基于蟾酥提取物的抗脑胶质瘤药物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及抗肿瘤药物，特别设及基于赡酥提取物的抗脑胶质瘤药物及其制备方 法。
【背景技术】
[0002] 脑胶质瘤是由于大脑和脊髓胶质细胞癌变所产生的一种最常见的原发性烦脑肿 瘤，约占烦内肿瘤的35%~61%，其侵袭性强，预后差，是病死率和致残率都较高的恶性肿 瘤。脑胶质瘤在发病之初，通常没有典型的症状，并且胶质瘤位于重要功能区及深部的侵袭 性生长特征，使其难W全切，对放化疗也不甚敏感，非常容易复发。而化学药物和一般的抗 肿瘤中药，因很难同时具有杀伤脑胶质瘤细胞和透过血脑屏障两方面作用，疗效也不理想， 导致脑胶质瘤至今仍是全身肿瘤中预后最差的肿瘤之一。因此，研发相对高效低毒的新型 抗脑胶质瘤化疗药物成为临床上亟待解决的问题，同时也是当前世界研究的前沿课题和热 点领域。
【发明内容】
[0003] 针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供基于赡酥提取物的抗脑胶质 瘤药物及其制备方法，该制剂可与大脑毛细血管内的内皮细胞结合，将药物透膜传递入脑， 或是通过吸附介导包吞转运作用，提高药物的脑祀向性，从而可使赡毒配基在脑中的分布 进一步增加，通过诱导细胞的调亡起到抗脑胶质瘤的作用。
[0004] 为了达到上述目的，本发明通过W下技术方案予W实现。
[0005] 技术方案一：
[0006] 本发明的一种基于赡酥提取物的抗脑胶质瘤药物，为赡毒配基亚微乳制剂(BU-SCP)，其特征在于，其IOOmL标准剂量组分为：50mg赡酥提取物，IOg中链甘油S醋(MCT)，3g 卵憐脂，0.地泊洛沙姆188(F-68)，2.5g甘油，0.05g油酸钢，其余为注射用水。
[0007] 所述赡酥提取物中赡毒灵、华赡酥毒基和脂赡毒配基综合含量大于95%。
[000引上述赡毒配基亚微乳制剂(BU-SCP)的制备方法，其特征在于，其IOOmL标准剂量的 制备包括W下步骤：
[0009] (1)将3g卵憐脂和50mg赡酥提取物，分别加入IOg中链甘油S醋(MCT)中，加热揽拌 溶解，得到澄清的含药的油相；
[0010] (2)将0.2g泊洛沙姆188(F-68)、0.05g油酸钢和2.5g甘油加入注射用水中，70°C下 加热揽拌使溶解制得水相；
[0011] (3)在高速分散机的揽拌下，将油相加入至水相中，继续揽拌，制得初乳；
[001^ (4)将初乳用盐酸溶液调节抑值，用注射用水定容至IOOmL,冷却，转移至高压均质 机中均质，装瓶，充氮气，封口，高压灭菌，取出后于冷水浴降溫，即得。
[0013] 上述技术方案的进一步改进和特点在于：
[0014] 步骤(1)中，所述加热的溫度为78°C，时间为30min。
[0015] 步骤(3)中，所述高速分散机的转速为12,000巧m，揽拌时间为3min。
[0016] 步骤(4)中，所述的盐酸溶液的浓度为0.1mol ? L-i，pH值在5~6.5之间。
[0017] 步骤(4)中，高压均质机的压力为8(K)bar，均质8次。
[001引步骤(4)中，高压灭菌溫度为12rc，时间为lOmin。
[0019] 技术方案二：
[0020] 本发明的一种基于赡酥提取物的抗脑胶质瘤药物，为赡毒配基纳米粒制剂(BU-NPP)，其特征在于，其IOOmL标准剂量组分为:50mg赡酥提取物，2.0单硬脂酸甘油醋，0. Sg中 链脂肪酸甘油醋，0.5旨油酸，2.0旨卵憐脂化19〇1(1^;8(脚），1.5旨泊洛沙姆188。111'〇11王。 F68)，0.3g脱氧胆酸钢，其余为注射用水。
[0021 ]所述赡酥提取物中赡毒灵、华赡酥毒基和脂赡毒配基综合含量大于95 %。
[0022]上述赡毒配基纳米粒(BU-NPP)的制备方法，其特征在于，包括W下步骤：
