壳聚糖包封液晶纳米粒所得微球及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及壳聚糖包封液晶纳米粒所得微球及其制备方 法。
【背景技术】
[0002] 单油酸甘油酯（Glycerymonooleate，以下简称为GM0)是一种具有甘油基和油 酸基长链结构的非离子型表面活性剂，它在水溶液中会自发形成热力学稳定的脂质双分子 层，然后再组成具有二维或三维结构的液晶体系。专利（US8242165B2)利用GMO的液晶形 成特性，将其制成液晶纳米粒（cubosome技术），以期达到缓释并提高生物利用度的目的。 但是，很多研究表明采用GMO制备的液晶纳米粒在动物体内没有缓释作用。
[0003] 为此，我们经过大量的研究，发现了利用壳聚糖（Chitosan)这个甲壳素的脱乙酰 基产物，通过制剂技术将其包裹于cubosome的外层，可以达到良好的缓释效果并同时进一 步提高难溶性药物的生物利用度。壳聚糖是由N-乙酰-D-氨基葡萄糖单体通过P-1，4-糖 苷键连接起来的直链状高分子化合物，是一种含有游离氨基的带正电荷的碱性多糖，具有 生物降解性好，生物相容性好，促进药物吸收等优点。
[0004] 很多药物在市场上都有缓释制剂产品或有制成缓释制剂进行临床应用的必要，例 如：长春西汀、辛伐他汀、格列齐特、盐酸阿夫唑嗪、富马酸喹硫平、盐酸哌甲酯、茶碱、异丁 司特、乌拉地尔、氨茶碱、盐酸文拉法辛、盐酸坦洛新、盐酸尼卡地平、盐酸伐昔洛韦、盐酸奥 昔布宁、盐酸安非他酮、氢溴酸加兰他敏、马来酸曲美布汀、泛昔洛韦、甲磺酸二氢麦角碱、 氟伐他汀钠、西洛他唑、左乙拉西坦、马来酸氟吡汀、雷诺嗪、咪唑斯汀、卡马西平、帕利哌 酮、吡贝地尔、盐酸罗匹尼罗、别嘌醇、盐酸胍法辛等。通过大量的试验研究，我们发现，将壳 聚糖包裹在这些药物制备成的cubosome的外面，可以达到明显的缓释作用，还较cubosome 进一步提高了辛伐他汀和长春西汀等低生物利用度药物的口服生物利用度。本专利公开的 技术将不限于上述列出的药物。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供壳聚糖包封液晶纳米粒所得微球的组成。
[0006] 本发明中含有壳聚糖、GM0、泊洛沙姆407,GMO与泊洛沙姆407在水中形成液晶纳 米粒，壳聚糖溶液与液体液晶纳米粒的体积比例为5 : 1。液晶纳米粒中GMO与泊洛沙姆 407的重量比为20 : 3,泊洛沙姆407在配制过程中浓度为I. 5% (w/v)。
[0007] 本发明中所用的壳聚糖的分子量为1万-20万，优选为2万-12万，最优选为3 万-8万。制备过程中将壳聚糖配制成溶液，壳聚糖溶液的浓度为0. 5% -10. 0% (w/v)，优 选为1. 0% -8. 0% (w/v)，最优选为2. 0% -5. 0% (w/v)。溶解壳聚糖使用常规的酸性物 质，所用的酸优选为盐酸、柠檬酸、酒石酸、醋酸，其用量为溶解壳聚糖成上述浓度时所需要 的量。
[0008] 本发明中使用了戊二醛作为交联剂，戊二醛浓度为2. 0% -6. 0%，用量为每60ml 体系中加入2. 5ml-8.Oml。戊二醛在喷雾干燥中被除去。
[0009] 本发明中还可以加入甘露醇，壳聚糖与甘露醇的比例为3 : 1-1 : 10,优选为 2 : 1-1 : 5〇
[0010] 本发明的另一目的是提供壳聚糖包封液晶纳米粒所得微球的制备方法。具体如 下：
[0011] 1)将5gGMO于35°C-40°c加热熔融，加入药物溶解或分散均匀。
[0012] 2)将上述熔融的含药GMO加入持续搅拌的泊洛沙姆407水溶液50ml，采用均质器 进行高压均质，均质压力为1200bar，均质循环5次，得到载药液晶纳米粒。
[0013] 3)将壳聚糖用酸溶解成一定浓度的壳聚糖水溶液50ml，加入至IOml载药液晶纳 米粒中，搅拌均匀。
[0014] 4)加入戊二醛溶液，在37°C反应2h-4h。
[0015] 5)将所得混合物用喷雾干燥仪进行喷雾干燥，或者在上述混合物中加入甘露醇， 搅拌溶解后进行喷雾干燥。
