用于静脉给药的干细胞组合物的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于静脉内给药的干细胞组合物，尤其涉及一种含有浓度为 1X107-5X10s细胞/ml的干细胞和赋形剂的用于静脉内给药的干细胞组合物，在所述组合 物中，干细胞具有适于静脉内给药的直径并以单个细胞的状态出现。
【背景技术】
[0002] 干细胞是指不仅具有自我复制能力还具有分化成至少两种类型的细胞的能力 的细胞，并可分为全能干细胞，多能干细胞（pluripotentstemcells)和专能干细胞 (multipotentstemcell)。全能干细胞是具有能发育成一个完整个体的全能性质的细胞， 从卵细胞与精子受精后直到8-细胞期的细胞拥有这些性质。当这些细胞被分离出来并被 植入子宫时，它们可以发育成一个完整的个体。多能干细胞具有发育成来源于外胚层、中胚 层和内胚层的各种细胞和组织的能力，多能干细胞来源于受精后的4-5天后生成的胚囊中 的内细胞团。这些细胞被称为"胚胎干细胞"，它们可以分化成各种其它的组织细胞但不形 成新的活生物体。专能干细胞只能分化成仅特异于包含有这些细胞的组织和器官的细胞， 专能干细胞不仅参与胎儿期、新生儿期和成体期中各种组织和器官的生长与发育，还参与 维持成体组织的体内平衡和当组织损伤时诱导再生的功能。组织特异性专能细胞被统称为 "成体干细胞"。
[0003] 通过从人的各种器官中提取细胞，并将这些细胞培养成干细胞而获得成体干细 胞，成体干细胞的特点是它们仅分化成特定的组织。然而近年来，将成体干细胞分化成包括 肝细胞在内的各种不同的组织的试验极为成功，成为了公众关注的焦点。特别地，人们已在 再生医学领域做出了努力以便通过利用细胞再生生物组织和器官，以及修复它们因疾病或 者事故等而丧失的功能。常用于再生医学领域的方法包含以下步骤：从病患收集干细胞、血 源单核细胞或者骨髓来源的单核细胞；通过管培养诱导所述细胞的增殖和/或者分化；以 及通过移植诱导所选未分化的（干细胞和/或祖细胞）和/或者分化的细胞进入病患的体 内。因此，用健康的细胞、组织或者器官替代受损细胞、组织或者器官的细胞/组织替代疗 法有望取代现有的通过药物或者外科手术治疗疾病的传统方法，并且因此对干细胞的应用 将会进一步增加，。
[0004] 因此，近年来，人们研究了干细胞的各种功能。特别地，自从利用间充质干细胞 的细胞疗法技术开始受到关注，已开发出改善从人体中分离出来的间充质干细胞使其适 于治疗目的的技术（W02006/019357,韩国专利No. 0795708,以及韩国专利No. 0818214， Leu,SteveLinetal. ,Journaloftranslationalmedicine, 8 (1) :63, 2010 ；Kim,J. M.etal.，Brainresearch，1183:43,2007,Kim，Young-Kietal. ,Journalofveterinary clicics, 28:122, 2011；ParkSS.etal. ,Cytotherapy, 14(5) :584, 2012 ；So〇-KyungKang etal·，StemCellsandDevelopment，15(4) :583,2006)D 干细胞不仅可以直接给予具有 关节炎或者退行性关节炎的损伤部位以发挥其治疗作用，还可以静脉给予。静脉内给药的 干细胞可被直接传送到损伤的身体部位例如损伤的器官从而发挥其治疗所述损伤部位的 作用，由此有望发挥出针对各种疾病的治疗作用，包括神经系统疾病、阿尔茨海默病、癌症、 糖尿病和风湿性关节炎。
[0005] 然而，涉及适于制备静脉内给药的干细胞组合物的方法的技术还未得到充分的研 究。
[0006] 因此，本申请的发明人为开发用于静脉内给药的干细胞组合物做出了广泛的努 力，所述干细胞组合物能安全地到达目标部位从而在所述目标部位发挥其治疗作用，结果 发现了一种用于静脉内给药的干细胞组合物，其含有在静脉内给药前既不会被破坏又不会 形成聚集体的干细胞，所述干细胞具有适于静脉内给药的直径，以单个细胞的状态出现并 以适于发挥其治疗作用的浓度包含在所述干细胞组合物中，由此完成本发明。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种用于静脉内给药的干细胞组合物。
[0008] 为了达到上述目的，本发明提供了一种用于静脉内给药的干细胞组合物，其含有 浓度为1X1〇7_5X10s细胞/ml的干细胞，在所述干细胞组合物中，干细胞具有10-20μm的 直径并且以单个细胞的状态出现。
[0009] 本发明的其它特征和实施例将在以下的详细描述和所附权利要求中更加清楚。
【具体实施方式】
[0010] 除另有定义之外，本发明用到的所有技术术语和科技术语具有与本发明所属技术 领域的普通技术人员通常地理解相同的含义。总体上，本发明用到的命名法是本技术领域 熟知并常用的。
