罗丹明染料的单一同分异构结合物的利记博彩app
【专利说明】
[000。 本申请是申请日为2011年4月1日、申请号为201180022119. 3、发明名称为"罗 丹明（RH0DAMI肥）染料的单一同分异构结合物"的发明专利申请的分案申请。
[0002] 巧关申请案香叉参考
[0003] 本申请案主张2010年4月2日申请的美国临时专利申请案第61/320, 571号的权 利，此案件的内容W引用方式并入本文中。
技术领域
[0004] 概括来说，本发明设及新颖罗丹明（rhodamine)染料，其在与另一分子结合时形 成单一同分异构结合产物。
【背景技术】
[0005]罗丹明染料发巧光，且已作为游离染料和与诸如蛋白质和抗体等较大分子的结合 物二者广泛地用于研究（李S化eeS)，麦克奥利菲DJ(McAuliffeDJ)，柯达玛T化odama T)，道卡斯AG值oukasAG)，使用激波管的活体内经皮递送（Invivotransdermal deliveryusingashock1:ube)，激波（ShockWaves) (2000) 10 :307-307 ;杰森LWQanson LW)，雷格斯戴尔K(RagsdaleK)，卢比-菲尔斯K(Luby-PhelpsK)，富肌动蛋白胞质 结构域的空间排阻的机制和大小截止值（Mechanismandsizecutoffforsteric exclusionfromactin-richcytoplasmicdomains)，生物物理学期干。度iophysJ) (1996)71 :1228-1234:普R(Pu时，鲁宾逊KR(RobinsonKR)，岩藻扁鹿角菜的早期发育中 的胞质巧梯度和巧调蛋白（切toplasmiccalciumgradientsandcalmodulininthe earlydevelopmentofthefucoidalga化Ivetiacompressa)，细胞科学期刊（JCell Sci) (1998) 111(第 21 篇）：3197-3207:西屋T(NishiyaT)，熊本E〇(ajitaE)，堀之内 T(HorinouchiT)，西本A(NishimotoA),美和S(Miwa巧，TIR和非TIR区域在MyD88 的亚 细胞定位和信号传导特性中的不同角色值istinctrolesofTIRandnon-TIRregions inthesubcellul曰rlocalizationandsign曰lingpropertiesofMyD88)，欧妍性物 化学学会联合会快报（阳BSLett) (2007)581 :3223-3229 ;坦纳GAO'annerGA)，森杜瓦 RM(SandovalRM)，邓恩KW值unnKW)，正常和囊性大鼠肾脏中横基巧光素分泌的两光子活 体内显微镜检查（Two-photoninvivomicroscopyofsulfonefluoresceinsecretion innormaland巧Sticratki化eys)，美国生理学与肾生理学期刊（AmJPhysiolRenal Physiol)(2004)286:F152-F160)。
[0006] 在结构上，罗丹明是一族具有咕吨核屯、的相关多环状巧光酬（flurone)染料。
[0007]
[000引罗丹明的一般结构如下：
[0009]
[0010] 罗丹明的胺可为伯胺、仲胺或叔胺。
[0011] 一种常用的巧光罗丹明染料是含有久洛尼定（julolidine)结构元素的横基罗丹 明 101 :
[0012]
:久絡渥歲幾构元素
[0013] 横基罗丹明101含有如下所示的二官能横酷基：
[0014]
'·0 横基罗丹明101
[0015] 横酷基罗丹明101已经用于包含巧成像方法W及星形胶质细胞的复染色的神 经生理学实验中（尼默加翰A.(化mmerj址n，A.)，科奇豪伏F. (Kirdihoff，F.)，科尔 J.N.化err,J.N.)，海默翰F.化elmchen，F.)，横基罗丹明101作为活体内新皮质中的星 形胶质的特定标记（Sulforhodamine101 曰s曰specificmarkerofastrogliainthe neoco;rtexinvivo),自然方法（化 1:ureMethods) (2004) 1 :31-7)。
[0016] 横基罗丹明101的横酷氯衍生物W商标德克萨斯红（TexasRed)壊由西格玛-奥 德里奇（SigmaA1化ich)公司（圣路易斯（St.Louis),密苏里州（M0))出售。其用于与诸 多官能团、尤其与伯胺结合。德克萨斯红?在约615nm下发巧光，且峰吸收在589nm处。德 克萨斯红獲通常作为S〇3和SO2C1基团可如下文所示交换的两种单横酷氯的混合物获得：
[0017]
?.
