Cephaloziellin A在制备治疗胃癌药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物CephaloziellinA的新用途，具体涉及CephaloziellinA在 制备治疗胃癌药物中的应用。
【背景技术】
[0002] Rui-JuanLi等人首次分离纯化出化合物CephaloziellinA，并将成果发表在 著名天然产物杂志JournalofNaturalProduct上（SecondaryMetabolitesfromthe ChineseLiverwortCephaloziellakiaeri，J.Nat.Prod.，2013,76,1700-1708)〇
[0003]目前尚未有该化合物的活性报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种CephaloziellinA的医药用途。
[0005] 上述目的是通过如下技术方案实现的：
[0006] CephaloziellinA在制备治疗胃癌药物中的应用，所述CephaloziellinA化学结 构式如下，
[0007]
[0008] 进一步地，所述胃癌为SGC-7901胃癌。
【具体实施方式】
[0009] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容。
[0010] 实施例I:CephaloziellinA的分离制备及结构确证
[0011] CephaloziellinA的制备方法同文献报道的制备方法（SecondaryMetabolites fromtheChineseLiverwortCephaloziellakiaeri，J.Nat.Prod.，2013,76， 1700-1708)〇
[0012] 结构确证：白色无定形粉末，分子式为CmH24O6，不饱和度为9。IR光谱数据显示化 合物含有羟基（3444cm1)和内酯（1770cm1)基团。核磁共振氢谱数据Sh(ppm，DMS0-d6， 600MHz) 93，m)，H-1(2. 05，m)，H-2(1. 67，m)，H-2(2. 89，m)，H-3(4. 60，m)，H-4(2. 00， br，s)，H-6 (4. 58,t，J= 8. 90)，H-7 (2. 24,dd，J= 14. 4,8. 4)，H-7 (I. 77,dd，J= 14. 4， 9.6)，H-IO(2.21，m)，H-Il(2.24,dd，J= 14. 4,8. 4)，H-Il(2.30,dd，J= 14. 4,6.0)， H-12(5. 31，dd，J= 8. 4,6. 0)，H-14(6. 25,br，s)，H-15(7. 40,br，s)，H-16(7. 38,br， s)，H-17(l. 19,s)，H-19(1.39,s)，H-20(5.23,s);核磁共振碳谱数据Sc(ppm，DMS0-d6， 600Hz) :18. 5(CH2a_C)，25. 2(CH2,2-C)，71. 9(CH，3-C)，55.I(CH，4-C)，39. 4(C，5-C)， 84. 3 (CH，6-C)，41. 6 (CH2, 7-C)，73. 5 (C，8-C)，55. 8 (C，9-C)，42. 6 (CH，10-C)，40. 3 (CH2， 11-C)，70. 4(CH，12-C)，129.I(C，13-C)，108. 0(CH，14-C)，143. 8(CH，15-C)，138. 7(CH， 16-C)，27.I(CH3,17-C)，178. 0 (C，18-C)，29. 9 (CH3,19-C)，105. 5 (CH，20-C)。
[0013] 结构确证数据与文献报道一致，因此可以确定本发明制备的化合物即为文献报道 的CephaloziellinA0
[0014] 实施例2:CephaloziellinA的药理作用试验
[0015] -、材料和仪器
