药物组合物在制备预治甲型流感病毒感染药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药领域，具体涉及一种药物组合物在制备预防或治疗甲型HlNl流 感病毒感染的药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 甲型HlNl流感病毒（Swine influenza virus, SIV)是A型流感病毒，属于正粘病 毒科（Orthomyxoviridae)甲型流感病毒属（InfluenzavirusA),携带有HlNl亚型猪流感 病毒毒株，包含有禽流感、猪流感和人流感三种流感病毒的核糖核酸基因片断。通常，甲型 HlNl流感病毒存在种属特异性，只感染猪，但有时人可能通过接触受感染的生猪或接触被 甲型HlNl流感病毒感染的环境，或通过与感染甲型HlNl流感病毒的人发生接触而导致感 染甲型HlNl流感病毒。
[0003] 甲型HlNl流感是一种具有高度传染性的急性呼吸道疾病，人感染甲型HlNl流感 后的症状与普通人流感相似，包括发热、咳嗽、喉痛、身体疼痛、头痛、发冷和疲劳等，有些还 会出现腹泻和呕吐，重者会继发肺炎和呼吸衰竭，甚至死亡。2009年3月底起，墨西哥、美国 等地接连暴发甲型HlNl流感病毒疫情。随后，疫情全球性蔓延，涉及到美洲、欧洲、亚洲、大 洋洲。2009年6月11日，WHO将甲型HlNl流感警戒级别提升至6级，意味着甲型HlNl流 感进入全球大流行。我国于2009年4月31日将甲型HlNl流感纳入《中华人民共和国传染 病防治法》规定的乙类传染病，人群对甲型HlNl流感病毒普遍易感。截至2010年2月28 日，全国31个省份累计报告甲型HlNl流感确诊病例12. 7万例，死亡病例793例。
[0004] 目前防治甲型HlNl流感主要使用化学药物，如：神经氨酸酶抑制剂奥司他韦 (Oseltamivir，达菲），其通过抑制甲型HlNl流感病毒的神经氨酸酶（NA)，从而改变流感 病毒在感染细胞的聚集和释放。但该类药物在临床应用中常常引起严重的不良反应，文献 (药物流行病学杂志-2008. 17(5). 280-280)报道日本厚生省自2001年2月批准使用奥司 他韦以来，已收到该药引起的药品不良反应超过1000例，其中128例为不常见的各种行为 异常；且已有8例死亡，其中5例是青年患者。利巴韦林是一种强效广谱抗病毒药物，目前 广泛应用于病毒性疾病的防治，临床常用于流感病毒感染的治疗。但是，临床研究表明应用 利巴韦林进行治疗时产生不良反应复杂多样，能够累及神经系统、血液系统、呼吸系统、消 化系统、皮肤以及附件。
[0005] 另外，注射甲型HlNl流感疫苗可以预防甲型HlNl流感的发生，其主要针对的是可 能感染甲型流感的人群。由于我国人口基数较大，国内疫苗生产能力有限，生产成本较高， 因此大量的疫苗储备，大规模的疫苗接种并不适合我国国情。
[0006] 中药是我国千百年来的医药瑰宝，其大多为天然物质，相对于化学药物而言，具有 不良反应小，治疗成本低等优势。目前，中药用于防治或治疗甲型HlNl病毒感染的效果已 经被临床所证实，如连花清瘟胶囊、金花清感方等，均具有一定的抗甲流病毒感染的作用， 对缓解奥司他韦等药物供应的紧张、避免引起抗药性具有一定的积极作用，但现有的品种 仍然有限，难以应对可能发生的大规模疫情的发生。一清胶囊是由汉代医学名著《金匮要 略》中的"泻心汤"发展而来，其配方由大黄、黄芩、黄连组成，功用为泻火解毒、燥湿泄热，主 治邪火内炽，迫血妄行，吐血，衄血，便秘溲赤；三焦积热，眼目赤肿，口舌生疮，外证疮疡，心 胸烦闷，大便秘绪；湿热黄疸，胸中烦热痞满，舌苔黄腻，脉数实者。但是将一清胶囊用于预 防或治疗甲型HlNl流感病毒感染的用途，目前尚未见报道。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的之一是提供一种由大黄、黄苳、黄连制成的药物组合物在制备预防 或治疗甲型HlNl流感病毒感染的药物中的应用，为甲型HlNl流感病毒感染的临床治疗提 供一种新的选择。
[0008] 为了实现上述目的，本发明提供以下的技术方案：
[0009] 本发明提供一种药物组合物在制备预防和治疗甲型HlNl流感病毒感染的药物中 的应用，所述药物组合物的活性成分由以下原料药制成：大黄、黄芩、黄连。
[0010] 其中，所述药物组合物中原料药的质量配比为大黄10份、黄芩5份、黄连3. 3份。
