Nootkatone在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物Nootkatone的新用途，尤其涉及Nootkatone在制备治疗动脉 粥样硬化药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 心脑血管疾病是当代危害人体健康和生命的最严重病症，是中、老年人的常 见病和多发病，在许多国家和地区的发病率和死亡率皆位于重病之首。动脉粥样硬化 (atherosclerosis，AS)是心脑血管疾病的主要病理基础，迄今为止其病因和发病机理尚未 完全阐明，故目前没有简明有效地防治措施和治疗药物。
[0003] 本发明涉及的化合物Nootkatone是一个2014年发表（Kishor L, et al.，Total Synthesis of (±)-Nardoaristolone B and Its Analogues. Organic Letters， 2014, 16,4252-4255.)的新化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，具有驱虫作用（Kishor L, et al. , Total Synthesis of(±)-Nardoaristolone B and Its Analogues. Organic Letters，2014, 16, 4252-4255.)，对于本发明涉及的Nootkatone在制备治疗动脉粥样硬化 药物中的用途属于首次公开，由于属于全新的结构类型，而且其对于动脉粥样硬化的抑制 活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同 时用于动脉粥样硬化的防治显然具有显著的进步。
【发明内容】
[0004] 本发明就是针对上述问题提供Nootkatone在制备抗动脉粥样硬化药物中的应 用，用Nootkatone制备的抗动脉粥样硬化的药物，具有较好的疗效。
[0005] 本发明提供的技术方案是：Nootkatone在制备抗动脉粥样硬化药物中的作用。
[0006] 本发明可用作抗人或动物的动脉粥样硬化。本发明所述药物可通过口服或静脉注 射给予。本领域技术人员可根据实际情况容易地确定给药剂量。
[0007] 所述化合物Nootkatone,结构如式（I )所示：
[0009] 对于本发明涉及的Nootkatone在制备治疗动脉粥样硬化药物中的用途属于首次 公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于动脉粥样硬化细胞的抑制活性强得 意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于动 脉粥样硬化的防治显然具有显著的进步。
[0010] 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
【具体实施方式】
[0011] 本发明所涉及化合物Nootkatone的制备方法参见文献（Kishor L, et al.，Total Synthesis of (±)-Nardoaristolone B and Its Analogues. Organic Letters， 2014, 16, 4252-4255.)
[0012] 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
[0013] 实施例1 :本发明所涉及化合物Nootkatone片剂的制备：
[0014] 取20克化合物Nootkatone,加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机 制成1000片。
[0015] 实施例2 :本发明所涉及化合物Nootkatone胶囊剂的制备：
[0016] 取20克化合物Nootkatone，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混勾，装胶 囊制成1000粒。
[0017] 下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
[0018] 本发明通过细胞水平的研究及建立动脉粥样硬化模型等技术揭示了 Nootkatone 对动脉粥样硬化的作用。
[0019] 本发明经口及静脉注射给予Nootkatone，可使动脉粥样硬化大鼠斑块面积/内膜 面积（％)、内膜厚度（um)/中膜厚度（％)显著降低；使血中甘油三酯、总胆固醇及低密度 脂蛋白含量下降，表明Nootkatone可治疗动脉粥样硬化。
[0020] 材料与方法
[0021] 1.实验材料：
[0022] 1. 1动物和饲料
[0023] 实验动物：健康大鼠，雌雄各半，体重（200. 0± 20) g。
[0024] 伺料：基础伺料由江苏省实验动物中心提供；尚脂伺料由2%的胆固醇、10%的猪 油和88%的基础饲料组成，由江苏省实验动物中心加工完成。
[0025] 1. 2药品及试剂
[0026] 胆固醇试剂盒：南京建成生物工程研究所；
[0027] 甘油三酯试剂盒：南京建成生物工程研究所；
[0028] 高密度脂蛋白试剂盒：南京建成生物工程研究所；
[0029] 低密度脂蛋白试剂盒：南京建成生物工程研究所；
[0030] 考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒：南京建成生物工程研究所；
[0031] MDA测定试剂盒：南京建成生物工程研究所；
[0032] S0D测定试剂盒：南京建成生物工程研究所；
[0033] 1. 3 器材
[0034] 美国雅培AER0SET全自动生化分析仪；
[0035] JY601电子天平：上海海康电子仪器厂；
[0036] TN-100B型托盘扭力天平：上海上平仪器公司；
[0037] OLYMPUS倒置型系统显微镜；
[0038] WF10X-18MM光学显微镜：重庆光学仪器厂；
[0039] TGL-16G离心机：上海安亭科技仪器厂
[0040] L实验方法··
[0041] 2. 1内皮细胞培养及Nootkatone作用研究
[0042] 2. 1. 1建立高脂血清损伤的内皮细胞模型
[0043] 取健康日本大耳白兔6只，每日饲喂高脂饲料（2%胆固醇，10%猪油，88%基础饲 料），4周后无菌条件下心脏取血5ml，分离血清，合并，56°C水浴30min灭活处理，再以0. 45 及0. 22双层微孔滤膜过滤后，-30冷冻保存备用。
[0044] 2. 1. 2细胞培养和传代
[0045] 将传代培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304培养于含20%小牛血清、2mmol/LL-谷 氨酰胺、1001]/1111青霉素和10(^/1链霉素的01^1培养基中。用0,25%胰蛋白酶液与0.02% EDTA(1:1)消化传代。接种于100ml培养瓶中，送入5%C02培养箱中培养。以备实验用。 Nootkatone，临用前用无血清培养基稀释。
[0046] 2. 1. 3 分组
[0047] 取对数生长期的细胞用于实验。细胞加处理因素前24h更换无血清培养基，使细 胞同步化至G1期，然后随机分5组：对照组、高脂血清组、Aphanamixoid A组0· 4 μ g/ml组、 Aphanamixoid A 组 2 μ g/ml 组、Aphanamixoid A 组 10 μ g/ml 组。其中对照组：加无血清 01^1培养基；高脂血清组：加含5%高脂血清01^1培养基。
[0048] 2. 1. 4 MTT法检测细胞存活率
[0049] 将生长良好的EVC304细胞制备成5 X 107个*L-1的细胞悬液，按每孔0. 1ml接种 于96孔板，37°C，5% C02温育24h