一种灵芝发酵原浆化妆品及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体设及一种灵芝发酵原浆化妆品及其制备方法与应 用。
【背景技术】
[0002] 灵芝Ganodermalucidum(Qi;rtis:F';r. )P.Karst.是我国名贵的药用真菌。由于它 能预防或治疗众多疾病，在古代曾被称为"仙草"。现代化学研究证明，灵芝含有多种生物活 性成分，如多糖、=祗、酱醇、核酸、蛋白质、多肤、脂肪酸等，其中灵芝多糖和灵芝=祗是灵 芝的关键药效成分。现代药理学研究表明，灵芝多糖的生物活性十分广泛，包括调节免疫作 用、抗肿瘤作用、促进体内核酸与蛋白质的代谢、抗氧化作用、抗衰老作用等。
[0003] 现有的灵芝活性物提取最常采用的是水提法：灵芝干品粉碎后加去离子水，调抑 后揽拌浸提一段时间，离屯、后取上清液浓缩，最后使用乙醇沉淀，干燥后粉碎得到产物。但 是该方法在提取过程中引入有机物，不仅破坏环境，且在应用的过程中存在潜在的安全隐 患。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的之一是提供一种灵芝发酵原浆的制备方法。 阳〇化]本发明所提供的灵芝发酵原浆的制备方法，包括如下步骤：将灵芝干粉、水和发酵 菌菌液混合得到初始体系，对所述初始体系进行发酵培养，得到灵芝发酵原浆。
[0006] 上述制备方法中，所述灵芝干粉为灵芝子实体干粉，所述灵芝干粉的大小为20-50 目，具体可为30目。
[0007] 所述发酵菌菌液的浓度为106-10化即/血。
[0008] 所述发酵菌菌液的抑值为6. 5-7. 5。
[0009] 所述发酵菌菌液、灵芝干粉和水的配比为：18-28血：5-10g:250g，具体可为22血： 8g：250g〇
[0010] 所述发酵菌为酵母菌，具体可为葡萄酒酵母Saccharomycesellipsoideus。
[0011] 所述发酵培养的溫度为25-35°C，具体可为30°C，时间为20h-28h，具体可为2地。
[0012] 上述制备方法还包括对所述发酵培养后得到的发酵液依次进行灭菌、离屯、、取上 清液得到灵芝发酵原浆化妆品的步骤。 阳01引所述灭菌的条件为：灭菌溫度为110-12rc，具体为115°C，灭菌时间为15-30min， 具体可为20min。
[0014] 所述离屯、的条件为：离屯、转速为4500-6000r/min，具体为5000r/min、离屯、时间为 20-30min，具体为25min，离屯、半径为8-12畑1，具体为9畑1。
[0015] 本发明所制备得到的灵芝发酵原浆也属于本发明的保护范围。
[0016] 本发明所制备得到的灵芝发酵原浆在制备具有下述至少一种功能的化妆品中的 应用或在直接作为具有下述至少一种功能的化妆品中的应用也属于本发明的保护范围：
[0017] 1)美白； 阳01引。抗衰老；
[0019] 如清除自由基；
[0020] 4)抑制酪氨酸酶。
[0021] 上述应用中，所述化妆品为面膜、精华液或爽肤水。
[0022] 本发明提供了一种灵芝发酵原浆化妆品的制备方法，该方法选择更加合适的菌 种，使产品更加天然，且不需要添加酶等外来物质，不仅节约生产成本，而且最大化的简化 了生产步骤，从而使该发酵技术能够实现大量生产、工业化生产，并能够充分保证产品质量 的稳定性。通过实验证明：本发明制备的灵芝发酵原浆不含任何化学成分，可W直接作为面 膜或精华液或爽肤水的成品使用，比现有市面上的其他产品更加天然，不会给肌肤造成任 何负作用；而且能够获得分子量小的活性成分，更易被皮肤充分吸收。
[0023] 本发明所具有的优点是（1)本发明采用葡萄酒酵母对灵芝进行全植物发酵，保留 了植物的全部功效成分及其活性，避免了提取方法造成的活性成分流失。（2)本发明所采用 的发酵法，在对灵芝有效成分提取过程中，不添加任何有机试剂，发酵溫度和发酵抑溫和， 植物活性成分结构不被破坏，保持植物的天然活性。（3)本发明提供的化妆品发酵完成后， 发酵原浆中不添加香精等对化学成分，确保产品对人体的安全性。（4)本发明提供的灵芝发 酵原浆中富含的多糖、蛋白等物质，与发酵滤液中的益生菌发酵产物成分具有协同作用，从 而具有显著地抗氧化及抗衰老作用。
【附图说明】
[0024] 图1为灵芝发酵原浆化妆品的活性多肤分子量分布HPLC图谱。
[0025]图2为灵芝发酵原浆化妆品的清除DPPH自由基结果示意图。
[0026] 图3为灵芝发酵原浆化妆品的抑制酪氨酸酶活性示意图。
【具体实施方式】
[0027] 下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。
