用于大量出血的冻干纤维蛋白封闭剂的利记博彩app
【专利说明】
[0001] 相关申请
[0002] 本申请是2009年6月18日提交的美国专利申请第12/487, 057号（授权）的部 分继续申请案，美国专利申请第12/487, 057号已经在2012年11月6日收到授权的通知并 且在2013年2月6日之前支付授权费用。其中阐述的所有说明书、附图和教导都明确地结 合于此作为参考，并且我们要求其中明确地作出的教导的优先权。
技术领域
[0003] 本发明涉及一种方法，以产生的由来自酸溶液中的浓缩desAB纤维蛋白单体或 纤维蛋白II单体的无菌生物相容的冻干desAB纤维蛋白聚合物或纤维蛋白II聚合物组合 物以及冻干凝血酶组成的双组分或双层系统，从而用于作为粘合封闭剂组分和止血剂的应 用。标有制备（本发明）商标的ClotBlock呈现为各种实体形状和厚度，ClotBlock可以 在使用和不使用按压的情况下用于止血或在体内封闭组织。它尤其涉及到在没有可生物降 解的支撑件或在应用于出血伤口上之后可分离的支撑件的情况下需要粘贴纤维蛋白凝块， 以封闭组织和控制血管出血、表皮出血，骨出血或内部出血。本发明可以包括由透明质酸或 其它可生物降解的聚合物制成的可生物降解的支撑件。
【背景技术】
[0004] 器官切除、创伤或大面积皮肤创伤的严重出血有时难以控制。近来，基于纤维蛋白 的贴片已经经过测试，以使用纤维素或明胶支撑件封闭IV/V级创伤。然而，这些技术不能 应用于某些类型的步骤，诸如介入放射学、整形外科或腹腔镜手术。此外，这些产品所使用 的"支撑件"在生物降解之前留在体内，造成对异物的严重的炎症反应。
[0005] 当前的解决方案和限制。通常地，合成粘合剂用于血管或肺血管的紧密封闭以及 用于"粘合"皮肤切口的边缘。通常在伤口形成瘢痕之后，通过生物降解、吸收或通过以结 痂的形式简单脱离而消除这些胶。已经开发各种技术用于组织粘合剂的制备。其中一些是 合成来源的，诸如基于氰基丙烯酸酯（2-丁基氰基丙烯酸酯，2-辛基氰基丙烯酸酯）的胶、 或合成的聚合物以及含有生物材料（诸如另外具有止血特性的胶原蛋白或纤维蛋白）的其 他组织粘合剂。
[0006] 由于它们的止血和粘合性能，封闭剂，和特别是纤维蛋白封闭剂在过去的二十年 间已经广泛用于大多数外科专业，以由于当它们聚合（1，2, 3)时粘附到人体组织的能力而 减少失血和术后出血。这些化合物用于封闭或加固已经被缝合或钉合的伤口的封闭；它们 也可以与在损伤区域上方按压一起使用。纤维蛋白封闭剂是模拟凝血级联的最后步骤的生 物粘合剂。（4) 一方面，封闭剂的主要组分是的纤维蛋白原、血浆蛋白和XIII因子，以及另一 方面是凝血酶和氯化钙。组分通常提取自人血浆或通过重组技术产生。混合纤维蛋白原和 凝血酶产生聚合物屏障（纤维蛋白），聚合物屏障模拟天然凝血级联的最后阶段，以形成类 似于生理凝块的结构化纤维蛋白凝块。
[0007] 存在几个可用的商业产品（Floseal、Gelfoam、Evicel、Bioglue、surgicel、 tachoseal等）（3,5)。然而，这些产品具有显著的局限性，这阻碍了它们在手术中的严重出 血的情况下和急诊医学、整形外科和介入放射学以及腹腔镜手术中的广泛使用。用于腔内 出血的所有现有的止血剂被设计为用作轻度至中度出血中的助剂并且需要硬按压。在开发 和/或使用用于最低限度的可按压出血的组织粘合剂和封闭剂组合物中遇到的主要限制 之一是它们不能在大量出血时与组织形成足够强的键合，和不能在应用10分钟内产生稳 定的凝块。因此，组织粘合剂和封闭剂必须与按压方法、缝合和/或缝钉和粘合剂贴片组合 使用，以便减少可接受的性能所需的组织键合强度。然而，有许多情况下，使用强按压、缝合 和/或缝钉是不希望的、不恰当的或不可能的（例如，在骨、介入放射学中）。
[0008] 目前可选的方法：为了形成抵抗血液流动的物理屏障，粘合剂基质必须在几秒钟 内形成牢固的纤维蛋白界面，使之在流动的血液中与组织键合在一起，并保留在撕裂部位 以形成凝块。每个产品以正方形、圆形贴附到球体、圆柱体或椎体的表示形式附着到人体组 织中的能力与组合物和生产纤维蛋白的方法以及它与凝血酶的相互作用（组合）以刺激凝 血级联相关。该技术的重要方面是，绕过纤维蛋白原的裂解过程，以产生纤维蛋白单体和它 的随后的聚合、冻干并能够吸收血液以形成纤维蛋白凝块的能力。该试剂的血块形成过程 从已经稳定的I型纤维蛋白聚合物开始，I型纤维蛋白聚合物将血液吸收到含有必要组分 的冻干交联聚合物以刺激凝血级联（凝血酶）并且形成物理屏障，物理屏障在应用的两分 钟内转变成功能纤维蛋白凝块。（6)
