新橙皮苷二氢查二酮的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术及保健品领域，具体涉及新橙皮苷二氢查二酮在防治爆发性 肝损伤中的应用。
【背景技术】
[0002] 爆发性肝损伤又叫急性坏死型肝炎，临床上亦称急性重型肝炎。是由多种原因引 起的大量肝细胞坏死及（或）严重的肝功能障碍，病人短期内发展至肝性脑病的一种综合 征。爆发性肝损伤的发病非常迅速，病情重，死亡率高，目前仍然缺乏特异性的治疗措施。由 病毒性肝炎、酗酒、服用肝毒性药物或其它多种原因所致的肝功能衰竭是临床常见危重症， 每年发病数以百万计。目前的综合治疗措施仅能使其病死率降至60%，而生物人工肝支持 系统和肝细胞移植的应用虽然能够进一步提高患者的生存率，但肝移植仍然是目前唯一能 明显改善患者预后的治疗措施。由于供肝来源受限、手术费用昂贵以及术后须长期服用免 疫抑制剂等，大部分患者还无法接受肝移植治疗，寻找新的肝衰竭防治方法势在必行。
[0003] 由肠源性内毒素造成的急性肝损伤是临床上常见的肝脏急性炎症反应性疾病， 常发生严重肝坏死和重症肝炎表现，也是导致急性肝功能衰竭的常见原因之一。肝脏是体 内解毒的主要器官，同时也是遭受内毒素攻击的首要脏器。在临床上，各种致病因素（例 如：肝炎病毒、酒精、药物等）可以通过其特异性的致病机制对肝脏造成原发性损伤，在此 过程中，机体常出现肠源性内毒素血症，内毒素激活枯否细胞释放炎性递质，使肝损伤不断 加重，最终爆发肝功能衰竭，导致患者死亡。所以，探索内毒素性肝损伤的防治方法，对避免 各种致病因素引起的肝脏炎症向恶性方向发展，预防肝功能衰竭的发生具有重要意义。目 前国内外学者多应用D-半乳糖胺（D-galactosamine，D_GalN)造成原发性肝损伤，结合腹 腔内或静脉注射小剂量脂多糖（lipopolysaccharide,LPS)模拟肠源性内毒素血症建立肝 衰竭模型，其与HBV所致肝功能衰竭有较高的临床相关性，是目前比较公认的急性肝衰竭 动物模型之一。通过建立爆发性肝损伤动物模型，研究肝病的发生机制，筛选保肝药物，探 索保肝作用原理，具有十分重要的现实意义。
[0004] D-GalN/LPS致爆发性肝损伤动物模型的机制是，D-GalN是肝细胞的磷酸尿嘧啶 核苷（UTP)的干扰剂，可造成肝细胞的弥漫性坏死和炎症，与临床病毒性肝炎的病理变化 相似。D-GalN进入体内后能与磷酸尿苷结合形成磷酸尿苷-半乳糖胺，致使磷酸尿苷耗竭， 使依赖其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物质合成受到抑制，并限制细胞器及酶的生成和 补充，使细胞器受损、膜损害、钙离子内流入细胞，造成肝细胞损伤。LPS是G-细菌最重要的 致病物质，属病原体相关分子模式（pathogenassociatedmolecularpattern,PAMP)，免 疫刺激作用强。通过激活单核-巨细胞系统（mononuclearphagacyticsystem,MPS)，弓丨 起TNF-a、IL-6、IL-1等大量炎症介质释放，导致全身过度炎症反应及脑、心、肾、肝等重要 器官的衰竭。肝细胞弥漫性的损伤对细菌LPS的解毒能力大大降低，进而增强LPS的肝毒 性。有研究报道，应用D-GalN能使LPS的炎症效应增加约104倍以上，微量LPS可以加重 D-GalN所致的急性肝损伤。D-GalN损伤仅限于肝脏，靶点明确，对其他脏器的影响不明显。 所以常用D-GalN联合小剂量的LPS建立爆发性肝损伤动物模型。
[0005] 新橙皮苷二氢查尔酮（NHDC)(附图1)是将从天然柑橘植物中提取得到的新橙皮 苷氢化而成的黄酮类衍生物。早在1963年，Horowitz等人就发现新橙皮苷二氢查尔酮具 有强烈的甜味。其特点在于甜度大（蔗糖甜度的1500~1800倍），口感清爽，余味持久，并 具有极佳的屏蔽苦味的功效。与其它甜味剂相比，热量较低，因此对人体血糖和血脂水平没 有不良影响。目前人们已对它进行过毒理试验，并在已有的毒理试验的基础上确立了它的 食品甜味剂地位。1997年，新橙皮苷二氢查尔酮被我国卫生部列入"食品添加剂使用卫生 标准"增补品种，可用于食品工业。但是目前，国内外对新橙皮苷二氢查尔酮的研究仅停留 在其作为食品添加剂的应用以及对柑橘类植物中黄烷酮的提取，而对其生理活性和合成研 究开展的较少。
【发明内容】
[0006] 有鉴于此，本发明的目的在于提供新橙皮苷二氢查二酮在防治爆发性肝损伤中的 应用，本发明研究表明新橙皮苷二氢查二酮具有良好的抗氧化和抗炎效果，因此，在制备保 肝药物中具有良好的应用前景。
