肉苁蓉苯乙醇苷类提取物作为制备防治肝纤维化药物的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及肉巧蓉苯己醇巧类提取物的应用技术领域，是一种肉巧蓉苯己醇巧类 提取物作为制备防治肝纤维化药物的应用。
【背景技术】
[0002] 肝纤维化。胎paticfibrosis,Η巧是肝脏遭受反复或慢性损伤后的一种损伤与 修复过程，主要与慢性炎症和引起慢性肝脏损伤的化学因素相关，已成为一个发病率和死 亡率都很高的世界医学难题，各种肝病多数经肝纤维化最后发展为晚期的肝硬化，成为肝 病死亡的主要原因。目前研究已经明确：肝纤维化是细胞外基质（ECM)合成与降解失衡的 动态过程；肝纤维化及早期肝硬化是完全可W逆转的。
[0003] 中医药治疗肝纤维化有悠久的历史和肯定的临床疗效，研究证实，中医药治疗肝 纤维化具有多祀点、多环节、多途径复合作用的特点。中药肉巧蓉具有补肾益气、养血润燥 等功效，素有"沙漠人参"之称，临床应用已有数千年的历史。近年来肉巧蓉W其显著的生 物活性倍受人们的关注。其化学成分及药理作用研究显示，苯己醇巧类化合物（CPhGs)是 肉巧蓉发挥药效的主要物质基础之一。该类化合物具有抗氧化、抗抑郁、抗炎、抗病毒、抗肿 瘤、抗菌和免疫调节等多种生物活性。Peter于1989年首次发现苯己醇巧类化合物(松果菊 巧)具有显著的保肝护肝作用，随后引起人们对CPhGs进行抗肝纤维化研究的兴趣。通过文 献检索，尚未有关于肉巧蓉苯己醇巧提取物用于防治肝纤维化的报道。
【发明内容】
[0004] 本发明提供了一种肉巧蓉苯己醇巧类提取物作为制备防治肝纤维化药物的应用， 首次公开了肉巧蓉苯己醇巧类提取物作为制备防治肝纤维化药物的应用。
[0005] 本发明的技术方案是通过W下措施来实现的；一种肉巧蓉苯己醇巧类提取物作为 制备防治肝纤维化药物的应用。
[0006] 下面是对上述发明技术方案的进一步优化或/和改进： 上述苯己醇巧类提取物按下述步骤得到：第一步，将干燥的肉巧蓉属植物粉碎后得到 肉巧蓉粉碎物，将肉巧蓉粉碎物用体积分数为70%至95%的己醇水溶液进行回流提取，回流 提取的次数为2次至3次，每次回流提取的时间为2小时至3小时，将每次回流提取的提取 液进行合并后得到总提取液，其中，每千克肉巧蓉粉碎物用0. 8升至0. 9升体积分数为70% 至95%的己醇水溶液进行回流提取；第二步，将总提取液经过AB-8树脂纯化后得到肉巧蓉 苯己醇巧类提取物。
[0007] 上述肉巧蓉属植物为肉巧蓉或盐生肉巧蓉或管花肉巧蓉。
[0008] 本发明首次公开了肉巧蓉苯己醇巧类提取物作为制备防治肝纤维化药物的应用， 肉巧蓉苯己醇巧类提取物抗肝纤维化的疗效明显，能够抑制肝星状细胞的活化与增殖，减 少胶原合成，促进胶原的降解，降低肝纤维化肝组织中的胶原及肝组织的居脯氨酸含量，从 而抑制细胞外基质的合成，起到抗肝纤维化的作用，为肝纤维化疾病的防治提供了新方向。【附图说明】
[0009] 附图1为各组SD大鼠肝组织Masson染色结果图（MassonX200)。
[0010] 附图2为各组SD大鼠肝组织免疫组化I型胶原表达的结果图（I型胶原X200)。
[0011] 附图3为各组SD大鼠肝组织免疫组化III型胶原结果图狙I型胶原X200)。
[001引附图4为各组SD大鼠肝组织免疫组化TGF- 1结果图灯GF- iX200)。
[0013] 附图1至4中，A至F依次为正常对照组、肝纤维化模型组、复方整甲软肝片阳性 对照组、CPhGs高剂量组、CPhGs中剂量组和CPhGs低剂量组。
【具体实施方式】
[0014] 本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体 的实施方式。
[0015] 下面结合实施例对本发明作进一步描述： 实施例1:肉巧蓉苯己醇巧类提取物作为制备防治肝纤维化药物的应用。
[0016] 实施例2;与上述实施例的不同之处在于，苯己醇巧类提取物按下述步骤得到：第 一步，将干燥的肉巧蓉属植物粉碎后得到肉巧蓉粉碎物，将肉巧蓉粉碎物用体积分数为70% 至95%的己醇水溶液进行回流提取，回流提取的次数为2次至3次，每次回流提取的时间为 2小时至3小时，将每次回流提取的提取液进行合并后得到总提取液，其中，每千克肉巧蓉 粉碎物用0. 8升至0. 9升体积分数为70%至95%的己醇水溶液进行回流提取；第二步，将总 提取液经过AB-8树脂纯化后得到肉巧蓉苯己醇巧类提取物。AB-8树脂为市售的AB-8树 脂。
[0017] 实施例3;与上述实施例的不同之处在于，肉巧蓉属植物为肉巧蓉或盐生肉巧蓉 或管花肉巧蓉。