[002引（1)称取50mg赡酥提取物，2. Og单硬脂酸甘油醋，0 . Sg中链脂肪酸甘油醋，0.5g油 酸，水浴加热下磁力揽拌溶解，得到透明均一的油相；
[0024] (2)将2.0g卵憐脂化ipoi扑:80竣），1.5g泊洛沙姆188(PluronicF68)，0.3g脱氧胆 酸钢加到注射用水中，磁力揽拌下加热，分散溶解得到水相；
[0025] (3)在磁力揽拌下，趁热将水相滴加入相同溫度油相中，超声分散，揽拌条件下，冰 水浴冷却，无菌条件下，用滤膜滤过除菌，即得。
[0026] 上述技术方案的进一步改进和特点在于：
[0027] 步骤(1)中，水浴溫度为75°C。
[0028] 步骤(2)中，所述磁力揽拌的转速为5(K)r/min，加热溫度为75°C。
[0029] 步骤(3)中，所述的水相滴加速度为lOmL/min，磁力揽拌时间为5min，超声时间为 1 Omin,滤膜孔径为0.22皿。
[0030] 本发明在制备抗脑胶质瘤药物中的应用，通过对不同浓度的脚-S和脚-SCP处理过 的胶质瘤U87-MG细胞MTT检测，证明对胶质瘤细胞的杀伤作用;通过AnnexinV-門TC/PI双染 试剂盒结合流式细胞术(FCM)检测BU-SCP对细胞调亡的影响;通过不同浓度的BU-SCP对裸 鼠原位移植脑胶质瘤进行作用，与常规临床药物替莫挫胺注射液(Temozolomide，TMZM)W 及阴性对照组进行比对，通过核磁共振扫描技术和活体动物体内巧光成像技术检测裸鼠脑 胶质瘤的体积和肿瘤的信号强度;通过皿染色（苏木精-伊红染色法，hematoxylin-eosin staining,肥)对脑胶质瘤进行病理学检查;免疫组化技术检(S-IOO)和(GFAP)蛋白的表达； W此证明，BU-S和脚-SCP具有体内抗脑胶质瘤的作用，且BU-S和BU-SCP对脑胶质瘤的杀伤 作用与诱导细胞的调亡有关。
[0031] 与现有技术相比，本发明具有W下优点及有益的技术效果：
[0032] (1)本发明制备的赡毒配基亚微乳制剂(BU-SCP)的外观为白色均匀乳状液体，粒 径100~200nm，zeta电位-30~40mV，药物的包封率在85%W上，pH值为5~6.5。
[0033] (2)本发明制备的赡毒配基纳米粒(BU-NPP)呈带有蓝色乳光的澄明液体，粒径50 ~100nm，ze化电位在-15~20Mv，药物的包封率在85%W上，pH值为6.5~7.5。
[0034] (3)MTT检测细胞活力表明，BU-SCP和脚-NPP的细胞增殖抑制有明显的量效关系， AnnexinV-FITC/PI流式细胞仪结果表明，随着脚-SCP和脚-NPP浓度的增大，U87-MG细胞的 调亡率明显上升;免疫组化结果显示脑肿瘤诊断的免疫学标记蛋白（S-IOO) W及星形细胞 胶质瘤的特异性表达蛋白（GFAP)分别在胞浆和胞核高表达，表明裸鼠造模成功;活体动物 体内巧光成像检测各组裸鼠体内肿瘤的信号强度表明BU-SCP和BU-NPP在裸鼠体内发挥抗 脑胶质瘤作用，在实验的数据范围内成剂量依赖性，且BU-SCP和BU-NPP的抗脑胶质瘤作用 强；核磁扫描技术动态监测裸鼠脑胶质瘤的体积表明BU-SCP和BU-NPP对裸鼠脑胶质瘤的 增殖抑制作用成剂量依赖性。BU-SCP和脚-NPP呈时间-剂量依赖性地显著抑制U87-MG细胞 生长，通过诱导细胞的调亡杀伤肿瘤细胞，BU-SCP和BU-NPP在裸鼠体内均有明显的抗脑胶 质瘤活性，且脚-SCP和脚-NPP在实验范围内呈剂量依赖性。
[0035] (4)赡毒配基亚微乳制剂(BU-SCP)和赡毒配基纳米粒(BU-NPP)可与大脑毛细血管 内的内皮细胞结合，将药物透膜传递入脑，或是通过吸附介导包吞转运作用，提高药物的脑 祀向性，从而可使赡毒配基在脑中的分布进一步增加，通过诱导细胞的调亡起到抗脑胶质 瘤的作用。
【附图说明】
[0036] 下面结合附图和【具体实施方式】对本发明做进一步详细说明。
[0037] 图1为BU-S对人脑胶质瘤U87-MG细胞增殖抑制作用的示意图，图中横坐标是