。
[0006] 所述的富勒締橄揽油组合物中，所述富勒締和/或所述金属富勒締的浓度可为 0.0 lmg/mL~0.8mg/mL，具体可为0.4~0.8mg/mL、0.4mg/mL 或0.8mg/mL。
[0007] 所述的富勒締橄揽油组合物中，所述富勒締或所述金属富勒締的粒径可为0.7nm ~lnm〇
[000引所述的富勒締橄揽油组合物中，所述富勒締可表示为C2n，30含η含60,具体可为C60 或〔70;
[0009] 所述金属富勒締可表示为臟C2n，30如^60,所述Μ选自Sc、Y和铜系金属元素化a- Lu)中的任意一种，具体可为Gd@Cs2。
[0010] 本发明同时提供了所述富勒締橄揽油组合物的制备方法，包括如下步骤：
[0011] 将所述富勒締和/或所述金属富勒締分散于所述橄揽油中，得到混合液;所述混合 液经球磨或超声后，依次经离屯、和过滤，收集滤液即得到所述富勒締橄揽油组合物。
[0012] 上述的制备方法中，经球磨或超声后，将所述混合液置于阴凉干燥避光保存，静置 一定的时间，再进行所述离屯、操作。
[0013] 经本发明证明，富勒締、金属富勒締能够用于预防和/或治疗帕金森病。
[0014] 富勒締和/或金属富勒締 W及所述富勒締橄揽油组合物在预防和/或治疗帕金森 病中的应用也属于本发明的保护范围。
[0015] 上述预防和/或治疗帕金森病的应用表现为清除自由基，其中，所述帕金森病由1- 甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氨化晚引起。
[0016] 富勒締和/或金属富勒締 W及所述富勒締橄揽油组合物在制备清除自由基的产品 中的应用也属于本发明的保护范围。
[0017] 本发明富勒締橄揽油组合物中，其中的所述橄揽油是一种健康的植物油，通过球 磨或超声的方式，能够使富勒締和/或金属富勒締 W单分散形式存在;单分散富勒締和/或 金属富勒締可W通过血脑屏障，进入脑组织。
[0018] 在本发明提供的一个具体的实施例中，C60-橄揽油组合物中，C60的浓度为0.8mg/ mL，实际使用富勒締橄揽油在生物体内建议剂量为0.1~lOmg/kg，最佳剂量为4mg/kg。另一 个具体的实施例中，Gd@C82-橄揽油组合物中，Gd@C82的浓度为0.8mg/mL，其在生物体内的剂 量为10~1000yg/kg。所述生物体为哺乳动物，如:人。
[0019] 本发明富勒締橄揽油组合物可W采用口服或腹腔给药的方式。服用疗程为15天， 根据病情，可服用短期或长期服用。
[0020] 本发明富勒締橄揽油组合物中的富勒締和/或金属富勒締具有多个不饱和键，极 易与自由基反应，具有很好的清除自由基的能力，因此对于治疗氧化应激引起的帕金森病 具有好的功效。
[0021] 本发明通过体外的ESR测试证明富勒締具有强的清除自由基的能力，然后通过细 胞水平实验证明其对细胞是没有损伤反而有保护的，并且能够修复自由基引起的细胞损 伤，最后通过构建帕金森小鼠模型，利用本发明富勒締橄揽油组合物进行治疗，发现确实可 W改善小鼠的运动能力，证明本发明富勒締橄揽油组合物具有治疗帕金森病的功效。
[0022] 本发明具有W下优点：
[002；3] (1)生物相容性好，安全无毒副作用。
[0024] 富勒締进入体内后可W快速代谢，不会对脏器产生损害，反而可W对由于其他自 由基产生损伤的细胞进行修护，橄揽油本身就是保健品，安全，无毒副作用，具有好的生物 相容性。
[0025] (2)效果显著。
[0026] 现阶段治疗帕金森病的主要方法还是药物治疗，本发明经过实验证明，其治疗效 果显著，提高患者生活质量。
【附图说明】
[0027] 图1为Gd@C82的电子自旋核磁共振巧SR)图，其中，虚线为空白，实线为Gd@C82。
[00%]图2为C60的电子自旋核磁共振化SR)图，其中，虚线为空白，实线为C60。
[0029] 图3为Gd@C82对化la细胞的药物毒性实验结果。
[0030] 图4为C60对化la细胞的药物毒性实验结果。
[0031] 图5为Gd@Cs2对双氧水诱导自由基细胞损伤的保护结果示意图。
[0032] 图6为C60对双氧水诱导自由基细胞损伤的保护结果示意图。
【具体实施方式】
[0033] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0034] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0035] 实施例1、富勒締橄揽油组合物的制备
[0036] (1 )Gd@C8广橄揽油组合物的制备
[0037] 量取20mL橄揽油，称取20mgGd@C82(粒径为0.7~Inm)，混合揽拌均匀，然后将混合 液置于球磨机中球磨，1化，球磨结束后将混合液取出，阴凉干燥避光保存，静置化离屯、，使 用220nm滤膜过滤，得到富勒締-橄揽油溶液，即Gd@Cs2-橄揽油组合物，其中Gd@Cs2的含量为 0.4mg/mL
[003引（2)C60-橄揽油组合物
[0039] 量取20mL橄揽油，称取20mgC6Q(粒径为0.7~Inm)，混合揽拌均匀，然后将混合液置 于球磨机中球磨，1化，球磨结束后将混合液取出，阴凉干燥避光保存，静置比后离屯、，220nm 滤膜过滤，得到富勒締-橄揽油溶液，即C60-橄揽油组合物，其中C60的含量为0.8mg/mL。
[0040] 实施例2、富勒締清除自由基能力检测
[0041] 通过电子自旋共振波谱化SR)来检测富勒締清除自由基的能力。
[0042] 测试中WDMP0为电子捕获剂，径基自由基通过化ton反应产生，室溫加入出化溶液 引发径基自由基产生后3min，开始检测，得到ESR数据，如图1和图2所示。
[00创图1为Gd@C82的电子自旋核磁共振化SR)图，其中，虚线为空白，实线为Gd@C82,与空