一种丹参茎叶中丹酚酸类成分的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然产物提取技术领域，尤其设及一种丹参茎叶中丹酪酸类成分的提 取方法。
【背景技术】
[0002] 丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge)系唇形科鼠尾草属植物，具有桂疲止痛、活血 通经、清屯、除烦、治疗屯、血管疾病等功效。丹参主要活性物质为脂溶性的丹参酬类和水溶性 的丹酪酸类。由于丹参多W根入药，丹参根及其制剂广泛地应用于临床，山东道地产区年产 量约一千万千克，但大量的地上部分却弃之不用，因此在丹参根部加工的过程中会造成大 量浪费。研究表明，丹参地上茎叶部分含有丰富的丹酪酸B、丹参素和原儿茶醒等水溶性酪 酸类成分。近年来药理研究发现，酪酸类化合物具有新的药用价值，如抗炎、抗氧化、抗糖尿 型肾病、抗艾滋病、抗肝纤维化和抗肝癌等功效，因此，对丹参茎叶中有效成分的提取工艺 进行深入研究，可为中药废弃物的再次利用提供一条新路。
[0003] 随着中药现代化的深入，酶法提取已成为快速有效地从中药材中提取分离和纯化 低含量成分并保持其高活性的有效手段。利用酶解技术可W破坏植物细胞壁，减少有效成 分从胞内向胞外溶出的阻力，从而提高提取效率。另外，由于丹参茎叶被弃掉，会对环境造 成较大的污染。
[0004] 在目前采用的酶法提取中草药或其废弃物有效成分的研究中，大多采用单一酶处 理。但由于植物细胞壁是由木质素、纤维素和半纤维素组成的木质纤维素复合大分子，单一 酶的破壁效率往往不高，往往需要多种酶系复合作用，才能有效降解细胞壁。目前市场上销 售的复合酶制剂主要是采用多菌株分别发酵产单一酶，再通过复配技术形成产品，运对许 多酶制剂生产厂家来说，条件要求比较高，而且单一酶成本太高，因此不适合于大规模的工 业应用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的就是为了解决上述问题，提供一种丹参茎叶中丹酪酸类成分的提取 方法。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0007] -种丹参茎叶中丹酪酸类成分的提取方法，包括复合酶提取和水浸提，所述复合 酶为白黄小脆柄茹(Psathyre 1 Ia cando 11 eana)BDF15发酵产生的粗酶液，所述白黄小脆柄 茹(PsathyreIla candolIeana)BDF15已于2015年11月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中屯、（简称CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏号为 CGMCC No.11415。
[000引上述方法还包括:将上述提取得到的提取液减压浓缩，得丹参茎叶酪酸类成分浓 缩液，将浓缩液再经冷冻干燥，即得到丹参茎叶中丹酪酸类成分提取物。
[0009]优选:所述丹参茎叶在进行复合酶提取前首先进行干燥处理，然后粉碎成30-50 (优选40)目的粉末。
[0010] 优选:所述复合酶提取时的复合酶粗酶液和丹参茎叶的质量体积比（g/ml)为15; 1-20：Io
[0011] 优选:所述复合酶提取时的酶解溫度为30-50°C。
[0012] 优选:所述复合酶提取时的酶解时间为0.5-1小时。
[0013] 优选:所述复合酶提取时的pH值为4.5-5.0。
[0014] 优选:所述水浸提取时将复合酶提取后的混合液中加入粗酶液体积倍数为40-60 倍(优选50倍)的水，40-60°C (优选50°C)提取80-100°C (优选90°C川欠集滤液。
[0015] 优选:减压浓缩的溫度为40-5(TC (优选:45°C)。
[0016] 优选:冷冻干燥的条件:真空度13化ar，溫度-45°C。
[0017] 本发明的有益效果：
[0018] 本发明的提取方法可有效地促进丹参茎叶中酪酸类成分的释放，提高提取率，降 低生产成本;并且本发明生产过程中不产生有害物质，无污染，产品质量好，功效强，同时还 综合利用中药废弃物，变废为宝，是一种环境友好的绿色提取方法。
