一种组合物及其治疗肝癌的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种包括海兔素和维生素 A或其前药的组合物及 其在治疗肝癌方面的医药用途。
【背景技术】
[0002] 肝细胞癌是中国最常见的恶性肿瘤之一，具有发病隐匿，转移率高，预后较差等特 点。手术虽然是治疗肝癌的首选、也是最有效的方法，但是对于无法手术的患者，化疗是治 疗的主要方法之一。有些患者因为化疗还可以获得手术的机会，延长了生命，提高了生活质 量。但是，化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时，也会对机体正常细胞造成严重损害。因此寻找 一种高效、低毒的抗癌药物成为近年来人们关注的焦点。
[0003] 海兔素是从三列凹顶藻提取物中分离纯化得到的一种溴代倍半萜脂溶性化合 物，分子量为295,结构式如1所示。研究发现，海兔素具有抗炎、抑菌、抗氧化、抗肿瘤等 生物学活性，对乳腺癌、胃癌和S180肉瘤均具有抑制作用（1.海兔素对人乳腺癌SK-BR-3 细胞的抑制作用及机制研究[J];马文龙，梁惠，等；天然产物研究与开发，2012,24(9): 1201-1205。2.海兔素对人胃癌细胞SGC 7901增殖和凋亡的影响[J];刘颖，梁惠，等；中国 药理学通报，2010,26(3) :333-337。3.海兔素对S180荷瘤小鼠的抑瘤活性及其免疫作用 的实验观察[J];刘颖，梁惠，等；中国药理学通报，2006,22(11) :1403-1405。）
[0004]
[0005] β -胡萝卜素（β-Carotene)是类胡萝卜素之一，分子量为537,结构式如2所不， 具有抗氧化、保护视力、促进骨骼生长发育等作用。胡萝卜素是维生素 A的前药；但是 只有当有需要时，人体才会将β -胡萝卜素转换成维他命Α。这一个特征使β -胡萝卜素成 为维生素 A的一个安全来源，不会有因过量摄食而造成维生素 A累积中毒现象。
[0006]
[0007] 迄今还未见有海兔素和β -胡萝卜素对肝癌具有协同作用的研究报道。
【发明内容】
[0008] 针对上述问题，本发明的一个目的在于提供一种包括海兔素和维生素 A或其前 药，尤其是海兔素和胡萝卜素的组合物。该组合物中的两种活性组分协同发挥作用，具 有显著的抗肝癌活性，有望开发出抗肝癌的新药，为医生和患者提供一种新的治疗选择。
[0009] 为了实现上述发明目的，本发明采用了如下的技术方案：
[0010] -种组合物，包括维生素 A或其前药，和海兔素；所述两个组分摩尔比为：
[0011] 维生素 A或其前药：海兔素=1:0. 1~3。
[0012] 优选的，所述组合物中，两个组分摩尔比为：
[0013] 维生素 A或其前药：海兔素=1:0. 15~2. 6。
[0014] 更优选的，所述组合物中，两个组分摩尔比为：
[0015] 维生素 A或其前药：海兔素=1:0. 2~2。
[0016] 上述组合物中，所述维生素A或其前药优选为β -胡萝卜素。
[0017] 本发明的另一目的在于上述组合物在制备治疗肝癌的药物中的应用。
[0018] 本发明还提供一种包括维生素A或其前药，和海兔素的组合物在制备治疗肝癌的 药物中的应用。
[0019] 所述维生素 A或其前药优选为β -胡萝卜素。
[0020] 上述应用中，所述肝癌是指原发性肝癌或继发性肝癌。
[0021] 本发明还有一个目的在于提供一种治疗肝癌的药物，包括上述的组合物。
[0022] 优选的，所述药物还可以包括药学上可以接受的辅料。
[0023] 优选的，所述药物为口服制剂，选自片剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂和口服液中的一 种。
[0024] 本发明还有一个目的在于提供上述治疗肝癌的药物的制备方法，包括将所述组合 物和药学上可以接受的辅料混合，按照本领域常规的方法制备成临床上可以接受的制剂。
[0025] 本发明所述药学上可以接受的辅料，包括（1)稀释剂，例如淀粉、糖粉、糊精、乳 糖、预胶化淀粉、微晶纤维、无机钙盐（如硫酸钙、磷酸氢钙、药用碳酸钙等）、甘露醇等、植 物油、聚乙二醇等；(2)粘合剂，例如蒸馏水、乙醇、淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维 素、甲基纤维素和乙基纤维素、羟丙甲纤维素等；（3)崩解剂，例如干淀粉、羧甲基淀粉钠、 低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠等；(4)润滑剂，例如硬 脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇类、月桂醇硫酸镁等。（5)矫味剂，如蔗糖、 甜菊素等。
[0026] 在用于治疗肝癌时，本发明所述的组合物的施用对象为人或哺乳动物。出于此目 的，本发明所述组合物的摄入的质量或给予的质量，根据组合物中所述组分的纯度、服用对 象的年龄、体重等不同而不同。作为治疗肝癌用，按照成人体重70kg计算，通常每人每天摄 入150-200mg，更优选的每人每天摄入160-180mg。