[0011] 本发明还进一步提供了含有该药物组合物的药物制剂，具体为该药物组合物可与 药学上可接受的载体或赋形剂制成药物制剂。所述药物制剂优选为汤剂、散剂、片剂、胶囊 剂、丸剂、口服液、颗粒剂、注射剂或栓剂。
[0012] 本发明进一步提供所述药物组合物的制备方法，取处方配比的大黄、黄芩、黄连， 分别加水煎煮两次，第一次1. 5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液分别减压浓缩得 到浓缩液，其中黄芩浓缩液单独喷雾干燥，大黄和黄连的浓缩液合并喷雾干燥，即得药物组 合物浸膏粉。
[0013] 本发明考察了药物组合物对甲型HlNl流感病毒感染的治疗作用。首先选取健康 小鼠，并采用甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34 (HlNl)进行造模，考察不同剂量药物组 合物对小鼠肺指数、肺指数抑制率及死亡率的影响，研究结果表明，药物组合物高剂量组可 有效降低甲型HlNl流感病毒感染小鼠的肺脏指数，且可显著降低小鼠感染病毒后7-9天的 死亡率，实验结果与模型组相比具有统计学意义，说明本发明药物组合物具有明显的抗甲 型HlNl流感病毒感染的作用。
【具体实施方式】
[0014] 以下结合具体实施例对本发明进行进一歩阐述。下面实施例仅作为对本发明进一 步解释，不能用来作为本发明的保护范围的进一步限制。
[0015] 实施例1药物组合物对甲型HlNl流感病毒感染小鼠肺指数的影响
[0016] 1、实验材料
[0017] 药物：药物组合物（按照实施例7的方法制备，临用前用1 %阿拉伯树胶配成所需 浓度的混悬液备用）；利巴韦林片（四川美大康药业股份有限公司，批号为110305,规格为 〇. Ig/片，临用前用纯净水配成所需浓度的药液备用）；对照例A(按实施例3的方法制备）； 对照例B(按实施例4的方法制备，临用前用1%阿拉伯树胶配成所需浓度的混悬液备用）； 对照例C (按实施例5的方法制备，临用前用1 %阿拉伯树胶配成所需浓度的混悬液备用）； 对照例D (按实施例6的方法制备，临用前用1 %阿拉伯树胶配成所需浓度的混悬液备用）。 [0018] 病毒株：甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34 (HlNl)，由四川大学华西医学中心 提供。于鸡胚传代两次后收取尿囊液，血凝试验测定其滴度为I : 512,分装并于-80°c保 存备用。
[0019] 动物：昆明种小鼠，体重为（20±2)g，购自四川省中医药科学院实验动物中心，饲 养于SPF级环境，合格证号SCXK (川）2008-19。
[0020] 试剂：脱脂绵羊血MH琼脂培养平板，购自郑州安图绿科生物工程有限公司，批号 20120917 ;胃黏液素（mucin)，购自SIGMA-aldrich公司，批号1001234897 ;MH琼脂培养基 (MH-A)，购自OXOID公司，批号CM0337A ;MH营养肉汤培养基（MH-B)，购自OXOID公司，批号 为 CM0405B。
[0021] 2、实验方法
[0022] 取体重为（20 ± 2) g的健康小鼠，雌雄兼用，适应性饲养3d后，腹腔注射戊巴比妥 钠67. 5mg · kg 1麻醉小鼠，麻醉后固定于手术台上，使小鼠头部向上并与水平呈45°角， 然后在其颈部正中做切口，分离气管，向肺部方向气管内注入甲型流感病毒鼠肺适应株A/ PR/8/34 (HlNl)病毒液（0. 05mL/只，浓度为30LD5。），注射完毕缝合手术切口并消毒。待小鼠 全部苏醒后，按体重分层随机分为模型组、药物组合物高剂量组（给药剂量为〇. 84g *kg ^、 药物组合物中剂量组（给药剂量为〇.42g· kg 1K药物组合物低剂量组（给药剂量为 0· 21g · kg ^ ;利巴韦林组（给药剂量为0· 15g · kg ^，对照例A组（给药剂量73ml · kg ^， 对照例B组（给药剂量3. 4g · kg ^，对照例C组（给药剂量1.0 Og · kg ^，对照例D组（给 药剂量0. 98g · kg ^，并另设正常对照组。分组后立即开始灌胃给药，每天1次，连续给药 5d，对照组和模型组给予等量的纯净水。
[0023] 3、实验结果
[0024] 按照上述实验方法分组和给药，末次给药前禁食不禁水8h，并