转移抑制剂的利记博彩app
【专利说明】转移抑制剂
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本专利要求申请日为2013年4月5日的美国临时申请号61/808,966的优先权，其在 此通过提述W其整体并入。 发明领域
[0003] 本专利设及包含抗体、核酸分子、多核巧酸和肤的组合物和制剂，W及它们用于预 防和治疗转移性癌症，特别是用于降低、阻遏、或抑制癌细胞增殖、转移和/或血管生成的方 法。
[0004] 对电子提交文本的说明
[000引随此一道电子提交的文本文件内容再次通过提述W其整体并入:序列表的计算机 可读形式拷贝（文件名:BMRK_006_0 lW0_SubSeqLi St_ST25. txt，数据记录于2014年4月4日， 文件大小:58千字节）。
[0006] 发明背景
[0007] MARCKS蛋白（肉豆違酷化的富丙氨酸C激酶底物)是蛋白激酶C(PKC)的普遍存在的 憐酸化祀标化i等，Journal Of Biological Chemistry 276;40982(2002))eMARCKS具有S 个进化保守区（Aderem等，化ture 1988; 332: 362-364; Ilielen等，化ture 1991; 351: 320-322;化rtwig等，化ture 1992;356:618-622;Seykora等J Biol ^eml996;271:18797-18802):N末端、憐酸化位点域(或PSD，也称为效应器域）、和多同源性2(MH2)域。N末端是包 含24个氨基酸具有经酷胺键连接至N末端甘氨酸残基的肉豆違酸部分的a-氨基酸序列，其 设及MARCKS对细胞中的膜的结合（S巧kora等J Biol化em 1996;271:18797-18802)并且 可能与巧调蛋白结合(Matsubara等J Biol Chem 2003;278:48898-48902)。此24个氨基酸 的序列称为MANS肤。MANS肤和相关肤公开于美国专利号7，265，088; 7，529，926; 7，544，772; 8,492,518;8,501，911;7,918,293,870;和8,563,689中，各文件的全部内容通过提述^其 整体并入。
[0008] 本领域中需要新的安全的疗法来预防、治疗和抑制癌症，包括抑制癌细胞转移、癌 细胞增殖、肿瘤生长、和/或血管生成。本发明解决了运些和其他的需求。
[0009] 发明概述
[0010] 本发明设及对于预防或治疗癌症有用的方法和组合物。在一个实施方案中，提供 了用于抑制癌细胞转移、癌细胞增殖、肿瘤生长、或血管生成的方法和组合物。在一个实施 方案中，提供了用于抑制癌细胞转移、癌细胞增殖、肿瘤生长、或血管生成的方法和组合物， 包括对肉豆違酷化的富丙氨酸C激酶底物(MARCKS)的抑制。在一个实施方案中，组合物包含 MARCKS-抑制性化合物，包括肤、多肤、抗体或其片段、W及核酸分子如反义多核巧酸、适配 体(aptamer)、小干扰RNA(SiRNA)、微小RNA(miRNA)、和短发夹RNA(ShRNA)。本申请所用的 "MARCKS-抑制性核酸分子"指的是降低MARCKS的表达和/或功能的多核巧酸或核酸分子如 siRNA、miRNA、shRNA、或反义多核巧酸。在一个实施方案中，所述组合物包含一个或多个 MARCKS相关的肤。在另一个实施方案中，所述MARCKS相关的肤对应于MARCKS的MH2域。在另 一个实施方案中，所述肤是肉豆違酷化的N末端序列(MANS肤，其是MARCKS的24个氨基酸的 片段)相关的肤（即"MANS相关的肤"）。