[0016] 人胃癌细胞株SGC-7901购于赛尔试剂公司。C印haloziellinA自制，HPLC归一 化纯度大于98%。PDTC、胰蛋白酶、MTT、二甲基亚砜（DMSO)、琼脂糖、冰醋酸购于美国Sigma 公司。RPMI-1640培养基、PBS磷酸盐缓冲溶液购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于山东银 香伟业公司。台盼蓝（北京中杉金桥生物技术有限公司），TUNEL试剂盒（凯基生物科技发 展有限公司），DAB显色试剂盒（北京中杉金桥生物公司），甲醛（美国Fisher公司），过氧 化氢酶（天津市天新精细化工开发中心）。
[0017] WD-9403C紫外分析仪（德国Biometra公司），梯度PCR仪（德国Biometra公 司），凝胶成像分析系统（上海天能公司），电泳仪（北京六一），电子天平（上海精密仪器 仪表有限公司），RKI-1002型二氧化碳培养箱（日本Ikemoto公司），超净工作台（苏州净 化实验设备有限公司），超速离心机（北京医疗器械厂），低速离心机（北京医疗器械厂）， WilovertS型倒置显微镜（日本Olympus公司），立式压力蒸汽灭菌器（上海博讯实业有限 公司），细胞计数板（上海精密仪器公司），超纯水纯水器（英国HJRELABulTRAGENETIC)。
[0018] 二、试验方法
[0019] 1、胃癌细胞SGC-7901的培养
[0020] I. 1细胞复苏
[0021] (1)从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速置于37°C-42°C，75%酒精中，然后移至同 温水浴锅中；
[0022] (2)轻轻晃动l_3min冻存管，使冻存液融化，迅速移至超净台中；
[0023] (3)将含有细胞的冻存液吸入无菌离心管，加入适量RP頂-1640培养基；
[0024] (4)吹打混匀后放入低速离心机，800rpm/min离心3分钟，去除上清液；
[0025] (5)加入适量培养基吹匀，将细胞悬液依据浓度接种到IOmL培养皿中；
[0026] (6)置于含5%二氧化碳、37°C饱和湿度的培养箱中培养。
[0027] 1. 2细胞传代
[0028] (1)待培养皿中的细胞贴壁约80%时，在超净台中用移液管吸取旧的培养基吹打 数次培养皿中细胞，以吹掉死亡细胞；
[0029] (2)用移液管吸去旧培养基，加入适量0.25%胰酶消化细胞，置于30°C培养箱中 消化；
[0030] (3)约3min后将培养皿置于倒置显微镜下观察，待细胞周边发亮、回缩变圆后则 说明细胞已经从壁上脱离；
[0031] (4)迅速于超净台中吸去胰酶。加入适量培养基反复吹打细胞，使细胞完全脱离培 养皿；
[0032] (5)将细胞悬液按浓度分别接种至不同的培养皿中，补足培养基；
[0033] (6)重新置于含5%CO2、37°C饱和湿度的培养箱中培养。
[0034] 2、细胞计数
[0035] (1)准备好细胞计数板及盖玻片，二者均用酒精擦拭干净，将盖玻片盖在计数板 上；（2)待酒精挥发后，吸出适量细胞悬液，滴加在盖玻片边缘，使悬液充满盖玻片和计数 板之间，注意不要溢出盖玻片及两侧的玻璃槽，静置后计数；（3)在显微镜下找到4个大格， 每个大格又分为16个小格，分别计数4个大格中的细胞数，取平均值。压线细胞计左侧和 上方的，不计右侧和下方的；(4)细胞浓度（个/mL)=每个方格的平均细胞数X10000 ; (5) 将细胞悬液稀释成实验所需浓度。
[0036] 3、细胞活力测定
[0037] (1)取待测定的SGC-7901胃癌细胞悬液0? 9mL; (2)向细胞悬液中加入台盼蓝吹 打混匀；（3)采用细胞计数板盲法计数至少200个细胞，倒置显微镜下观察；(4)镜下观察 细胞染色情况，细胞内染成淡蓝色者为死细胞，未染色者为活细胞，以活细胞所占细胞总数 的百分比反映细胞的活力（％ )。
[0038] 4、MTT检测细胞生长抑制率
[0039]实验分组：①阴性对照组；②CephaloziellinA组1，Cephaloziellin A(50iimol/L);③CephaloziellinA2，CephaloziellinA(100ymol/L);④]3DTC组1， PDTC(50ymol/L);⑤PDTC组2,PDTC(K)Oymol/L);