[0027] β-胡萝卜素是维生素A的前药，其生理活性与维生素A基本一致。因此，本发明 关于所述组合物的活性研究，都以β-胡萝卜素为所述"维生素 A或其前药"的代表。
[0028] 研究发现，β-胡萝卜素和海兔素联合应用时，无论时体外还是体内，都表现出了 协同的抑制肝癌细胞增殖的作用。
[0029] 在体外通过CCK-8法检测β -胡萝卜素和海兔素对人肝癌HepG2细胞株增殖活性 的影响时，β -胡萝卜素或海兔素单独作用ifepG2细胞24h的IC5。值分别为（86. 50±6. 98) 4111〇1凡和（1〇〇.〇5±8.24)11^凡。海兔素合用0-胡萝卜素2〇、4〇、6〇41]1〇1凡时，1〇)。分 别为 Α(80· 97±7· 25)mg/L、Β(21· 46±L 88)mg/L 和 C(18. 91±L 42)mg/L。随着 β-胡萝 卜素剂量的增加，海兔素 IC5。逐渐降低。在图1所示的β-胡萝卜素和海兔素体外作用关 系图中，A点的95 %可信区间与相加线相交，表明两药产生相加作用，而B点和C点，95 %可 信区间与相加线未重叠且在左侧，表明两药产生协同效应，且B点（40 ymol/L β-胡萝卜 素与21. 5mg/L海兔素联用）协同效应最强。说明本发明的组合物具有体外抑制肝癌细胞 增殖的协同作用。
[0030] 本发明的β-胡萝卜素与海兔素的组合物还表现出良好的体内抗肿瘤协同作用。 0-胡萝卜素或海兔素单独作用于荷瘤鼠（肝癌瘤株氏2)，1(：5。值分别为（312.2±38.3) 1^/ kg 和（146.5±16.7)mg/kg。海兔素合用 β-胡萝卜素 100、150、200mg/kg 时，IC5。分别为 A (108. 1 ± 12. 0) mg/kg、B (35. 0 ± 3. 6) mg/kg和 C (28. 7 ± I. 8) mg/kg。随着 β -胡萝卜素剂量 的增加，海兔素 IC5。逐渐降低。在图2所示的β-胡萝卜素和海兔素体内作用关系图中，联 合用药组三点，A点的95%可信区间与相加线相交，表明两药产生相加作用，而B点和C点， 95%可信区间与相加线未重叠且在左侧，表明两药产生协同效应，且B点（150mg/kg β-胡 萝卜素与35. Omg/kg海兔素联用）协同效应最强。说明本发明的组合物具有显著的体内抗 肝癌的协同作用。
[0031] 上述体内外试验都证明，海兔素和以β-胡萝卜素为代表的维生素A或其前药具 有明确的抗肝癌作用，而且相互之间有协同作用，可以以比较小的剂量发挥显著的抗肿瘤 作用。初步的机理研究也表明，本发明的组合物可以明显下调肿瘤组织中MMP-9, VEGF和 PCNA的表达，显著升高荷瘤小鼠血清中IL-6和TNF- α水平，提示β -胡萝卜素与海兔素可 能通过抑制新生血管生成及转移，以及可促进免疫炎性因子的分泌，增强机体免疫功能，从 而发挥协同的抗肝癌作用。因此，本发明所述组合物有望开发成一种有效、低毒的抗肝癌药 物，从而使患者受益。
【附图说明】
[0032] 以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
[0033] 图1显示的是试验例1中的胡萝卜素和海兔素相互作用关系图，其中的实 斜线为两者作用相加线，虚线之间的部分为A点的95%可信区间。A点为β-胡萝卜素 20ymol/L时，海兔素的ED 5Q;B点为β-胡萝卜素40ymol/L时，海兔素的ED5Q;C点为 β -胡萝卜素60 μ mol/L时，海兔素的m)5。。
[0034] 图2显示的是试验例2中各处理组对H印G2细胞凋亡的影响，其中，
[0035] A :对照组；B :21. 5mg/L海兔素 ；C :40 ymol/L β -胡萝卜素 ；D :40 ymol/L β -胡 萝卜素与21. 5mg/L海兔素联用。
[0036] 图3显示的是试验例3中的β -胡萝卜素和海兔素相互作用关系图，其中的实斜 线为两者作用相加线，虚线之间的部分为A点的95%可信区间。A点为β-胡萝卜素 IOOmg/ kg时，海兔素的E：D5();B点为β -胡萝卜素150mg/kg时，海兔素的ED 5();C点为β -胡萝卜素 200mg/kg时，海兔素的ED5。。
[0037] 图4的照片是光学显微镜放大200倍的经染色的肿瘤组织切片，显示的是试验例 4中药物对小鼠 H22肿瘤组织中MMP-9表达的影响，其中，
[0038] A:模型组；B:150mg/kg β-胡萝卜素干预组；(：：35.〇11^/1^海兔素干预组；0: 150mg/kg β -胡萝卜素与35. Omg/kg海兔素联合干预组。
[0039] 图5的照片是光学显微镜放大200倍的经染色的肿瘤组织切片，显示的是试验例 4中药物对小鼠 H22肿瘤组织中VEGF表达的影响，其中，
[0040] A:模型组；B:150mg/kg β-胡萝卜素干预组；C:35.0mg/kg海兔素干预组；D: 150mg/kg β -胡萝卜素与35. Omg/kg海兔素联合干预组。
[0041] 图6的照片是光学显微镜放大200倍的经染色的肿瘤组织切片，显示的是试验例 4中药物对小鼠 H22肿瘤组织中PCNA表达的影响，其中，
[0042] A:模型组；B:150mg/kg β-胡萝卜素干预组；C:35.0mg/kg海兔素干预组；D: 150mg/kg β