[0018] 其它罗丹明衍生物还掲示于（例如）PCT国际申请案（PCTInt.Appl.) (2009)， WO2009108905A2 20090903;美国专利申请公开案化S.化t.Appl.Publ.)第 2004054162 A1 20040318号；美国专利第5728529号；美国专利第5686261号；PCT国际申请案（1997)， W0 9700967A1 19970109 ;英国专利申请案（1995)，GB2283744A19950517 中；W及由金 化im)等人（金T.G.化im，T.G.);卡斯特罗J. "Castro,J.C);类德特A.化oudet，A.); 焦J.G. -S. (Jiao,J.G. -S.);豪彻斯哈勒R.Μ.化ochstrasser，R.Μ.);伯吉斯K.度urgess， K.);托普Μ.R. (Τορρ，Μ.R.)，物理化学期刊AQournal0巧hysicalQiemistryA) (2006)， 110(1),20-27)掲示。
[0019] 尽管数个出版物显示使用二官能罗丹明染料用于结合的可能性，例如通过德克 萨斯红演中的一个横酷氯基团的选择性反应（泰特斯JA(TitusJA)，郝格兰R(Haugland 时，莎茹SO(化arrowSO),西格尔DM(SegalDM)，德克萨斯红，一种与巧光素一起用 于双参数流动显微巧光测定和巧光显微镜研究的亲水性发红光巧光团灯exasRed,a hydrophilic?red-emittingfluorophoreforusewithfluoresceinindualparameter flowmicrofluorometricandfluorescencemicroscopicstudies)，免疫学方法其月甲J (J.Immunol.Me化ods) (1982) 50 (2) : 193-204)，但双重反应性的可能性使得难^建立可靠 的仅获得单一同分异构体产物的方法，此显示于图1中，其中具有两个礦醜基的二官能罗 丹明染料与伯胺反应而形成两种结合同分异构产物。在一个工艺中两种同分异构结构而 不是仅一种结构造成两个主要缺点：1)各批间同分异构体的比率有所变化，且产物影响效 应，和2)监管要求（毒性数据、稳定性、表征等）将加倍W涵盖两种物质而不是一种物质。
[0020] 本发明通过使用在罗丹明分子上仅具有一个用于结合的单一官能团的罗丹明染 料的新颖单官能衍生物由此其结合产物是单一同分异构结合产物而避开运些困难。
[0021] 本发明的运些和其它方面和属性将参照W下图式和随附说明书予W论述。
【发明内容】
[0022] 本发明提供一种组合物，其包含具有W下一般结构的罗丹明（rhodamine)染料或 其盐：
[0023]
[0024] 其含有单一官能团，其中R1、R2、R3、R4和R5独立选自如下：
[00巧]R5 为H、
[0026]
[0027]
[0028] R4 为H，
[0029]
[0030] R3为H，
[0031]
[0032]
[0035] 且R1 为H，
[0036] 其中所述罗丹明染料能够经由所述官能团与另一分子结合；W及其中取代基上的 Ar是芳基，取代基上的所述R1或R2形成间隔基团，所述间隔基团在R1或R2上含有适于与 另一分子结合的单一官能团。
【附图说明】
[0037] 图1显示二官能罗丹明染料与高分子结合形成两种同分异构结合产物；
[0038] 图2显示单官能罗丹明染料与高分子结合形成仅一种单一同分异构结合产物； [003引图3显示从8-径基久洛尼定（2当量）和经取代苯甲醒（1当量，其中Ri、R2、尺3、 R4和Re可为Η或任一基团）形成本发明的新颖罗丹明染料；
[0040] 图4显示在Ugi反应条件下具有单官能团的罗丹明染料与高分子之间的一般结合 反应；且
[0041] 图5是具有单一官能伯氨基的单官能2-横基罗丹明（2-SHR)染料与簇甲基化葡 聚糖经由Ugi反应结合形成单一同分异构结合产物的实例；
[0042] 图6是W400nm/分钟的扫描速度从200皿扫描到800皿时化合物18的UV吸收 光谱；
[0043] 图7是化合物18的巧光发射扫描；
[0044] 图8是化合物18的巧光激发扫描；
[0045] 图9是化合物18的Ξ维巧光扫描，其中EM是发射波长且EX是激发波长；
[0046] 图10是W400nm/分钟的扫描速度从200nm扫描到800nm时实例26的结合物的 uv吸收光谱；
[0047]图11是实例26的结合物的巧光发射扫描；
[0048] 图12是实例26的结合物的巧光激发扫描；且
[0049]图13是实例26的结合物的Ξ维巧光扫描，其中EM是发射波长且EX是激发波长。
【具体实施方式】
[0050] 尽管本发明容许呈许多不同形式的实施例，但本文将详细阐述特定实施例，应理 解，本发明视为本发明原理的范例且不打算将本发明限于所阐释的特定实施例。
[0051] 应理解，用于界定本发明化合物的化学结构是可表示每一给定结构的可能共振结 构中的一者的各自表示。此外，应理解，根据定义，共振结构仅为所属领域的技术人员用于 表示电子离域的图示，且本发明并不W任何方式通过显示给定结构的一种特定共振结构加 W限制。
[0052] 还应理解，用于界定本发明化合物的化学结构还包括其各别盐形式的结构。
[0053] 概括来说，本发明设及新颖罗丹明染料，其在与另一分子结合时形成单一同分异 构结合产物。
[0054] 尽管数个出版物显示使用二官能罗丹明染料用于结合的可能性，例如通过德克萨 斯红唆中的一个横酷氯基团的选择性反应（泰特斯JA，郝格兰R，莎茹S0,西格尔DM，德克 萨斯红，一种与巧光素一起用于双参数流动显微巧光测定和巧光显微镜研究的亲水性发红 光巧光团，免疫学方法期刊（1982)50(2) :193-204),但双重反应性的可能性使得难W建立 可靠的仅获得单一同分异构体产物的方法。如图1中所示，具有两个横酷基的二官能罗丹 明染料与伯胺反应而形成两种结合同分异构产物。在一个工艺中两种同分异构结构而不是 仅一种结构造成两个主要缺点：1)各批间同分异构体的比率有所变化，且产物影响效应， 和2)监管要求（毒性数据、稳定性、表征等）将加倍W涵盖两种物质而不是一种物质。
[00巧]本发明通过使用在罗丹明分子上仅具有一个用于结合的单一官能团的罗丹明染 料的新颖单官能衍生物由此其结合产物是单一同分异构结合产物而避开运些困难，如图2 中所阐释。图2阐释本发明的实例，其中具有单一横酷基的罗丹明衍生物与伯胺反应而仅 形成单一同分异构结合产物。"官能团"意指适于结合的基团。适于结合的官能团可与另一 分子（例如高分子）反应，W经由共价键形成结合物。仅含有一个"官能团"的罗丹明衍生 物称为单官能化或单官能衍生物（例如图2中的单横酷基罗丹明），其有别于含有