在又一个实施方案中，MANS相关的肤选自下组:MANS 肤;未取代的MANS片段，其含有四个或更多氨基酸且包含与MANS肤中N末端氨基酸序列中所 发现的相同的序列；包含与MANS肤或MANS肤片段中所发现的序列基本上相同的序列的肤； MANS肤或MANS肤的片段，其具有与MANS肤完全相同或基本上相同的氨基酸序列，其进行了N 末端肉豆違酷化或例如W乙酷基进行了 N末端乙酷化;和MANS肤或MANS肤的片段，其具有与 MANS肤完全相同或基本上相同的氨基酸序列，其C末端经化学修饰。在一个实施方案中， MANS相关的肤是N末端和C末端都被化学修饰的。在一个实施方案中，本申请提供的MARCKS-抑制性化合物是抗体或其片段。在一个实施方案中，所述抗体或其片段抑制MARCKS蛋白的 功能。在另一个实施方案中，所述抗体或其片段结合至MARCKS蛋白的N末端或MARCKS蛋白的 MH2序列。我们令人惊讶地发现，使用不同类型的MARCKS-抑制性化合物显示出对癌细胞体 外迁移的抑制效果，并抑制体内转移。在一个实施方案中，MARCKS-抑制性化合物展示出对 侵袭性癌细胞系的迁移的抑制效果。在一个实施方案中，本申请提供的MARCKS-抑制化合物 抑制哺乳动物的肿瘤中癌细胞的转移。在又一个实施方案中，所述肿瘤是实体瘤。在另一个 实施方案中，所述肿瘤是非实体瘤。在一个实施方案中，本申请提供的MARCKS-抑制化合物 抑制与淋己瘤或白血病相关的癌细胞的转移。
[OOU] 在一个实施方案中，MARCKS-抑制性化合物包括MARCKS-抑制性多核巧酸或 MARCKS-抑制性核酸分子。在进一步的实施方案中，所述MARCKS-抑制性化合物是抑制 MARCKS表达和/或功能的反义1?酷、311?酷、3111?酷、或微小1?酷多核巧酸。在一个实施方案中， MARCKS-抑制性化合物是调节MARCKS表达的蛋白或多核巧酸的模拟物，例如miR21的模拟 物。
[0012] 在一个实施方案中，MRCKS-抑制性化合物是MRCKS相关的或MANS相关的肤。在另 一个实施方案中，MARCKS相关的肤对应于MARCKS的N末端肉豆違酷化的域。因此，在一个实 施方案中，MARCKS相关的肤是MANS相关的肤。在一个实施方案中，MANS相关的肤和一些经化 学修饰的MANS相关的肤阻遏侵袭性癌细胞系的迁移。在一个实施方案中，MANS相关的肤用 于对癌细胞的转移发挥抑制性效果。在一个实施方案中，MRCKS-抑制性化合物展现出对癌 细胞体内转移的阻遏效果。抑制转移性疾病的体内位点包括至少肺组织、屯、脏组织、脾组 织、肠组织、和隔膜组织。在一个实施方案中，MANS相关的肤用于治疗或预防癌细胞转移、癌 细胞增殖、肿瘤细胞生长、或血管生成。
[0013] 在一个方面，提供了用于治疗或预防癌症的组合物和方法，包括将MARCKS-抑制性 化合物施用于癌细胞或在癌细胞的发育、维持、增殖或转移中起作用的细胞。在一个实施方 案中，提供了用于抑制癌细胞转移的方法，包括对癌细胞施用转移抑制量的MARCKS-抑制性 化合物。在一个实施方案中，提供了用于抑制癌细胞转移的方法，包括对癌细胞施用转移抑 制量的MANS相关的肤。在另一个实施方案中，提供了用于在肿瘤中抑制癌细胞转移的方法， 包括对癌细胞施用转移抑制量的肤，所述肤具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID N0:1至 沈Q ID NO:231(含）、沈Q ID NO:234、和沈Q ID NO:235;其中所述肤序列的N末端和/或C末 端氨基酸任选地经化学修饰。在另一个实施方案中，提供了用于在对其有需要的受试者中 治疗癌症的方法，所述方法包括对所述受试者施用治疗有效量的MANS相关的肤。在另一个 实施方案中，提供了用于在对其有需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括对所述 受试者施用治疗有效量的肤，所述肤具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID N0:1至SEQ ID NO :231(含）、SEQ ID NO :234、和SEQ ID NO :235;其中所述肤序列的N末端和/或C末端氨基 酸任选地经化学修饰。
