作为益生菌的戊糖乳杆菌菌株的利记博彩app
【专利说明】作为益生菌的戊糖乳杆菌菌株 发明领域
[0001] 本发明涉及医学，微生物学和食品技术领域，特别是待用作有益于人类健康的益 生菌的戊糖乳杆菌的新菌株。
[0002] 发明背景
[0003] 益生菌
[0004] 益生菌（probiotic)微生物的概念来自诺贝尔奖获得者Elie Metchnikoff的假 说，他提出，能够产生发酵的细菌(乳杆菌(Lactobacilli))的食用对结肠的微生物群产生 积极的影响，从而减少了细菌毒素和其他对人体健康具有负面影响的微生物活性的存在。
[0005] "益生菌是在其施用后使消费者有比基本天然营养物更多的益处的活微生物"。如 今，有很多关于益生菌治疗几种胃肠道健康失调的有用性的参考文献，以及提示其激活免 疫系统和防止变态反应的效用的研究。
[0006] 益生菌必须满足涉及到无毒性，存活力，附着和有益效应的几个要求。各细菌菌株 的性质是独特的，并且不能外推到相同物种的其它菌株(Araya，M.等人，Guide lines for the Evaluation of Probiotics in Food-Joint FAO/WHO Working Group.FAO/ WHO.Editor 2002.Food and Agriculture Organization of the United Nations and World Health 0rganization:0ntario,Canada)。因此，发现在所有益生菌要求中具有较好 性能的那些菌株是重要的。
[0007] 虽然益生菌的概念与肠道微生物菌群有关，早在1988年进行的研究表明，这种概 念也可以扩展到女性的阴道菌群。几个科学团队已经发展了这个想法达多年之久，这以鉴 定出可用于治疗阴道健康并发症的一些乳杆菌菌株告终(Anukam，K. C.等人，Clinical study comparing probiotic Lactobacillus GR-Iand RC_14with metronidazole vaginal gel to treat symptomatic bacterial vaginosis.Microbes and Infection.2006, Vol .8, Nos. 12-13 ,pages 2772-2776; Larsson，P · G ·等人，Human lactobacilli as supplementation of clindamycin to patients with bacterial vaginosis reduce the recurrence rate；a 6-month,double-blind,randomized, placebo-controlled study .BMC Women's Health.2008, Vol ·8，Νο· I ,page 3)，从而表明 了益生菌用于阴道健康的概念。
[0008] 健康阴道菌群
[0009]阴道分泌物和瘙痒的出现是妇科就诊的最常见的原因。这可能是由于变应性反 应，与刺激性试剂(布料，肥皂，喷雾剂等)接触或在许多情况下由于感染。
[00?0]健康的阴道菌群主要由乳杆菌属(Lactobacil Ii)组成，其维持阴道的天然酸性pH (3.9和4.3之间），从而防止其它微生物对它的定殖。当这种自然菌群例如通过系统性抗生 素治疗被削弱时，致病性物种的感染变得可能得多。健康的阴道菌群的最常见的并发症是 外阴阴道念珠菌病（vulvovaginal candidiasis)和细菌性阴道病（bacterial vaginosis) 〇
[0011]外阴阴道念珠菌病
[0012]念珠菌属(Candida)是一种非常普遍的酵母，其可以在阴道菌群中少量发现而不 会有疾病的任何症状。当阴道菌群的平衡被破坏，并且与保护性乳杆菌属的量相比念珠菌 属群体增加时出现症状。念珠菌感染的典型症状包括阴道瘙痒和烧灼感，以及性交困难和 阴道痉挛。大约75 %外阴阴道念珠菌病的情况归因于白色念珠菌(Cand i da a lb i cans )，另 有 15% 归因于光滑念珠菌（Candida glabrata)(Richter，S.S.等人，Antifungal Susceptibilities of Candida Species Causing Vulvovaginitis and Epidemiology of Recurrent Cases.J.Clin.Microbiol.2005，Vol.43，No.5，pages 2155-2162)。据估计， 75%的女性在她们的一生中经历至少一次发作（episode)。此外，25%的病例是复发性的， 每年具有四次或更多次发作。