[0009] 在我们的方法中，这些结果通过以下步骤获得：a)应用聚合交联的冻干纤维蛋白 网络，聚合交联的冻干纤维蛋白网络吸收血液以形成非常粘的凝胶状基质，凝胶状基质粘 附于撕裂组织；和b)结合凝血酶层，凝血酶层有助于快速形成牢固的纤维蛋白凝块，纤维 蛋白凝块由掺入在产品中的非钙依赖的转谷氨酰胺酶以及由血中的XIII因子稳定。
[0010] 位于可生物降解的可去除的支持件上方的随后的层的冻干过程促进它的应用，并 且允许长期贮存，运输和准备。
[0011] 此外，尚未未开发基于纤维蛋白的产品来解决阻止深伤口或大血管床皮肤伤口出 血，这导致如此严重的出血而通常需要缝线或缝合。
[0012] 组合物。目前技术的所有形式一通过改变pH值来使酸溶液中的正方形、球体、圆 柱体或圆锥体结合的纤维蛋白单体，在活化的转谷氨酰胺酶（非钙依赖）和XIII因子（钙 依赖）（钙依赖和非钙依赖）以及氯化钙的存在下聚合，PH由缓冲溶液中和。一旦纤维蛋 白聚合物形成并且交联，凝血酶的第二层即被结合并且随后冻干。（图1)
[0013] 单体可以与约1%至约5%体积的甘油混合，以实现适于应用的类型的特定的粘 弹性轮廓。通过块状物对血液的吸收使冻干纤维蛋白变成凝胶，该凝胶在损伤（7)的位点 处形成纤维蛋白凝块。
[0014] 在凝结剂的条件下，血液中的非钙依赖的转谷氨酰胺酶和活化XIII因子通过由 共价键稳定纤维蛋白凝块而有助于该过程。
[0015] 关键属性。聚合/粘合。封闭伤口的纤维蛋白凝胶是由冻干的双层材料吸收血液 而形成，冻干的双层材料从固体变为凝胶状态时保持共价键。凝块是机械稳定的，良好地 并入到伤口，并且与非交联的凝块[8]或其他纤维蛋白封闭剂相比，能更耐纤溶酶的溶解。 包括非钙依赖的转谷氨酰胺酶有利于转谷氨酰胺酶介导的纤维蛋白中的aC-域聚合物的 交联，从而促进整合素集群，并且从而增加细胞粘附和扩散，这刺激纤维蛋白结合内皮细胞
[9]上的avb3-、avb5-和a5bl整合素。寡聚反应还经由黏着斑激酶（FAK)和细胞外信号调 节激酶（ERK)促进整合素依赖的细胞信号传导，这导致增加的细胞粘附和细胞迀移[10]。 钙离子的存在增强了从炎性反应到凝血级联（第一阶段）的进程，并且激活XIII因子。
[0016] 已经在体外和体内对活体人体组织的粘附特性和推荐试剂的聚合动力学进行了 测试。获得的数据提供ClotBlock止血的各种展示的能力的充分证据，并且以最小的按压 实现实体器官或软组织中的诱发的腹腔内伤口的止血。并且，在猪模型中，能停止膝关节和 髋关节置换中的髓内骨出血。冻干纤维蛋白II是由纤维蛋白II单体聚合获得：美国专利申 请12/487057(授权）描述了制备纤维蛋白单体的方法。ClotBlock封闭剂组合物使用从纤 维蛋白单体的中和作用中获得的冻干的纤维蛋白聚合物。本专利申请描述的纤维蛋白II的 部分的组合物和生产方法以及聚合物的中和与交联的过程对所提出的技术的性能非常重 要，技术的性能取决于纤维蛋白本身的特性（纤维厚度、分支点数目、孔隙率和渗透性）以 及限定凝血因子的其它聚合特性。通过ClotBlock生成的凝块产生厚纤维的不透明基质， 并且以比透明基质更快的速度进行管形成。凝血酶的浓度对于产生纤维蛋白单体，并且因 此FPA的释放速率也对聚合过程具有重要的影响。为ClotBlock构建的所描述的浓度、稀 释液和pH值以加快的速率产生最佳的纤维蛋白结构。ClotBlock介绍
[0017] 纤维蛋白聚合物可以以各种大小、厚度和形式生产和冻干，以适应于应用的类型 (图2A、图2B、图2C)。它可以配置成1/4英寸直径的小球体或圆柱体以通过腹腔镜口或在 介入放射学中的血管被引入；它也可以模制成圆形或l/4、l/2al厚度的各种尺寸的正方形 平坦固体块，用于脾脏裂伤或脏器切除，或放置在粘性绷带上方以覆盖深层皮肤切口。冻干 形式也可以浸泡在水中，并且用作封闭膏或凝胶。
【发明内容】
[0018] 本发明的领域在于生物粘合剂和组织封闭剂，生物粘合剂和组织封闭剂是可生物 降解和无毒的，旨在用于治疗用途，例如，作为助剂用于剖腹或腹腔镜手术的止血，或作为 矫形外科、创伤（脾裂伤）、介入放射学和大血管床伤口的主要治疗。
[0019] -方面，本发明涉及生物相容性粘合剂纤维蛋白聚合物，其是生物可再吸收和无 毒的，用于外科或治疗用途。它也涉及含有生物活性物质的双层应用，它可以在给定的位点 释放以刺激凝血。另一方面，本发明涉及一种用于生产这种粘合剂聚合物的工艺。
[0020] 大量的体内研究表明，ClotBlock对于控制中度至重度出血是很好的止血剂候选。 它的不同的展示最大化在各种类型的外科手术和创伤应用的止血效果。该试剂耐用，易于 储存，造成最小的风险，需少量的培训即可使用，并且是针对中度至重度出血是高效的。
【附图说明】
[0021] 图1示出了 ClotBlock层分布。
[0022] 图2示出了可能的形状：A球体和圆柱体；B贴片或块；C绷带。
[0023] 图3示出了 Clotcake与T