轮枝孢菌素a及与trail组合在制备药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属制药领域，设及轮枝抱菌素 A与TRAIL组合在制备抗肿瘤转移药物中的应 用。
【背景技术】
[0002] 癌症是严重危害人类健康的疾病之一，肿瘤转移则是癌症患者死亡的最主要原 因，某种程度上讲，控制肿瘤转移即能控制癌症死亡，目前尽管国内外抗肿瘤转移药物研究 投入了大量的人力、财力、时间，但是还没有一个真正的抗肿瘤转移药物上市。
[0003] TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand)是肿瘤坏死因子超家族的一 个成员，由于能够特异性地诱导肿瘤细胞调亡，自被发现W来研究人员就将其作为一个选 择性抗肿瘤药物进行着广泛的研究。近期，WTRAIL为主体的肿瘤治疗正在进行I期和II期 临床试验(WWW.clinicalhaiIs.gov)。虽然TRAIL在临床前试验中表现了良好的选择特异 性和较低的细胞毒性，TRAIL在肿瘤临床治疗中的疗效非常有限。究其原因，就是肿瘤细胞 特别是转移性肿瘤细胞对TRAIL产生了耐药性。因此，寻找新型有效的TRAIL增敏剂与TRAIL 协同作用W治疗肿瘤尤其是治疗肿瘤转移具有广泛的应用前景。已有报道vedicillin A 具有抗肿瘤效果，但是vedicillin A抗肿瘤转移的效果未曾报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供轮枝抱菌素 A(vedicillin A)在制备抗肿瘤转移药物中的 应用。所述的vedicillin A是从高等真菌黄髓碟膏菌(含菌寄生菌歪抱菌)子实体中分离 所得，分子式为C3()也8N606S4，分子量化SI-MS):m/z 696.3，所述药物由veパicillinA与制 剂允许的药物赋形剂或载体组成。本发明所述肿瘤主要包括肝癌、结肠癌和乳腺癌。
[0005] 本发明的另一个目的是提供轮枝抱菌素 A(vedicillin A)与TRAIL组合(重量比 1:10)在制备抗肿瘤转移药物中的应用。
[0006] 本发明提供的药物，其制剂形式液体制剂、固体制剂或胶囊剂，主要包括颗粒剂、 片剂、冲剂、软胶丸、软胶囊、滴丸剂或注射剂。
[0007] 本发明提供的药物，制剂的给药形式主要包括口服给药或注射给药。
[0008] 本发明提供的vedicillinA对多种人的W及小鼠的肝癌细胞、结肠癌和乳腺癌 细胞都有较强的TRAIL增敏效果。表明vedicillin A是一广谱的有效的TRAIL增敏剂。目前 临床上缺乏真正的抗肿瘤转移药物，因此verticil 1 in A具有很好的应用前景。本发明 verticillin A能够在较低剂量下有效增加肿瘤细胞对TRAIL的敏感性，并W协同作用的方 式抑制肿瘤细胞转移。因此vedicillin A及与TRAIL组合具有更好抗肿瘤细胞转移的应用 前景。
【附图说明】
[0009] 图1是轮枝抱菌素 A的液相色谱分析。仪器:Agilent 1100系列高效液相色谱仪； 柱：Hypersil 抓S-C18,，5皿，4.6X250mm;柱溫：35°C;流动相：60% 乙腊-40%水；流速： 0.8mL/min;检测波长：210nm。
[0010]图2是4T-1细胞划痕实验显微照片图。
[00川图3是4T-1细胞划痕实验柱状图。
[0012]图4是CT26细胞划痕实验柱状图。
[001引图5是服始田胞划痕实验柱状图。
[0014] 图6是服0细胞Tranawe 11实验，上图是显微照片图（左：对照，右：加药），下图是柱 状图。
[001引图7是RT-PCR筛查基因的结果。
[0016] 图8是Ve;rticillin A下调c-Met蛋白表达。
[0017] 图9是Vedicillin A抑制HGF(肝细胞生长因子)激活的c-Met蛋白表达及其憐酸 化。
[001引图10是Vedicillin A抑制服F诱导的服始田胞转移Tranawell实验。
[0019] 图11是Vedicillin A抑制服F诱导的DLD1细胞转移Tranawell实验。
[0020] 图12是Vedici 11 in A与TRAIL组合抑制小鼠体内结肠癌细胞肺部转移的照片。
[0021 ] 图13是Vedici 11 in A与TRAIL组合抑制小鼠体内结肠癌细胞肺部转移肿瘤颗粒 数的柱状图。
【具体实施方式】
[0022] W下将结合具体实施例与附图详细说明本发明，运些实例仅用于说明目的，而不 用于限制本发明范围。
[0023] 实施例1:分离纯化抗肿瘤细胞毒化合物Vedicillin A
[0024] 1.提取和纯化:黄髓碟膏菌真菌(含菌寄生菌歪抱菌)湿重1500g，真空冻干粉碎后 先用石油酸然后用乙酸乙醋室溫浸提，取乙酸乙醋浸提物1.2g溶剂溶解后过反相色谱柱， 流动相取石油酸:氯仿：乙腊=6:1:3，部分收集器收集分离片段进行体外MTT法检测各片段 对肝癌细胞HepG2的毒性，检测到毒性最大的组分收集后用C8反相半制备柱化ypersil 0DS20巧50mm)纯化，流动相为10%-100%的乙腊或甲醇梯度洗脱，收集细胞筛选有活性的 洗脱峰，挥发溶剂后得白色晶体10.5mg，纯度99.0 %，VertiCi 11 in A的高效液相色谱图见 图1。
[00巧]2.结构鉴定:核磁共振仪（IN0VA-400)，质谱仪(Bruker Esquire 3000plus)。
[0026] 3.实验结果:VerticillinA，分子式为C3地28N606S4，ESI-MS:m/z 696.3，根据运些 数据与文献（Minato Η, et al.J Chem Soc Perkin 197317:1819-25)比较所得 Verticillin A的化学结构如下：
[0027]
[00巧]实施例2 Verticil 1 in A体外抑制肿瘤细胞迁移；
[00巧]实验材料和方法：
[0030] 肿瘤细胞购自美国American Type Culture Collection并培养在DMEM培养基 (1]1￥；[付0肖日]1日），添加 5%小牛血清（1]1￥；[付0肖日]1日），211^谷氨酷胺，37"€，10%〔〇2培养箱。
[0031] 实验选择5种不同肿瘤细胞分别是4T-1(鼠乳腺癌）、Bcap37(人乳腺癌）、CT26(鼠 结肠癌）、服〇(人结肠癌-转移性）、HCT116(人原发结肠癌），分别添加或不添加 Vedicillin A24或48小时利用细胞划痕实验，显微观察分析肿瘤细胞的迁移情况（图2)，结果表明：0.1μ Μ Verticillin Α48小时处理可W显著抑制4T-UCT26及服0的细胞迁移达50%左右（图3- 5)，而对Bcap37或肥T116影响不大（图略）。
[0032] VertiCi 11 in A溶解在DMS0中配成Img/ml母液，置于-20°C冰箱，实验时用培养液 稀释成所需