[0018] 下面为根据本发明中上述实施例的肉巧蓉苯己醇巧类提取物作为制备防治肝纤 维化药物的应用的具体药理试验： 1.实验方法 雄性健康SD大鼠75只，SPF级，体重180g至220g，由新疆医科大学实验动物中 必提供，动物生产许可证号；SCXK(新）2011-0004,SPF环境实验动物使用许可证号： SYXK(新）2011-0004。将上述75只雄性健康SD大鼠随机分为6组，即正常对照组、肝纤维 化模型组、复方整甲软肝片阳性对照组（600mg/kg)、肉巧蓉苯己醇巧类提取物（CPhGs)高 剂量组巧00mg/kg)、肉巧蓉苯己醇巧类提取物（CPhGs)中剂量组（250mg/kg)、肉巧蓉苯己 醇巧类提取物（CPhGs)低剂量组（125mg/kg)，CPhGs高剂量组、CPhGs中剂量组和CPhGs低 剂量组的SD大鼠均为13只，其余每组各12只。除正常对照组外，肝纤维化模型组、复方整 甲软肝片阳性对照组、CPhGs高剂量组、CPhGs中剂量组和CPhGs低剂量组的SD大鼠均采用 朱启贵等的方法制备免疫性肝纤维化模型，造模分为致敏阶段和尾静脉攻击阶段。采用朱 启贵等的方法制备免疫性肝纤维化模型为现有公知技术。
[0019] 在致敏阶段，除正常对照组注射生理盐水（0. 5mL/只）W外，其余各组动物均多点 皮下注射含BSA的弗氏不完全佐剂，BSA(牛血清白蛋白）的浓度为9mg/mL，0. 5mL/次，共五 次，前两次注射的时间间隔为14天，后Η次注射的时间间隔为7天，末次致敏注射后1周， 肝纤维化模型组、复方整甲软肝片阳性对照组、CPhGs高剂量组、CPhGs中剂量组和CPhGs低剂量组的每只动物于眼她静脉丛采血，采用双向扩散法检测SD大鼠血清抗BSA抗体，除 正常对照组外，其余各组的BSA抗体均呈阳性，抗体呈阳性的SD大鼠继续进行尾静脉攻击， 即肝纤维化模型组、复方整甲软肝片阳性对照组、CPhGs高剂量组、CPhGs中剂量组和CPhGs 低剂量组的SD大鼠尾静脉注射BSA，一周2次，连续5周，注射剂量由2mg/只逐渐递增至 4mg/只；正常对照组尾静脉注射生理盐水。造模同时对肝纤维化模型组、复方整甲软肝片 阳性对照组、CPhGs高剂量组、CPhGs中剂量组和CPhGs低剂量组进行给药，除正常对照组 和肝纤维化模型组灌胃给予蒸傭水外，其余各组均按设定剂量灌胃给药(复方整甲软肝片 阳性对照组；600mg/kg/天的复方整甲软肝片；CPhGs高剂量组；500mg/kg/天的CPhGs, CPhGs中剂量组；250mg/kg/天的CPhGs,CPhGs低剂量组；125mg/kg/天的CPhGs);造模 结束后，除正常对照组和肝纤维化模型组继续灌胃给予蒸傭水4周外，其余各组均按设定 剂量继续灌胃给药4周。各组末次给药后禁食（不禁水）12h，称重，经戊己比妥钢腹腔注 射麻醉后，腹主动脉采血，35(K)r/min离必lOmin，分离血清，分装-2(TC冻存，W供检测血 清HA、LN、P过II、IV-C和TGF-A水平之用；采血后处死SD大鼠，取肝脏左叶同一部位，固 定，切片，胶原纤维Masson染色，进行病理组织学观察及免疫组化测定，在光镜下观察各组 SD大鼠肝组织Masson染色结果、各组SD大鼠肝组织免疫组化I型胶原表达的结果、各组 SD大鼠肝组织免疫组化III型胶原结果和各组SD大鼠肝组织免疫组化TGF- i结果，各组 SD大鼠肝组织Masson染色结果如图1所示，各组SD大鼠肝组织免疫组化I型胶原表达的 结果如图2所示，各组SD大鼠肝组织免疫组化III型胶原结果如图3所示，各组大鼠肝组织 免疫组化TGF- 1结果如图4所示。牛血清白蛋白免疫损伤所致的肝纤维化与临床上的慢 性肝炎所致的肝纤维化在发病机制上更加接近。
[0020] 实验结果 (1)检测正常对照组(正常组)、肝纤维化模型组(模型组)、复方整甲软肝片阳性对照组 (整甲软肝片组XCPhGs高剂量组偏剂量组）、CPhGs中剂量组冲剂量组）和CPhGs低剂 量组（低剂量组）的血清中的HA礎明质酸酶)、LN(层粘连蛋白XPCIII(III型前胶原)、 IV-C(IV型胶原）含量，正常组、模型组、整甲软肝片组、高剂量组、中剂量组和低剂量组的 血清中的HA、LN、PCIII、IV-C含量(单位；（mg/L))如表1所示。表1中的HA、LN、PCIII、 IV-C含量均W采±资表示，η为动物存活数。
[0021] 通过ΗΑ可较准确灵敏地反映肝内已生成的纤维量及肝细胞受损状况，是肝纤维 化和肝硬变的敏感指标；LN与肝纤维化活动程度及口静脉压力呈正相关，慢活肝和肝硬变 及原发性肝