[0013]感染常在用具有不同治疗目的开处的抗生素疗法的治疗后发生。它在服用含有雌 激素的口服避孕药的妇女，在孕妇和在具有糖尿病的妇女中也是常见的。念珠菌感染用抗 真菌剂，例如三唑类药物（例如氟康唑（fluconazole)，克霉唑（clotrimazole)，咪康挫 (myconazoIe)，伊曲康唑（itraconazole))或制霉菌素(nystatin)治疗。然而，值得注意的 是，光滑念珠菌菌株倾向于显示针对这种治疗的高抗性，同时高达20 %的临床分离的白色 念珠菌(Candida albicans)菌株呈现对最典型的治疗之一，氟康唑的抗性，从而强调了找 到用于管理外阴阴道念珠菌病的新的治疗手段的重要性。
[0014]除了它的酸性pH外，阴道液(vaginal fluid)包含几种抗微生物蛋白，如溶菌酶， 防御素(defensins)和乳铁蛋白。在外阴阴道念珠菌病期间，在约25%妇女中这些物质的浓 度增加到超出了正常水平(Valore，E.V.等人，Reversible Deficiency of Antimicrobial Polypeptides in Bacterial Vaginosis·Infect·Immun·2006，Vol·74,No·10,pages 5693-5702)。这种应答通常不足以防御酵母诸如念珠菌，因为这些物质的效应相比于抗真 菌剂是更为细菌抑制或杀细菌的。然而，由于健康的阴道菌群主要由乳杆菌属细菌组成，抗 微生物蛋白的这种异常增加可以有助于进一步延迟阴道的健康菌群的恢复。此外，这强调 了当搜寻适合用作益生菌的乳酸杆菌时需要考虑对这些抗微生物因子的抗性。
[0015] 细菌性阴道病
[0016] 细菌性阴道病是由通常在阴道菌群中不存在或以很少量发现的细菌物种的过度 生长而引起的。最常见的物种是阴道加德纳菌(Gardnerel la vaginal is)和阴道奇异菌 (Atopobium vaginale)，但确切病因源(aetiological agent)迄今尚未发现。5个妇女中的 约1个在6至12个月之间的间隔中将发展成细菌性阴道病。虽然细菌性阴道病能引起异常阴 道排出物和鱼腥味，但大多数情况是无症状的。细菌性阴道病的典型特征是由于乳杆菌的 消失导致的PH上升得高于4.5,这进一步促进其它细菌物种的生长。
[0017] 细菌性阴道病用抗生素，如甲硝唑和克林霉素(clindamicyn)治疗。然而，细菌性 阴道病显示高的复发率，在第一个月期间高达35%和在第一年期间高达70%。还已经观察 到，阴道病的抗生素治疗可导致外阴阴道念珠菌病作为继发感染，因为抗生素(特别是克林 霉素)也影响乳杆菌。
[0018] 另外，已经表明，具有细菌性阴道病的妇女倾向于具有早产婴儿或具有低体重(小 于2.5kg)的婴儿。有时感染可扩散至输卵管。这种类型的感染称为盆腔炎性疾病(pelvic inflammatory disease，PID)，并可以导致不育和对输卵管的损害，从而增加异位妊娠的风 险。细菌性阴道病也增加了泌尿道感染和性传播疾病的风险。
[0019] 用于管理外阴阴道念珠菌病和细菌性阴道病的益生菌