[0028] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所 用的试剂、材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0029] 下述实施例中所采用的液体培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液 体培养基中的浓度为：葡萄糖20g/L，蛋白腺20g/L，酵母膏lOg/L，抑值为7. 0。
[0030] 下述实施例中所采用的的YTO培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在 液体培养基中的浓度为：酵母提取物1% (质量分数），膜蛋白腺2% (质量分数），葡萄糖 2% (质量分数），抑值为7.0。
[0031] 下述实施例中所采用的灵芝购自青海康普生物科技有限公司。
[0032] 下述实施例中所采用的葡萄酒酵母Saccharomycesellipsoideus的ATCC编号为 4108,可从ATCC获得。
[0033] 实施例1、灵芝发酵原浆的制备
[0034]1、菌种的活化
[0035] 挑取葡萄酒酵母（Saccharomycesellipsoideus)菌落一环于液体培养基中，放入 摇床中将菌种活化，得到活化后葡萄酒酵母菌液。
[0036] 2、菌种的纯化
[0037] 将步骤1得到的活化后的菌液梯度稀释铺板，W便获取单菌落，得到纯化后葡萄 酒酵母。
[0038] 3、菌种的扩大培养
[0039] 将步骤2得到的纯化后的菌种接种到YTO培养基（抑值为7.0)中，在25°C的摇床 中培养，当0D值=0. 6-1. 0时，得到发酵菌菌液（菌种处在对数期，浓度为106-108CFU/ml)。
[0040] 4、灵芝发酵原浆的获得
[0041] 将22mL步骤3得到的发酵菌菌液接种到8g的灵芝干粉和250g的水中，得到发酵 体系（发酵体系中菌液和灵芝与水的配比为22mL:8g:250g);将发酵体系在30°C摇床中发 酵24小时，得到发酵产物；将发酵产物115°C高压灭菌20min，使菌失活，得到灭菌后的发酵 产物；将灭菌后的发酵产物在5000r/min、离屯、半径为9cm的条件下离屯、25min，弃沉淀，收 集上清液，即为灵芝发酵原浆。
[0042] 实施例2、灵芝发酵原浆在作为化妆品的应用：
[0043] 一、灵芝发酵原浆的性质：
[0044] 该实施例制备所得的灵芝发酵原浆（上清液）的外观为粘稠液体、颜色为淡黄 色至栋黄色。抑值5. 2-6. 3,粘度200-500CP，可溶性固含物含量1. 5-5. 0 %，菌落总数小 于50CFU/ml，无致病菌检出。根据化妆品卫生标准GB7916-87，化妆品细菌总数不高于 lOOOCFU/ml，所W此发酵原浆符合化妆品质量要求。
[0045] 对该灵芝发酵原浆进行成分分析，蛋白质检测方法参照GB5009. 5-2010;粗多糖 检测方法参照GB/T5009. 8-2008;黄酬检测方法参照GB/T5009. 124-2003;总酪检测方法 参照GB/T8313-2008,所得结果如下：
[0046] 本发明制得的灵芝发酵原浆含蛋白质2. 93g/kg、粗多糖9. 91g/kg、总黄酬 0. 045g/kg(W芦下计）、总酪0. 〇54g/kg。
[0047] 二、灵芝发酵原浆的安全性检测
[0048] 人体斑贴试验主要是用于检测化妆品终产品或原料的刺激性。本发明对实施例1 获得的灵芝发酵原浆进行人体封闭式斑贴试验，旨在对其潜在皮肤刺激性进行评估。
[0049] 1、试验对象
[0050] 选择合适的志愿者30人，年龄范围在18-60岁随机选择。
[0051] 2、试验方法
[0052] 若为固体样品或半固体的样品，则称取0.020g-0.025g置于斑试器中备用；若是 液体样品，则量取0. 〇25mL-〇. 2血滴加于滤纸片上，再将滤纸片置于斑试器内。本发明采用 后者，每个样品均设置空白对照，在对照斑试器孔内加入与样品等量的样品溶剂，如蒸馈水 或橄揽油。
[0053] 试验部位选为人体背部，利用无刺激性的胶带将斑试器固定贴敷于受试者背部。 测试周期持续2地。为了试验结果的准确、可信和科学，在测试期间志愿者按照要求，不能摘 掉斑试器，亦不可使受试部位接触水。24h后去除斑试器，静置30min后，等待压痕消失，观 察皮肤的反应。如果试验结果为阴性，则需要在斑贴试验后24h和4化分别再观察一次。
[0054] 3、试验结果 阳化日]斑贴试验结果如表