[0014] 在一个实施方案中，所述肤的N末端氨基酸通过肤的N末端氨基酸酷化而被化学修 饰，所述酷化呈选自下组的酷胺的形式：
[0015] -C2(乙酷基)至C24脂肪族簇酸的酷胺，所述脂肪族簇酸可W是线性的、分枝的、饱 和的、或不饱和的，
[0016] -S氣乙酸的酷胺，
[0017] ?苯甲酸的酷胺，和
[0018] ? Cl至C24脂肪族烷基横酸的酷胺;或者
[0019] ?所述肤的N末端氨基酸的N末端胺基可用选自下组的基团烷基化：
[0020] ? Cl至C24脂肪族烷基基团，
[0021 ].线性2-(打至C24脂肪族烷基)氧乙基基团，
[002引 ? CO-甲氧基-聚化締氧基)n-乙基基团，其中n为0至10。
[0023] 在进一步的实施方案中，所述N末端酷胺选自乙酷基和肉豆違酷基。
[0024] 在另一个实施方案中，所述肤的C末端氨基酸是经化学修饰的，所述化学修饰通过 在肤的C末端氨基酸的C末端簇酸基团处形成酷胺而进行，所述酷胺呈选自下组的酷胺形 式：
[00巧]?氨的酷胺，
[0026] ? Cl至C24脂肪族烷基胺的酷胺，
[0027] ?径基取代的C2至C24脂肪族烷基胺的酷胺，
[002引 ?线性2-(打至C24脂肪族烷基)氧乙基胺基团的酷胺，和
[0029] ? CO-甲氧基-聚化締氧基)n-乙胺基团的酷胺，其中n为0至10。
[0030] 在一个实施方案中，分别提供了用于抑制癌细胞转移的方法，或用于治疗癌症的 方法，包括对癌细胞或受试者施用MANS相关的肤。在一个实施方案中，所述肤选自下组:N-肉豆違酷-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA ( SEQ ID N 0 : 1 ) ; N - 肉豆違酷-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAパ沈QIDNo:2);N-肉豆違酷-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAA(SEQID No:4);N-肉豆違酷-GAQFSKTAAKGEAAAERPGEA(SEQ ID No:7);N-肉豆違酷-GAQFSKTAAKGEAAAERPGE(SEQ ID No:ll);N-肉豆違酷-GAQFSKTAAKGEAAAERPG(SEQ ID No: 16) ;N-肉豆違酷-GAQFSKTAAKGEAAAERP(SEQ ID No:22) ;N-肉豆違酷-GAQFSKTAAKGEAAAER (SEQ ID No:29);N-肉豆違酷-GAQFSKTAAKGEAAAE(SEQ ID No:37);N-肉豆違酷-GAQFSKTAAKGEAAA(SEQ ID No:46);N-肉豆違酷-GAQFSKTAAKGEAA(SEQ ID No:56);N-肉豆 違酷-GAQFSKTAAKGEA(沈Q ID No:67);N-肉豆違酷-GAQFSKTAAKGE(SEQ ID No:79);N-肉豆 違酷-GAQFSKTAAKG(SEQIDNo:92);N-肉豆違酷-GAQFSKTAAK(SEQIDNo:106);N-肉豆違 酷-GAQFSKTAA(SEQIDNo:121);N-肉豆違酷-GAQFSKTA(沈QIDNo:137);N-肉豆違酷-GAQFSKT(SEQIDNo:154);N-肉豆違酷-GAQFSK(SEQIDNo:172)，N-肉豆違酷-GAQFS(沈Q IDNo:191)，N-肉豆違酷-GAQF(SEQIDNo:211)，N-乙酷-RGAQFSKTAAK(SEQIDNo:2：M)， N-乙酷-RGAQFSKTAAK-N肥（沈Q ID No:2：M)，N-乙酷-RAKGE(沈Q ID N0:235)，及其组合。 [0031 ] 在一个实施方案中，所述肤选自下组:N-乙酷-GAQFSKTAAK(SEQ ID No:106;BI0- 11006);N-肉豆違酷-AKGE(沈Q ID No:219;BI0-91200);N-肉豆違酷-GAQFSKTAAK-N肥（沈Q ID No:106;BI0-11002);N-肉豆違酷-GAQFSKTAAK(沈Q ID No:106;BI0-11000);N-乙酷-GAQFSKTAA(SEQIDNo:121;BI0-10901);N-肉豆違酷-GAQFSKTAAK(SEQIDNo:121;BI0-10900);和N-乙酷-GAQFSKTAAK-N肥（沈Q ID No:106)。在一个实施方案中，一些氨基酸Wd-构象存在。例如，在一个实施方案中，所述肤是N-乙酷-GAQFS(c〇KTAA(c〇K(SEQ ID N0:106; BIO-11037)，其中在所述肤的位置6和10处的赖氨酸化)是d-构象的。
[0032] 在一些实施方案中，MANS相关的肤展示出能使其适于在治疗应用中，例如在癌症 的治疗中使用的特性。例如，在一个实施方案中，本申请公开的一些MANS相关的肤展示出相 对于(除MANS相关的肤W外的）一种或多种MANS肤增强的溶解性。在另一个实施方案中，本 申请提供的一些MANS相关的肤在血浆中展现出比（除MANS相关的肤W外的）一种或多种 MANS肤更长的半衰期。
[0033] 在一个实施方案中，MARCKS相关的肤展现出降低的癌细胞迁移。例如，在一个实施 方案中，用mans相关的肤（例如BI0-11006、BI011002、BI010901、BI010900、BI011000、或 BI0-91200)预处理癌细胞，在W约IOwii肤至约200WI1肤预处理细胞;或W约20皿至约200皿 预处理细胞;或W约25WI1肤至约75WI1肤预处理细胞时，降低癌细胞的迁移。在一个实施方案 中，当W约化M至约500yM、约扣M至约250測、或约IOiiM至约200測的浓度施用时，所述MARCKS 相关的肤展示出降低的癌细胞迁移。在一个实施方案中，当W约化M、约扣M、约lOiiM、约25y M、约50yM、约1 OOiiM、约150yM、约200yM、或约SOOiiM的浓度施用时，所述MARCKS相关的肤展示 出降低的癌细胞迁移。在一个实施方案中，在体外用所述肤处理癌细胞W确定肤的效果。在 一个实施方案中，癌细胞来源于患者。在进一步的实施方案中，在体外用所述肤处理癌细胞 W确定患者是否很可能响应于肤的治疗。
[0034]在一个实施方案中，当W约O.Olmg/kg/天至约lOmg/kg/天的浓度施用于患者时， MRCKS相关的肤展现出降低的癌细胞转移。在进一步的实施方案中，当W约O.lmg/kg/天至 约5.Omg/kg/天的浓度施用于患者时，MARCKS相关的肤展现出降低的癌细胞转移。在更进一 步的实施方案中，当W约0.5mg/kg/天至约2.5mg/kg/天的浓度施用于患者时，MARCKS相关 的肤展现出降低的癌细胞转移。例如，当W约0.01、约0.05、约0.1、约0.5、约0.75、约1.0、约 1.25、约1.5、约1.75、约 2.0、约 2.25、约 2.5、约 2.75、约 3.0、约 3.5、约 4.0、约 5.0、约