[0007] 本发明采取的技术方案如下：
[0008] 1、新橙皮苷二氢查二酮在制备预防或治疗肝损伤的药物中的应用。
[0009] 优选的，所述肝损伤为爆发性肝损伤。
[0010] 2、新橙皮苷二氢查二酮在制备保健品中的应用。
[0011] 优选的，所述保健品为护肝类保健品。
[0012] 优选的，所述保健品为对爆发性肝损伤有辅助保护作用的保健品。
[0013] 优选的，所述爆发性肝损伤为肠源性内毒素血症所致的肝损伤。
[0014] 本发明的有益效果在于：本发明通过建立D-GalN/LPS诱导的爆发性肝损伤动物 模型，从抗氧化和抗炎两方面研究新橙皮苷二氢查尔酮对爆发性肝损伤的预防性治疗作 用，研究结果表明，新橙皮苷二氢查尔酮能显著提高爆发性肝损伤小鼠的存活率，显著降低 血清ALT和AST。因此，新橙皮苷二氢查尔酮在制备保肝，预防或治疗爆发性肝损伤的药物 中具有良好的应用前景。
【附图说明】
[0015] 为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图：
[0016] 图1新橙皮苷二氢查尔酮的结构式；
[0017] 图2新橙皮苷二氢查尔酮对D-GalN/LPS诱导爆发性肝损伤小鼠存活率的影响结 果；
[0018] 图3H&E染色检测新橙皮苷二氢查尔酮对D-GalN/LPS诱导爆发性肝损伤小鼠病 理学变化的影响；
[0019] 图4新橙皮苷二氢查尔酮对D-GalN/LPS诱导爆发性肝损伤小鼠促炎症因子的影 响。
【具体实施方式】
[0020] 下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方 法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
[0021] ALT、AST、MDA、GSH，CAT、GPx、SOD、iNOS和蛋白定量试剂盒均购于南京建成生物工 程研究所；N0试剂盒购于碧云天生物技术公司；C0X2和PGE2的ELISA试剂盒购于R&D公 司；TNF-a、IL-6的一抗均购于武汉三鹰生物技术有限公司；IL-10的一抗和二抗均购于 上海生工生物工程股份有限公司；新橙皮苷二氢查二酮（NHDC)购于阿拉丁；D-半乳糖胺 (D-GalN)购于阿拉丁，临用前用生理盐水配成40mg/mL;脂多糖（LPS)购于Sigma公司，使 用前用生理盐水稀释成10yg/kg;水飞蓟素（Silymarin)购于Sigma公司。
[0022] 紫外分光光度仪（UV-2450,日本岛津公司）；酶标仪（Bio-Tek，美国基因公司）； 电子天平（FA2004,上海舜恒平科学仪器有限公司）；高速台式冷冻离心机（TGL-16M，长沙 湘仪离心机仪器有限公司）；三孔电热恒温水槽（DK-8D);高速分散器（XHF-P，宁波新芝生 物科技股份有限公司）。
[0023] 清洁级雄性昆明种小鼠，体重18_22g，由重庆中药研究所提供。
[0024] 需要说明的是，新橙皮苷二氢查二酮和阳性药物水飞蓟素均在给药前用质量分数 〇. 5%的羧甲基纤维素钠溶液配成20mg/mL。
[0025] 实施例1新橙皮苷二氢查二酮对D-GalN/LPS诱导的爆发性肝损伤肝功能的保护 作用
[0026] 首先取体重18_22g的雄性昆明种小鼠，适应性喂养一周后，随机分为10组，10组 均分两批次处理，第一批次为造模后6h处理，第二批次为造模后24h处理。每批次分为5 组，对照组（Control，10只/组），D-GalN/LPS模型组（D-GalN/LPS，10只/组），新橙皮苷二 氢查二酮给药组（NHDC，10只/组），新橙皮苷二氢查二酮预防给药组（D-GalN/LPS+NHDC， 10 只 / 组），阳性对照组（D-GalN/LPS+Silymarin，10 只 / 组）。
[0027] 第一批次：新橙皮苷二氢查二酮单剂量给药组与预防给药组，灌胃给药一天一次， 连续六天；阳性对照组同样灌胃连续给药六天；其余各组则灌胃〇. 5%羧甲基纤维素钠溶 液连续六天。末次给药后一小时，除对照组和NHDC组腹腔注射给予生理盐水，其他组腹腔 注射给予10yg/kg的LPS和400mg/kg的D-GalN。造模六小时后，眼眶后静脉丛采血，室温 静置30min后，室温4000r/min，离心lOmin，取血清，测定血清中AST和ALT的含量，实验结 果如表1所示。
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