[0016] 本发明中公开的壳聚糖包封液晶纳米粒所得微球具有微球圆整度好等优点。体 外释放结果表明，壳聚糖包封液晶纳米粒所得微球具有明显的缓释作用。大鼠口服体内药 物动力学研究结果表明，相对于原形药物，壳聚糖包封辛伐他汀液晶纳米粒所得微球的相 对生物利用度为414. 7%，壳聚糖包封长春西汀液晶纳米粒所得微球的相对生物利用度为 498. 7%，显著提高了药物的口服生物利用度。相对于药物的液晶纳米粒，壳聚糖包封液晶 纳米粒所得微球也极显著地提高了生物利用度。
【附图说明】
[0017]图1是壳聚糖包封辛伐他汀液晶纳米粒所得微球的扫描电镜图。
[0018]图2是壳聚糖包封长春西汀液晶纳米粒所得微球的扫描电镜图。
[0019]图3是壳聚糖包封辛伐他汀液晶纳米粒所得微球的体外释放曲线图。
[0020] 图4是壳聚糖包封长春西汀液晶纳米粒所得微球的体外释放曲线图。
[0021] 图5是格列齐特、盐酸阿夫唑嗪、富马酸喹硫平、盐酸哌甲酯、茶碱微球的体外释 放曲线图。
[0022] 图6是异丁司特、乌拉地尔、氨茶碱、盐酸文拉法辛、盐酸坦洛新微球的体外释放 曲线图。
[0023] 图7是盐酸尼卡地平、盐酸伐昔洛韦、盐酸奥昔布宁、盐酸安非他酮、氢溴酸加兰 他敏微球的体外释放曲线图。
[0024]图8是马来酸曲美布汀、泛昔洛韦、甲磺酸二氢麦角碱、氟伐他汀钠、西洛他唑微 球的体外释放曲线图。
[0025] 图9是左乙拉西坦、马来酸氟吡汀、雷诺嗪、咪唑斯汀、卡马西平微球的体外释放 曲线图。
[0026] 图10是帕利哌酮、吡贝地尔、盐酸罗匹尼罗、别嘌醇、盐酸胍法辛微球的体外释放 曲线图。
[0027] 图11是辛伐他汀液晶纳米粒（cubosomes)和微球的大鼠血药浓度经时曲线。
[0028]图12是长春西汀液晶纳米粒（cubosomes)和微球的大鼠血药浓度经时曲线。
[0029] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或 按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域 熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用 于本发明方法中。
【具体实施方式】
[0030] 实施例1:壳聚糖包封辛伐他汀液晶纳米粒所得微球的制备
[0031] 将5gGMO于37°C熔融，加入辛伐他汀约200mg，搅拌至完全溶解，在搅拌条件下， 将其滴加到50mlL5%泊洛沙姆407溶液（37°C)中，搅拌一定时间，于均质压力1200bar 下，循环5次，即得载药cubosomes;将分子量为5万的壳聚糖溶解于1. 0%醋酸溶液中，得 到浓度为5. 0%的壳聚糖溶液；量取IOml的辛伐他汀液晶纳米粒溶液与50ml壳聚糖溶液 混合，于室温下搅拌混合均匀，加入浓度为2. 0 %的戊二醛溶液2. 5ml，于37°C反应2h，加入 甘露醇（壳聚糖：甘露醇=1 : 1)，搅拌均匀，喷雾干燥（进口温度ll〇°C)，得到喷干的壳 聚糖包封辛伐他汀液晶纳米粒所得微球。
[0032] 本发明的壳聚糖包封辛伐他汀液晶纳米粒所得微球，具有如下特征：
[0033] (1)扫描电镜（SEM)
[0034] 仪器：S-：M00NII扫描电镜（Hitachi，Japan)
[0035] 参数：20.OkV，25mA，IOmin
[0036] 结果：壳聚糖包封辛伐他汀液晶纳米粒所得微球均呈圆整度较好的球体，粒径在 1-10Um之间。
[0037] (2)透射电镜（TEM)
[0038] 仪器：JEM_200CX(JEOL，Japan)
[0039] 结果：壳聚糖包封辛伐他汀液晶纳米粒所得微球再分散于介质中，仍能保持圆整 度较好的微球形态，粒径在3-6ym左右。
[0040] 实施例2:壳聚糖包封长春西汀液晶纳米粒所得微球的制备
[0041] 将5gGMO于37°C熔融，加入长春西汀约150mg，搅拌至完全溶解，在搅拌条件下， 将其滴加到50mlL5%泊洛沙姆407溶液（37°C)中，搅拌一定时间，于均质压力1200bar 下，循环5次，即得载药cubosomes;将分子量为5万的壳聚糖溶解于3. 0%柠檬酸溶液中， 得到浓度为4. 0%的壳聚糖溶液；量取IOml的长春西汀液晶纳米粒溶液与50ml壳聚糖溶 液混合，于室温下搅拌混合均匀，加入浓度为6. 0 %的戊二醛溶液8.Oml，于37°C反应2h，加 入甘露醇（壳聚糖：甘露醇=1 : 1)，搅拌均匀，喷雾干燥（进口温度ll〇°C)，得到喷干的 壳聚糖包封长春