4-甲氧基苯甲醇在制备trpm7抑制剂类药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及4-甲氧基苯甲醇在制备TRPM7抑制剂类药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 缺血性脑血管病（ICVD)是严重危害人类健康的疾病之一。ICVD的病理过程比较 复杂，其中钙超载占据中心地位，细胞内钙浓度（[Ca2+])升高是引起神经细胞损伤的最后 共同通路，因而研究和开发钙通道拮抗剂是缺血性脑病治疗的热点之一。TRPM7(transient rec印torpotential，TRP)属于一类阳离子通道蛋白，TRPM7通道是细胞膜上瞬时受体电位 通道的家族之一，参与细胞的生存、增殖与粘附等过程。研究发现，在脑缺血发生后，TRPM7 通道受钙离子和氧化应激等调控而异常开放，TRPM7的蛋白和基因水平均有过度表达。在 体内和体外实验中通过抑制TRPM7通道，均表现出脑神经元保护作用，表明TRPM7通道有望 成为一种潜在的脑保护治疗靶点。
[0003] 目前，TRPM7通道尚无选择性的抑制剂，现有的一些非选择性抑制剂有Gd3+，La3， 2-APB等尚处于实验阶段。
[0004] 4-甲氧基苯甲醇具有略带甜味的茴香香气，常用于配制茉莉、紫丁香等香精，适于 调配香水。4-甲氧基苯甲醇是我国GB2760-86规定为允许使用的食用香料。主要用以配制 香草、巧克力、可可、杏仁、桃子等香精，也用于有机合成和用作溶剂。未见4-甲氧基苯甲醇 抑制TRPM7通道或者用于脑保护的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供4-甲氧基苯甲醇在制备TRPM7通道抑制剂类药物中的用 途，以降低细胞内钙浓度，用于脑保护治疗缺血性脑血管病。
[0006] 本发明首先提供了 4-甲氧基苯甲醇在制备TRPM7抑制剂类药物中的用途。
[0007]TRPM7属于一类阳离子通道蛋白。
[0008]TRPM7通道抑制剂：抑制TRPM7的蛋白表达的物质。
[0009] 本发明还提供了 4-甲氧基苯甲醇在制备脑保护药物中的用途。
[0010] 脑保护药物：能保护脑组织免受损伤，或阻断损伤后脑神经元坏死、增强神经元生 存能力、促进神经功能恢复的药物。
[0011] 其中，所述脑保护药物是提高脑神经细胞存活率的药物。
[0012] 其中，所述脑保护药物是降低神经细胞内钙离子浓度的药物。进一步优选地，所述 药物是抑制TRPM7通道蛋白表达水平的药物。
[0013] 其中，所述药物是预防和/或治疗缺氧导致的脑损伤的药物。
[0014] 其中，所述药物是预防和/或治疗缺血性脑血管疾病的药物。
[0015] 其中，所述药物是以4-甲氧基苯甲醇为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备 而成的制剂。
[0016] 本发明还提供了一种神经保护药物，它是以4-甲氧基苯甲醇为活性成分，加上药 学上可接受的辅料制备而成的制剂。
[0017] 4-甲氧基苯甲醇能抑制TRMP7的表达，是一种TRMP7抑制剂，可以降低神经细胞内 钙离子浓度，提高神经细胞存活率，预防和/或治疗缺氧导致的神经损伤或者脑损伤，可以 制备成为脑保护药物，预防和/或治疗缺血性脑血管疾病，临床应用前景良好。
[0018] 下面通过【具体实施方式】对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限 制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述 基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
【附图说明】
[0019] 图IMOBA对缺糖缺氧/复糖复氧（0GD/R)损伤的原代皮层神经元TRMP7通道蛋 白表达的影响
[0020] 图2MOBA对0GD/R损伤的原代皮层神经元TRMP7通道蛋白表达的影响（x±s，n =3)〇
[0021] 注：与空白对照组比较，AAP〈0. 01 ;与模型组比较，*P〈0. 05。
【具体实施方式】
[0022] 实验例1 4-甲氧基苯甲醇（MOBA)对皮层神经元TRPM7通道的阻断作用
[0023] 1实验材料
[0024] I. 1实验动物
[0025] 健康SD大鼠，SPF级，体重250_300g，四川省医学科学院实验动物研究所提供，合 格证号SCK(川）2013-24。取妊娠18~19d大鼠的胚胎供实验用。
[0026] 1. 2主要试剂和材料
[0027]2-APB、Gd，美国Sigma公司；甲基噻唑基四唑溴盐（MTT)、二甲基亚砜（DMSO)，美 国Amresco公司；连二亚硫酸钠（Na2S2O4)，汕头市西陇化工有限公司；Flu〇-3/AM、Actin抗 体、BCA试剂盒，碧云天生物技术研究所；LTRPC7抗体，美国santacruz公司；无血清培养 液（B-27Serum_FreeSupplement)、DMEM高糖液体培养基，美国Invitrogen公司；4-甲氧 基苯甲醇（MOBA)，百灵威科技有限公司。
[0028] 1. 4主要仪器
[0029] 酶标仪（InfiniteM200PR0)，瑞士Tecan公司；流式细胞仪，美国BD公司；UVP凝 胶成像分析系统（BioSpectrum)，美国Spectrum公司。
[0030] 1. 5药物的配制
[0031] MOBA先用DMSO溶解，用前以无血清培养液稀释至所需浓度。
[0032] 2实验方法
[0033] 2. 1M0BA对缺糖缺氧/复糖复氧（0GD/R)损伤的原代皮层神经元存活率的影响
[0034] 将原代皮层神经元按5XIO5cells/mL的密度接种于96孔板上，每孔180yL，置 于37°C、5% (：02培养箱内培养。
[0035] 实验细胞设为空白对照组、模型组、系列梯度浓度MOBA给药组，给药组浓度为 100、50、25yg/mL〇
[0036]培养至第7d于造模前Ih给药，空白对照组和模型组加入完全培养基，给药组加入 含不同梯度浓度的MOBA的培养基。给药Ih后开始造模。
[0037] 造模：用含32mMNa2S2O4的无糖已&46'8液替换原培养液，置于37°(：、5%0) 2、95% 空气及饱和湿度条件的培养箱中培养lh，进行缺糖缺氧损伤，然后替换为原培养液ISOuL 置于CO2培养箱内培养Ih复糖复氧。
[0038] 造模结束后，每孔加MTT溶液20yL(终浓度0. 5mg/mL)，放入培养箱孵育4h，然后 弃上清液，每孔加150yLDMS0,将培养板置于摇床上振荡lOmin，使MTT反应的结晶物充分 溶解。选择570nm波长，在酶标仪上测定各孔吸光度（以OD表示），计算细胞相对存活率， 计算公式如下：细胞存活率（％) = (实验组OD值-空白组OD值V(正常组OD值-空白 组OD值）X100%。
[0039] 2. 2M0BA对OGD/R损伤的原代皮层神经元胞内钙离子浓度的影响
[0040] 将原代皮层神经元按2. 1节浓度和体积接种于24孔板上，培养、给药及造模处理 如前。造模结束后，每孔加入Hanks液清洗细胞2