[0020] 目前市场上存在帮助管理外阴阴道念珠菌病的几种益生菌菌株，如鼠李糖乳杆菌 GRl (Lactobacillus rhamnosus GRl )，发酉孝乳杆菌RCl4(LactobaciIIus fermentum RC14)，植物乳杆菌P17630( Lactobacillus pi ant arum P17630)和嗜酸乳杆菌NAS (Lactobacillus acidophilus NAS) 然而，它们无一测试了它们承受在4例感染中的大约I 例中出现的升高浓度的抗微生物因子的能力。另外，只有一种用于外阴阴道念珠菌病管理 的益生菌溶液(81(^卩丨〇^1111;丨〇^@，由鼠李糖乳杆菌61?1和罗伊氏乳杆菌1^14菌株组成）， 其功效要求得到随机化的安慰剂对照的临床试验支持(Martinez，R.C.R.等人，Improved treatment of vulvovaginal candidiasis with fluconazole plus probiotic Lactobacillus rhamnosus GR-Iand Lactobacillus reuteri RC-14.Letters in Applied Microbiology.2009，Vol.48，No.3，pages 269-274)〇
[0021] 另一方面，存在用于管理细菌性阴道病的两种益生菌产品，其健康要求得到随机 化的安慰剂对照的临床试验支持:BIONFloreIntime胃（鼠李糖乳杆菌GRl和罗伊氏乳杆菌 RC14菌株）和EcoVagili (加氏乳杆菌DSM 14869(Lactobacillus gasseri DSM 14869)和鼠 李糖乳杆菌03]\1 14870(厶11111^111，1(.〇.等人，2006，同上;]^^8〇11，？.6.等人，2008，同上）。 [0022]本领域描述了作为潜在的阴道益生菌的其它菌株，如EP1436380B1，其描述了从健 康成年个体获得的粪便培养物中分离并且在四环素的存在下培养的戊糖乳杆菌 (Lactobacillus pentosus)菌株NCIMB41114。该文件描述，由于其抑制念珠菌物种的生长， 并且该菌株具有对四环素和相关抗生素的抗性，它可以用于抵抗念珠菌属在机体的任何区 域的不希望的生长，尤其是在肠易激综合征中。此文件未描述针对光滑念珠菌（Candida glabrata)菌株的抑制活性，也未展示菌株粘附到阴道上皮和在阴道环境中存活或抵抗存 在于其中的抗微生物物质，如溶菌酶的能力。
[0023] Okkers，D.J.等人，1999年描述了从产前患者阴道后穹窿分泌物分离的戊糖乳杆 菌菌株TV35b产生细菌素样肽(pentocin TV35b)，其抑制白色念珠菌和一些细菌种类。该文 件未描述该菌株对光滑念珠菌的抑制活性（Okkers，D . J.等人，Characterization of pentocin TV35b,a bacteriocin-like peptide isolated from Lactobacillus pentosus with a fungistatic effect on Candida albicans,Journal of Applied Microbiology.1999,Vol.87,No.5,pages 726-734)〇
[0024] 另一方面，本领域描述了对白色念珠菌不呈现抑制活性的阴道菌株。例如，在 Dimitonova等人2007中，评估了从健康保加利亚妇女的阴道拭子分离的20株乳酸杆菌菌株 的抑制活性。20株均不抑制白色念珠菌的生长(Dimitonova，S.P .等人，Antimicrobial activity and protective properties of vaginal lactobacilli from healthy Bulgarian women.Anaerobe.2007,Vol.13,No.5-6,pages 178-184)。
[0025] 本领域还教导存在对白色念珠菌的抑制活性并不意味着该细菌菌株也是针对光 滑念珠菌的拮抗剂。例如，PascualL.M.等人，2008中，从非妊娠的，健康的，绝经前妇女的阴 道中分离的乳杆菌属菌株被鉴定为鼠李糖乳杆菌L60。鼠李糖乳杆菌L60显示针对泌尿生殖 病原体的广谱抗微生物活性和对通常对由这些病原体引起的感染开处的抗生素的抗性。该 菌株是10株白色念珠菌的拮抗剂，但不是3株测试的光滑念珠菌菌株的拮抗剂[Pascual， L.M·等人，Lactobacillus rhamnosus L60,a potential probiotic isolated from the human vagina.Journal of General and Applied Microbiology.2008,Vol.54,No.3, p