[0019] 本发明提出采用丹参内生菌产生的木质素酶与纤维素酶复合酶法新工艺提取丹 参茎叶废弃物中丹酪酸，考察了复合酶用量、酶解时间、酶解溫度等因素对丹酪酸类成分提 取率的影响，优化出了木质素酶与纤维素酶复合酶法提取丹参茎叶丹酪酸类成分最佳工艺 条件。采用木质素酶与纤维素酶复合酶新工艺提取丹参茎叶丹酪酸类成分，比传统水提工 艺提高了 42.2%的提取率。
【附图说明】
[0020] 图1是溫度对丹参茎叶总丹酪酸含量提取率的影响；
[0021] 图2是酶料比对丹参茎叶总丹酪酸提取率的影响，其中横坐标1-5对应的酶料比分 别为 5:1，10:1，15:1，20:1，25:1;
[0022] 图3是本发明酶解时间对丹参茎叶总丹酪酸含量的影响；
[0023] 图4是酶解溫度和酶料比对总丹酪酸提取率的影响的响应面的等高线；
[0024] 图5是酶解溫度和酶料比对总丹酪酸提取率的影响的响应面的=维曲线；
[0025] 图6是酶解溫度和酶解时间对总丹酪酸提取率的影响的响应面的等高线；
[0026] 图7是酶解溫度和酶解时间对总丹酪酸提取率的影响的响应面的S维曲线；
[0027] 图8是酶料比和酶解时间对总丹酪酸提取率的影响的响应面的等高线；
[0028] 图9是酶料比和酶解时间对总丹酪酸提取率的影响的响应面的=维曲线；
[00巧]图10为白黄小脆柄茹（Psathyrella candolleana)BDF15在马铃馨综合培养基上 的生长特征；
[0030] 图11为白黄小脆柄茹（Psathyrella candolleana)BDF15在PDA-愈创木酪平板上 的产漆酶情况，其中，A. BDFl 5培养3加寸产生的漆酶氧化圈（正面）；B. BDFl 5培养3加寸产生的 漆酶氧化圈（背面）；C. BDF15培养5加寸产生的漆酶氧化圈（正面）；D. BDF15培养5加寸产生的 漆酶氧化圈（背面）；
[0031] 图12为白黄小脆柄茹（Psathyrella candolleana)BDF15在液体产酶培养中的生 长状况。
【具体实施方式】
[0032] 下面结合附图与实施例对本发明作进一步说明。
[0033] 实施例1
[0034] -种丹参茎叶中丹酪酸类成分的提取方法，包括W下步骤:将丹参茎叶干燥，粉碎 成40目的粉末，称取50g，按照酶料比15:1加入复合酶粗酶液，摇匀后，控制酶解溫度在40 °C，pH值4.5-5.0，酶解时间0.5小时，处理丹参茎叶；酶解完毕后，再加入50倍量蒸馈水，置 于50°C的水浴锅中，保溫水浸提取90min后过滤。滤渣进行二次纯水抽提;合并两次提取液。 45°C减压浓缩，得丹参茎叶酪酸类成分浓缩液;浓缩液再经冷冻干燥，其操作条件为:真空 度13化ar，溫度-45°C，即得到丹参水溶性提取物干粉。
[0035] 实施例2
[0036] -种丹参茎叶中丹酪酸类成分的提取方法，包括W下步骤:将丹参茎叶干燥，粉碎 成40目的粉末，称取50g，按照酶料比20:1加入复合酶粗酶液，摇匀后，控制酶解溫度在30 °C，抑值4.5-5.0，酶解时间1小时，处理丹参茎叶；酶解完毕后，再加入50倍量蒸馈水，置于 50°C的水浴锅中，保溫水浸提取90min后过滤。滤渣进行二次纯水抽提;合并两次提取液。45 °0减压浓缩，得丹参茎叶酪酸类成分浓缩液;浓缩液再经冷冻干燥，其操作条件为:真空度 135bar，溫度-45°C，即得到丹参水溶性提取物干粉。
[0037] 实施例3
[0038] -种丹参茎叶中丹酪酸类成分的提取方法，包括W下步骤:将丹参茎叶干燥，粉碎 成40目的粉末，称取50g，按照酶料比18:1加入复合酶粗酶液，摇匀后，控制酶解溫度在50 °C，pH值4.5-5.0，酶解时间45min，处理丹参茎叶；酶解完毕后，再加入50倍量蒸馈水，置于 50°C的水浴锅中，保溫水浸提取90min后过滤。滤渣进行二次纯水抽提;合并两次提取液。45 °0减压浓缩，得丹参茎叶酪酸类成分浓缩液;浓缩液再经冷冻干燥，其操作条件为:真空度 135bar，溫度-45°C，即得到丹参水溶性提取物干粉。
[0039] 实施例4
[0040] -种丹参茎叶中丹酪酸类成分的提取方法，包括W下步骤:将丹参茎叶干燥，粉碎 成30目的粉末，称取50g，按照酶料比19:1加入复合酶粗酶液，摇匀后，控制酶解溫度在30 °C，抑值4.5-5.0，酶解时间1小时，处理丹参茎叶；酶解完毕后，再加入40倍量蒸馈水，置于 40°C的水浴锅中，保溫