[0011] 本发明用到的术语"干细胞"是指不仅具有自我复制能力还具有分化成至少两种 细胞类型的能力的细胞，"成体干细胞"是指在经发育过程后形成胚胎的各个器官的阶段或 者是在成体阶段都存在的干细胞。
[0012] 本发明用到的术语"间充质干细胞"是指从人或者哺乳动物的组织中分离出来的 未分化的干细胞，其可来源于各种组织。特别地，所述间充质干细胞可以是脐带来源的间充 质干细胞，脐带血来源的间充质干细胞，骨髓来源的间充质干细胞，脂肪来源的间充质干细 胞，肌肉来源的间充质干细胞，神经来源的间充质干细胞，皮肤来源的间充质干细胞，羊膜 来源的间充质干细胞，或者胎盘来源的间充质干细胞。从各组织中分离干细胞的技术在本 领域是已知的。
[0013] 本发明用到的"脂肪组织来源的间充质干细胞"是从脂肪组织中分离出来的未分 化的成体干细胞，本文中还被称为"脂肪来源的成体干细胞"，"脂肪干细胞"或者"脂肪来源 的干细胞"。这些细胞可根据本领域已知的传统方法获得。一种分离脂肪组织来源的间充 质干细胞的方法可以是，例如，如下所述。即，可通过培养由抽脂术获得的含有脂肪的悬浮 液（在生理盐水中）来分离脂肪来源的间充质干细胞，然后通过胰蛋白酶处理来收集贴附 在培养容器例如烧瓶上的干细胞层，或者用刮板刮擦直接收集这些悬浮在少量生理盐水中 的脂肪来源的间充质干细胞。
[0014] 本发明用到的表述"具有适于静脉内给药的尺寸的干细胞"指的是直径小于静脉 的直径，优选具有10-20μm的直径，更优选10-15μm的干细胞，从而干细胞能够在静脉内 给药后容易地移至目标部位以在所述目标部位发挥其活性，而不妨碍血液流动或者循环。
[0015] 本发明用到的术语"运输"是指通过运输工具如车辆来运输干细胞自身输送，含有 含干细胞的溶液的容器，等等，术语"储存"意在不仅包括在室温下的储存还包括在冷藏条 件下的储存。
[0016] 本发明用到的表述"防止干细胞的破坏和聚集"是指保持干细胞作为单个细胞的 形状，没有破坏或者聚集。例如，指在运输或者储存期间，干细胞被保持为单个细胞，没有细 胞膜的破坏或者细胞的聚集。
[0017] 干细胞可以通过各种途径被给予体内，例如，静脉内途径，动脉内途径或者腹膜内 的途径。在这些给药途径中，静脉内给药是实用的，其实用性在于它能简单并安全地治疗疾 病而无需外科手术。然而，为了使干细胞在静脉内给药后安全地到达目标部位，以在所述目 标部位发挥其治疗作用，应满足多种要求。
[0018] 首先，干细胞应该具有适于血管内给药的尺寸，从而不会在血管内给药后降低 血流速率或者形成血栓。从各种组织中分离出来的间充质干细胞根据病患、它们的来 源、或者培养条件或方法的不同而具有不同的形态或者不同程度地自我复制，并且还具 有10μηι-300μηι范围内的不同尺寸。然而，人毛细血管后微静脉的直径为20-50μηι，人 小动脉的直径为10_30ym(SchmidtGT, 1989)，以及毛细血管的直径为10ym(Schmidt GT, 1989 ；Chien, 1975；JohnRoss, 1991；Herbertetal. , 1989；ArthurandGuyton, 1997 ； Renkin, 1989 ;Gaehtgens, 1980;Row1979)。这些直径都小于一般的间充质干细胞的直径。 因此，当静脉内给药的间充质干细胞具有相对大的尺寸时，它们会影响到血管。特别地，所 述静脉内给药的间充质干细胞可以降低血流速率，而且还会妨碍血液循坏从而引起血液流 动受到阻碍，形成血栓，血管闭塞甚至死亡。考虑到这些副作用，据报道称，当小鼠被静脉内 给药直径为约20-53μπι的间充质干细胞时，老鼠的血流速率降低，并观察到诱发了心肌梗 塞以及形成血检（D.Furlanietal.MicrovasularResearch77 (2009) 370-376)。因此，重 要的是将具有合适尺寸的干细胞给予到血管内。
[0019] 此外，干细胞在血管内给药之前，不应被破坏或者聚集，在血管内给药之后，应 该保持单个细胞的状态并安全地到达目标部位，不被破坏或者形成聚集体。可用胰蛋 白酶处理干细胞以形成用于给予体内的单个细胞，但是即使干细胞已被制备成单个细 胞，在运输或者储存期间，还有一个问题，即干细胞的细胞膜被破坏或者细胞形成聚集 体。当无论是非单个细胞的聚集干细胞还是被破坏的细胞通过诸如静脉内给药的途径被 给予体内时，这些被给予的细胞会黏附在血管内皮细胞或者血小板上从而降低血流速率 或者妨碍血液循坏，甚至引起微血管或者血管的闭塞（D.Furlanietal.Microvasular Research77 (2009) 370-376)。因此，干细胞在血管内给药之前不应被破坏或者聚集，在血管 内给药之后应该保持单个细胞的状态并安全地到达目标部位，不被破坏或者形成聚集体。
[0020] 此外，应该给予一定浓度或者更高浓度的干细胞，使得到达目标部位的干细胞能 在所述目标部位发挥其治疗作用。因此，制备大量用于临床的干细胞是非常重要的